Details
Viagen DirectPCR® DNA Extraction System is a single-tube system forrapid preparation of DNA from mouse tails, ear pieces, yolk sac, andculture cells. The patent-pending components developed by scientists atViagen Biotech Inc. allow the resulting DNA extracts to be compatiblewith genomic PCR for genotyping. Crude extracts of biological samplesare not compatible with many molecular biology-grade reactions such aspolymerase chain reaction (PCR), in part due to inhibitors contained incrude extracts. The DirectPCR reagents not only mediate the rapid lysisof biological samples but also contain inhibitors that effectivelysuppress the inhibitory activities of crude lysates for PCRamplification, while maximally maintaining the integrity of releasedgenomic DNA. The patent-pending simple procedure completely eliminateany solution transfer or tube-opening steps, providing you withsubstantial extra time.
Brief procedure1. Lyse tails in DirectPCR® Lysis Reagent.2. Incubate for 45 min at 85°C.3. PCR genotyping with 1 μl lysates.
Detailed protocols: Tail, Ear, Yolk Sac, and Cultured cells.
DirectPCR® system offers advantages over conventional protocols that include:·Time saving: Less hands-on time. Crude tail lysates for PCR.·Money saving: Cost-effective reactions. ·Safe: No organic reagents. ·Environmental:Lesswaste (organic reagents, tubes, tips, etc...) ·Reliable and efficient: Virtually 100% success rate with high yields.
DirectPCR Lysis Reagent (cell)
301-C 50ml cultured cells
302-C 100ml cultured cells
Viagen生產快速溶解細胞組織樣品，提供DirectPCRLysisReagents多種樣品，包含老鼠尾巴、耳朵、細胞，卵黃囊genomicDNA，適合各廠牌的PCR酵素快速分析。只需要1µllysates.即可快速執行genotyping分析。
ViaGen生物技术DirectPCR裂解试剂是一条完整的生产线用于快速、方便、可靠地从小鼠尾巴、耳朵、卵黄囊和培养细胞中提取DNA。
世界顶级实验材料供应商viagenbiotech正式授权苏州蚂蚁淘为其中国代理，viagenbiotech在一直是行业的标杆,一直为广大科研客户提供最为优质的产品和服务,苏州蚂蚁淘一直秉承为中国科研客户带来最好的产品，最好的服务，签约viagenbiotech就是为了给广大科研客户带来更加完善的产品和服务,您的满意将是我们最大的收获viagenbiotech中国代理,viagenbiotech上海代理，viagenbiotech北京代理，viagenbiotech广东代理，viagenbiotech江苏代理viagenbiotech湖北代理,viagenbiotech天津,viagenbiotech黑龙江代理,viagenbiotech内蒙古代理,viagenbiotech吉林代理,viagenbiotech福建代理,viagenbiotech江苏代理,viagenbiotech浙江代理,viagenbiotech四川代理,ViagenBiotechInc.是创新的DNA提取技术和生命科学研究产品的领先供应商。ViagenDirectPCRDNA提取系统是一种单管系统，用于从小鼠尾巴，耳朵片，卵黄囊和培养细胞中快速制备DNA。由ViagenBiotechInc.的科学家开发的正在申请专利的组件允许得到的DNA提取物与用于基因分型的基因组PCR相容。生物样品的粗提取物与许多分子生物学级反应（如聚合酶链反应（PCR））不相容，部分原因是粗提物中含有抑制剂。DirectPCR试剂不仅介导生物样品的快速溶解，而且还含有有效抑制粗裂解物对PCR扩增的抑制活性的抑制剂，同时最大限度地保持了释放的基因组DNA的完整性。该过程完全消除了任何溶液转移或开管步骤，节省了大量的时间和精力。DirectPCR试剂每尾只花费26美分，可以节省任何使用量。Viagenbiotech致力于简便快速提取和制备核酸（DNA/RNA），以批量、快速进行基因分析。公司拥有的专利技术不仅加快样品的裂解，而且降低了粗提物中PCR抑制因素，因而使DNA提取与PCR基因分析完美兼容，样品经一步消化后即可进行PCR扩增，并且保证了基因组的完整性。