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Gendepot/amfiEco PCR Premix , P0702/P0702-480-5x96 rxns
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Robust PCRDesigned, manufactured, and tested to enable robust PCR
Direct LoadingLoad directly to gel from thermocycler No additional loading buffer needed Separates into 2 colors during gel electrophoresis
ApplicationRobust Routin PCR
amfiEco PCR Premix combines amfiEco Taq DNA Polymerase Mix with all the reagents required for successful PCR, premixed and dried in single-use aliquots. The lyophilized format eliminates the need to thaw reagents. To perform PCR, simply add water, primers, and template to resuspend the reaction mixture, and cycle.
For added convenience, amfiEco PCR Premix contains a premixed red and yellow loading dyes to allow loading of PCR product directly on a gel after thermal cycling, minimizing pipetting steps and providing easy visualization of sample. The final volume of each reaction, including primers, template, and water, is 25ul.
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蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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3 应用由于FQ-PCR具有高灵敏性,高特异性和高精确性的特点,目前,该项技术已被应用于病原体测定、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性的研究等多个领域。3.1 病原体测定由于PCR技术的问世,使得病原体检测能够快速而方便的进行。但由于 查看更多>
荧光定量PCR最常用的方法是DNA结合染料SYBR GreenⅠ的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法,在这里主要介绍这2种方法,其它方法请参考其它荧光定量PCR资料。... 查看更多>
LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素)或 JOE(6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素)标记。在没有特异模板的反应中,LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量,定量范围可以从不足 100 到 107 个拷贝。运用 FAM 和 JOE 标记的引物,提供的检测平台可以同时检测两个基因。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。 查看更多>
北京众智领先科技有限公司在发布的荧光定量pcr供应信息,浏览与荧光定量pcr相关的产品或在搜索更多与荧光定量pcr相关的内容。 查看更多>
定量PCR仪也称医用PCR分析系统,PCR扩增仪,定量PCR仪,实时荧光定量pcr仪等。医流商城定量PCR分类包含医疗器械分类目录6840-08临床检验分析仪器|基因和生命科学仪器|医用PCR分析系统,Ⅲ类管理,此类别有定量功能的pcr仪;也包含医疗器械分类目录6840-08临床检验分析仪器|基因和生命科学仪器|PCR扩增仪,Ⅱ类管理,此类别无定量功能。Ⅱ类PCR扩增仪随着技术的发展,已逐步被淘汰,所以商城定量PCR主要产品是Ⅲ类医用PCR分析系统。与生物器材分类中的基因扩增仪主要区别是生物器材中基因扩增 查看更多>
比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面粘结而成。所以使用时应注意以下几点:1 拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。2 不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然 查看更多>
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RFLP法1)常规制备DNA盐析法1.用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2.每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次,再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3.加50μl 10% SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质,37℃过夜或55℃ 3h。4.加0.25体积饱和醋酸钠溶液,剧烈摇动15s。5.2000 查看更多>
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江苏舜天国际集团机械进出口有限公司受招标人委托对下列产品及服务进行国际公开竞争性招标,于2018-07-18在中国国际招标网公告。本次招标采用传统招标方式,现邀请合格投标人参加投标。1、招标条件项目概况:江苏如东高新生物科技有限公司实验设备采购项目资金到位或资金来源落实情况:资金已到位项目已具备招标条件的说明:方案已落实2、招标内容招标项目编号:1802-184007253DSJ/07招标项目名称:全自动荧光定量PCR系统采购项目项目实 查看更多>
2018-10-17
近日,明德生物自主研发的EB病毒核酸检测试剂盒(荧光定量PCR法)顺利通过国家食品药品监督管理局审核,获得注册证。注册证号为国械注准20183400411。EB病毒又称人类疱疹病毒4型,主要通过唾液传播,6岁以下多为不典型感染,15-30岁发病,与传染性单核细胞增多症、鼻咽癌以及儿童淋巴瘤等的发生密切相关。目前尚无有效的疫苗可预防其感染。EB病毒感染症状与感冒类似,但抗病毒治疗效果较差,多以对症治疗为主。EB病毒的检测目前分为两种:病... 查看更多>
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最近要做realtimePCR,taqman探针法,没有买市场上的产品,可否先用普通taq酶试试?
这样设想的前提是因为,普通Taq酶也具有5‘-3’外切酶活性,如果可以的话,与普通PCR相比,反应体系需要做什么样的改动呢?
用的是ABI的机器。
定量pcr主要测的是基因的表达水平,比如不同时期 基因的表达有所差异,具体差异了多少倍,就可以使用了。
半定量RT-PCR与定量RT-PCR的区别是半定量RT-PCR操作简便,可快速推测样品中特异mRNA的相对数量;而定量RT-PCB可实时定量,较半定RT-PCB更准确。

半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。
定量RT-PCR(quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或两步法,在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