DirectPCRLysisReagent(MouseTail)100ml快速概述目录号：102-T最多500尾（100ml）在4℃下稳定长达12个月描述ViagenDirectPCRDNAExtractionSystemisasingle-tubesystemforrapidpreparationofDNAfrommousetails,earpieces,yolksac,andculturecells.Thepatent-pendingcomponentsdevelopedbyscientistsatViagenBiotechInc.allowtheresultingDNAextractstobecompatiblewithgenomicPCRforgenotyping.Crudeextractsofbiologicalsamplesarenotcompatiblewithmanymolecularbiology-gradereactionssuchaspolymerasechainreaction(PCR),inpartduetoinhibitorscontainedincrudeextracts.TheDirectPCRreagentsnotonlymediatetherapidlysisofbiologicalsamplesbutalsocontaininhibitorsthateffectivelysuppresstheinhibitoryactivitiesofcrudelysatesforPCRamplification,whilemaximallymaintainingtheintegrityofreleasedgenomicDNA.Thepatent-pendingsimpleprocedurecompletelyeliminateanysolutiontransferortube-openingsteps,providingyouwithsubstancialextratime.Briefprocedure1.LysetailsinDirectPCRLysisReagent.2.Incubatefor45minat85°C.3.PCRgenotypingwith1μllysates.Detailedprotocols:Tail,Ear,YolkSac,andCulturedcells.DirectPCRsystemoffersadvantagesoverconventionalprotocolsthatinclude:Timesaving:Lesshands-ontime.CrudetaillysatesforPCR.Moneysaving:Cost-effectivereactions.Safe:Noorganicreagents.Environmental:Lesswaste(organicreagents,tubes,tips,etc...)Reliableandefficient:Virtually100%successratewithhighyields.DirectPCRLysisReagent(mousetail)101-T50ml(250mousetails).102-T100ml(500mousetails).我们公司最大优势是强大的采购，1：基本什么都能进口，血清，抗体，耗材，还有部分限制进口的，2：货品全，现经营过700多个品牌，基本所有生物试剂耗材都可以进口，特别是冷偏的产品那就更有优势，3：提供加急服务，一般1-2周到货，超过时限加急费全免4：价格公道，绝大部分价格有优势，当然不能保证100%产品都是价格最低,因为价格最低意味着没有服务.5：良好的信誉，大部分客户我们提供货到付款服务，客户包括清华，北大交大复旦，中山等100多所大学，ROCHE，阿斯利康，国药，fisher等500多家公司6：我们独家代理的品牌有：AntibodyResearchCorporation，arcticzymes，Biorelevant，AmberGen,Inc.，clemente-associates，clodronateliposomes，ColumbiaBiosciences，enzymeresearch，GeneBridgesGmbH，Genovis，AmberGen,Inc.BiotechnologyGmbH，HaematologicTechnologiesHTIHaemtech，hookelabs，Immudex，InnovativeResearchofAmerica，inspiralis，ListBiologicalLaboratories,Inc.，lumafluor，Microsurfaces，multiplicom，nanotools，Pel-FreezBiologicals，pentapharm，progen，ProteinArk，QA-Bio,Inc，QA-Bio,IncQuickZymeBiosciences，Teknova，TriLinkBioTechnologies,Inc.，ZyagenLaboratories等7：我们还是invitrogen,qiagen,MidlandBioProductsCorporationam,sigma;neb,roche,merck,rnd,BD,GE,pierce,BioLegend等知名大品牌批发，欢迎合作。
ViagenBiotechInc.isaleadingproviderofinnovativeDNAextractiontechnologiesandproductsforlifescienceresearch.ViagenDirectPCR®DNAExtractionSystemisasingle-tubesystemforrapidpreparationofDNAfrommousetails,earpieces,yolksac,andculturecells. Thepatent-pendingcomponentsdevelopedbyscientistsatViagenBiotechInc.allowtheresultingDNAextractstobecompatiblewithgenomicPCRforgenotyping.Crudeextractsofbiologicalsamplesarenotcompatiblewithmanymolecularbiology-gradereactionssuchaspolymerasechainreaction(PCR),inpartduetoinhibitorscontainedincrudeextracts. TheDirectPCRreagentsnotonlymediatetherapidlysisofbiologicalsamplesbutalsocontaininhibitorsthateffectivelysuppresstheinhibitoryactivitiesofcrudelysatesforPCRamplification,whilemaximallymaintainingtheintegrityofreleasedgenomicDNA.Theprocedurecompletelyeliminatesanysolutiontransferortube-openingsteps,savingasubstantialamountoftimeandeffort.DirectPCRreagentscostonly26centspertail,providingsavingsatanyusagevolume.
ViagenBiotechInc.是一家为生命科学研究提供DNA提取技术和产品的*供应商。ViagenDirectPCR®DNA提取系统是一种单管系统，用于从小鼠尾巴，耳朵，卵黄囊和培养细胞中快速制备DNA。由ViagenBiotechInc.的科学家开发的正在申请专li的组件使得所得的DNA提取物与基因组PCR相容，可用于基因分型。生物样品的粗提物与许多分子生物学级反应如聚合酶链反应（PCR）不相容，部分原因是粗提物中含有抑制剂。DirectPCR试剂不仅介导生物样品的快速裂解，而且还含有抑制剂，其有效抑制粗裂解物对PCR扩增的抑制活性，同时zui大程度地维持释放的基因组DNA的完整性。该程序完全消除了任何溶液转移或管打开步骤，节省了大量的时间和精力。我们的产品销往学术研究市场，生物技术公司和制药公司。 详细产品列表：Viagen全国代理 产品 货号 规格 价格 102-T 100ml $149.00 101-T 50ml 402-E 50ml $149.00 302-C 100ml $149.00 202-Y 100ml $149.00 505-PKP 100mg $85.00 501-PK 5ml $99.00 602-P 100ml $295.00 21141 1mlvial $59.00 24073 0.5ml $35.00 24073-5 2.5ml $160.00 24075 50μg $35.00 24076 50μg $39.00 24071 50μg $59.00 24072 50μg $49.00
DirectPCRLysisReagent(MouseTail)
DirectPCRLysisReagent(MouseTail)
$85.00
DirectPCRLysisReagent(Ear)
DirectPCRLysisReagent(Cell)
DirectPCRLysisReagent(YolkSac)
ProteinaseKPowder
ProteinaseKSolution(20mg/ml)
E-PrepDNAExtractionReagent
NucleicAcidStainingSolution
100DNAMarker
100DNAMarkerSet
1kbplusDNAMarker
15kbDNAMarker
20bpDNAMarker
50bpplusDNAMarker
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
组织用Trizol法提取总RNA浓度、纯度都很好，但逆转录后跑PCR，CT值偏高，内参的在22-27之间，目的基因在30-36之间，不知道是怎么回事，如何来解决，求高手赐教。我用的Takara的试剂盒。
在另外的一组管子中，加入已知拷贝数的DNA同时扩增，每个管子中加入的数量是不同的，但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。
PCR反应完成后，把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线，再把待测样本的CT值和该标准曲线比对，就可以得到样本中的起始拷贝数了
PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
恒温PCR和实时荧光定量PCR的不同，是不同在实时荧光定量PCR的系统中加入了荧光染料（SYBR Green 或Taqman 探针等等）。以SYBR Green为例，这种染料可以结合在双链的DNA上，当PCR不断进行时，每一次退火生成的双链DNA也在增加，荧光染料结合也越多，荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头，可以定量检测荧光的强度，转换成数值。这样就可以实时记录反映体系中DNA的反应情况。
荧光PCR更有优势，因为荧光PCR灵敏度高于恒温PCR，同样价格也高一些。
跑到还有半小时的时候，跳出一个对话框：“analysiscannotproceed:notenoughsamplesdefined”，最后做出来的结果有扩增曲线但是没有熔解曲线，请各位大神帮忙解释一下。
两步法，是因为设计引物的时候把退火温度设为酶的工作温度，而且定量PCR的产物都很短，需要的时候都短，所以两步法更方便。三步法的话，花的时间长，不利于快速实验。
如果要测量细胞表面2个受体的比率，最好用流式细胞仪来测量
RNA 质量
RNA 质量主要包括RNA的纯度（没有蛋白质和DNA的污染）以及完整性。传统的RNA质量的评价通过分析A260/A280的比值或者对琼脂糖凝胶电泳rRNA的条带的分析。Agilent Bioanalyser/BioRad Experion 微流体毛细电泳系统也是一种较新的分析方法。Agilent的2100也是一种十分好的分析RNA质量的方法，它通过分析18S以及28S rRNA的分析图谱，通过图谱来反应RNA的量和完整性，其完整性通过完整性系数（RIN）来反应。样品的RINs在10-4之间。10代表完整的RNA，4代表没有完整的rRNA带。
由于以上的方法并非100%准确定反应mRNA的完整性，因为他们只是反应rRNA的量来间接测定mRNA的完整性。这里推荐一种方法：采用GAPDH的3’：5’分析法。
我们使用oligo dT进行逆转录，然后对逆转录的cDNA用multiplex荧光定量评价。设计三个taqman探针来定量三种相同大小的扩增产物。探针设计的位点分别位于3’；5’以及中部。扩增产物的之间的比值反应RNA的完整性。如果3’；5’的比值在1，反应较高度完整性，如果高于5说明降解。
QRT-PCR抑制物的组成
QRT-PCR抑制物严重减少了PCR的灵敏度以及热动力学反应，高度的抑制还导致假阴性的结果。
抑制物的来源：生物样品的核酸抽提以及共沉淀中的混合物，盐离子，尿素，血红素，heparin以及IgG.
是否有抑制物的评价体系：
1.通过对目的样品进行梯度稀释进行PCR扩增效率的检测
2.通过内部扩增对照来反应样品处理过程中样本的情况
3.用细菌检测临床样品的抑制
4.通过标准人工合成的扩增进行RT-PCR来反应目标检测物的抑制情况
反转录反应系统
1.RT和PCR单一酶系统
2.RT和PCR分离的酶系统
3.RNA逆转录引物的选择
引物主要有三种：
1.随机引物：随机引物，特别是6nt引物对所有的靶位点不产生十分稳定一致的结果，建议使用15nt的随机引物.
2.oligo-dT：只能用于mRNA完整的样品，特别有polyA .而且对于一些特殊的变异体以及较长的3’UTR的区域比较困难
3.特异引物：最特异最灵敏的方法。特别RNA量足够情况下建议使用此法。
一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：
对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。
基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
几点注意：
1。必须确定扩增的特异性
2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同）
3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。
4。 最好不用Syber Green