半定量RT-PCR需要跑电泳,根据条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低或者是表达量的高低,而定量RT-PCR则无需电泳可以实时监测整个PCR的全程并且由给出的Ct值及Standard Curve来判断gene拷贝数的高低。
ROX Reference Dye,可用于需要Dye的Real Time PCR扩增仪,用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪上,用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差.并不是每次都会用到.
一般有ROX Reference Dye和ROX Reference Dye II两种,针对不同的PCR仪.一般ABI PRISM 7000/7700/7900HT和7300 Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye,而7500 Real-Time PCR System和7500 Fast Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II.其它牌子如Thermal Cycler Dice Real Time System、LightCycler 等Real Time PCR扩增仪时不必使用.
我明年就毕业了,可是论文还没投,快急的不行了,做的实时荧光绝对定量PCR,跑标曲带样用的Bio-RadIQ5机子,可是结果出来不知道分析的是哪个指标(ct,ctmean,sq,sqmean,logsq),不会处理数据,求高人指点啊,拜托了拜托了,好人好报啊
Taq DNA聚合酶使用说明书123
姆姆EH172017-10-03
1单位(U)Taq DNA 聚合酶力定义74°C、30钟内性化马哈鱼精DNA作模板/引物10nmol脱氧核苷酸掺入酸容物质所需酶量图" class="ikqb_img_alink">
realtimeRT-PCR,测了模板CDNA浓度1800ng/ml,纯度在1.96左右,但是检测内参GAPDH,CT值都有30多,目的基因的CT更大了。请问问题在哪里,CT值大不就是因为模板量不够吗,可是现在这个浓度显然是充足的,怎么解释?
RNA 定量的程序很多, 比较用了Ribogree,Agilent BioAnalyser,spectrophotometer,Nanodrop and the BioRad Experion 来定量同样的样品。结果显示没有哪两种方法得到同样的分析数据。所以用不同的方法进行定量是不明智的。因此,我们需要用统一套定量分析方法来完成所有RNA样品的评价。
RNA 质量
RNA 质量主要包括RNA的纯度(没有蛋白质和DNA的污染)以及完整性。传统的RNA质量的评价通过分析A260/A280的比值或者对琼脂糖凝胶电泳rRNA的条带的分析。Agilent Bioanalyser/BioRad Experion 微流体毛细电泳系统也是一种较新的分析方法。Agilent的2100也是一种十分好的分析RNA质量的方法,它通过分析18S以及28S rRNA的分析图谱,通过图谱来反应RNA的量和完整性,其完整性通过完整性系数(RIN)来反应。样品的RINs在10-4之间。10代表完整的RNA,4代表没有完整的rRNA带。
由于以上的方法并非100%准确定反应mRNA的完整性,因为他们只是反应rRNA的量来间接测定mRNA的完整性。这里推荐一种方法:采用GAPDH的3’:5’分析法。
我们使用oligo dT进行逆转录,然后对逆转录的cDNA用multiplex荧光定量评价。设计三个taqman探针来定量三种相同大小的扩增产物。探针设计的位点分别位于3’;5’以及中部。扩增产物的之间的比值反应RNA的完整性。如果3’;5’的比值在1,反应较高度完整性,如果高于5说明降解。
QRT-PCR抑制物的组成
QRT-PCR抑制物严重减少了PCR的灵敏度以及热动力学反应,高度的抑制还导致假阴性的结果。
抑制物的来源:生物样品的核酸抽提以及共沉淀中的混合物,盐离子,尿素,血红素,heparin以及IgG.
是否有抑制物的评价体系:
1.通过对目的样品进行梯度稀释进行PCR扩增效率的检测
2.通过内部扩增对照来反应样品处理过程中样本的情况
3.用细菌检测临床样品的抑制
4.通过标准人工合成的扩增进行RT-PCR来反应目标检测物的抑制情况
反转录反应系统
1.RT和PCR单一酶系统
2.RT和PCR分离的酶系统
3.RNA逆转录引物的选择
引物主要有三种:
1.随机引物:随机引物,特别是6nt引物对所有的靶位点不产生十分稳定一致的结果,建议使用15nt的随机引物.
2.oligo-dT:只能用于mRNA完整的样品,特别有polyA .而且对于一些特殊的变异体以及较长的3’UTR的区域比较困难
3.特异引物:最特异最灵敏的方法。特别RNA量足够情况下建议使用此法。
荧光定量PCR是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。|||原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。|||这个还真不大清楚|||貌似前者是定量,后者属于半定量。|||简单的讲PCR技术最早是用于扩增一段特异的PCR片段,用于克隆、测序等实验,后来也将其用于样本中特异的PCR片段有无或非很粗的相对定量,而荧光定量PCR技术则是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量,是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。前些年有人讲过普通PCR后,通过电泳也可以进行定量,其实是将PCR产物的定量与PCR样本中模板定量相混了。近两年没有人再讲这类的话了。|||引物设计是sybr定量PCR法的最大难点,机会好的话,设计一对引物就能得到很好的结果,机会不好的话7、8对引物也出不来,我就遇到过这样的问题,我在prime5.0上设计了8对引物,符合实验要求的一对也没有,我把退火温度提高到了68度也没能把引物二聚体搞定,后来我想通了,可能我这对引物把其它序列扩增出来了,而且扩增效率很高(我一个同学设计了十几对才找到一对好用的)。记住primer5.0设计出来的100%好的引物,到了定量PCR上不一定好使,这是我最大的经验。定量pCR的引物对匹配度要求不高,我现在使用的引物就有几个碱基不匹配,但实验结果很好。有一个办法可以帮助我们绕过引物设计这道坎,直接到罗氏网站上专区上找引物。罗氏网站在线有一个引物设计软件,你只要找好你目的基因的种属,输入你的片段序列就可以得到你要的引物。这个软件有很大的好处,他会自动地把你的种属序列背景扣除,最大限度地去除引物二聚体产生的可以。
第一次做这方面的实验,这张图的右半个不会选,希望大家帮帮忙

请教园友:

一般做mRNA表达的时候,需要注意提取的RNA中是否有DNA污染,或者通过设计跨内含子的引物来解决。那么,检测MmiRNA的时候,需要注意RNA中DNA污染的问题么?

各位战友

我实验室用的是Therimosci公司的SYBR试剂盒,说明书上要求DNA的量<500ng

但是测得CDNA浓度都在1000-2000多ng/ul

我第一次没注意500ng的问题就直接加了2ulcDNA结果CT值非常高

如果按500ng算,加的就不到1ul的量了,这样CT不是更高了嘛这样加对吗??

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