
Target | 100bp DNA Marker |
Storage | Store at -20°C. Stable for 12 months from date of receipt. |
Buffer | 10 mM Tris-HCl (pH 8.4), 10 mM EDTA, 0.02% bromophenol blue, 5% glycerol. |
Availability | Shipped within 5-10 working days. |
Note | This product is for research use only. |
Abbexa是一家致力于为生命科学研究、药物研发及生物技术公司提供优质抗体、蛋白及检测试剂盒等产品的高科技生物技术公司。基于剑桥大学研发技术优势,Abbexa提供包括一抗、二抗、纯化蛋白、ELISA试剂盒、各种酶类及其它多种试剂与研究工具的大量生命科学研究产品。
目前Abbexa的产品涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、纯化蛋白质及生物试剂,此外,为满足研发人员特殊的实验需要,Abbexa还提供抗体/多肽定制服务。严格的质控标准保证了Abbex产品的高性能,如您对产品不满意,Abbexa将直接提供退/换货服务
CLIAKits 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA) RNAInterferenceProducts RNA干扰试剂 RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内靶mRNA序列特异性的降解机制。有时转基因会同时导致TGS和PTGS。 由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,(长度超过三十的dsRNA会引起干扰素毒性)所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。 1. RNAi抑制转座子活性 两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关 ①发现蠕虫mut-7基因参与RNAi并且与转座子的转座抑制有关; ②在果蝇中,参与RNAi的RNA解螺旋酶Spindle-E的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失,同时提高了反转录转座子活性。 2. RNAi抵御病毒感染 在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现,sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性。 3. RNAi参与异染色质的形成和维持 Hall等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople等在敲除裂殖酵母(S.pombe)的RNAi途径基因(如Argonaute、Dicer、RDRP)时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi途径的参与下,加工成siRNA,siRNA募集异染色质蛋白1(HP1),然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 4. RNAi参与机体的发育调控及生理代谢 RNAi只抑制转录后的基因,所以RNAi在生物体发育学研究中具有优势。Chuang等用RNAi技术进一步证实了AG、CLV3、AP1、PAN等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi过程中形成的RISC复合物可根据不同情况分别利用siRNA或stRNA行使不同的功能,但最终均导致特定基因沉默。 IsotypeControl 同型对照 同型对照(IsotypeControl),使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性结合到细胞表面而产生的背景染色。 同型对照 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用。还可以用来竞争性的结合抗体,与功能阻断抗体发挥同样的功能。 同型对照要与一抗的来源,Ig分型和标记完全一致。 如果一抗是多抗,可以用annormalserum(与一抗相同的正常血清)(mustbethesamespeciesasprimaryantibody)。Thiscontroliseasytoachieveandcanbeusedroutinelyinimmunohistochemicalstaining.这个可以咨询试剂商。同型对照为免疫荧光标记中的阴性对照。由于荧光标记单抗的组来源不同,应选用相同来源的未标记单抗作为同型对照来调整背景染色。举个例子:比如检测一抗为单抗的mouseantiratCD11b,cloneOX-42purifiedIgG,那么它的isotype是mouseIgG2a,所以可以用purified(纯化的)mouseIgG2a来做OX-42的同型对照(IsotypeControl)。一般的的生物技术公司和国内的代理都有出售。 同型对照:是指与MoAb相同的、未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类,若使用直接免疫荧光染色法,同型对照也应标记荧光色素,如IgG1FITC、IgG2a、PE等。主要考虑了细胞的自发荧光、FC受体介导的抗体结合和非特异性抗体结合等影响因素。此外,同型对照与MoAb所标记的荧光色素、浓度、F:P比值(标记的荧光色素与免疫球蛋白分子的比值)应该相同为最佳,这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义,切忌使用与MoAb不相匹配的同型对照,最好为同一实验室、采用相同工艺或方法制备(如同一品牌)的产品。
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样品处理:
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
你可以用你的目的引物,用反转录第一链进行扩增,看看能不能得到目的片段.
提RNA一般注意:提取前材料的保存(新鲜材料,过夜处理的样品),提取中对外源性的RNA酶的清除控制(离心管,PCR管,电泳槽,台面等的无RNA酶化处理),提取后需要-80度保存.其次跑电泳时,注意电泳液最好用新鲜的,核酸染料等诸多因素.
细菌总RNA提取试剂盒( germs islation kit).
对于外源性RNA酶的控制外源RNA酶清除剂,避免使用致癌物DEPC的危险方法就可简单操作清除耗材,台面,仪器等的外源RNA酶的降解作用.
RNA制备过程中究竟有哪些问题需要注意,又有哪些工具可以助我们一臂之力呢,且听下文分解。
RNA制备的四大祸害碱性条件、金属离子和高温都会促使RNA分子水解。因此,RNA操作一般在0°C-4°C的中性或微酸性缓冲液中进行,人们也常常在其中添加螯合剂,比如0.1mMEDTA。有些应用不允许EDTA的存在,这时可以通过离子交换树脂来去除阳离子。
在制备RNA时,RNase一直是个令人头疼的大问题,因为这种酶基本上无处不在。生物样品本来就含有RNase,它们存在于细胞的小隔间里,当细胞被裂解时这些RNase就释放出来。另外,实验室操作也很容易引入RNase。“这种酶到处都是,我们皮肤细胞上就有。如果你戴着手套接触了脸或者手臂,也会沾到一些RNase,”Promega公司的产品经理EricVincent提醒道。
在收获组织或细胞时,“提取RNA要越快越好,或者就想办法令RNase失活,”NEB公司的RNA研究带头人BretRobb指出。
如果不能立刻提取RNA,就应当通过速冻来稳定样本,或者将样本储存在特殊的RNA保存液中,比如AllProtectTissueReagent、RNAlater。此外,PreAnalytiX公司的PAXgeneBloodRNATube也很适合保存这样的样本,“不仅能确保RNA的安全,而且让细胞不会因为温度或缓冲液条件的改变表达任何转录本,”Qiagen公司的MartinSchlumpberger介绍道。PreAnalytiX是BD和QIAGEN的一个合资公司。
绝大多数RNA分离试剂盒中的裂解缓冲液(例如Qiagen公司的RNAEasy),“可以失活任何样本所带的RNAse,”Schlumpberger解释道。“这些产品对于RNA来说是相当安全的。”如果你更喜欢自己DIY,那么异硫氰酸胍、酚/氯仿和SDS都能帮你保护样本中的RNA。
据介绍,RNA纯化之后对环境中的RNAse最为敏感,这个时候需要特别注意预防RNAse的污染。
可不可以做到万无一失如何才能保证RNA实验的成功,这已经是一个老生常谈的问题了。RNA操作时应该戴上一次性手套,并且在专门的空间里进行,尤其要与质粒制备和细菌操作分开。操作者尽量不要接触洁净度不能令人百分百放心的物品。
我们来看看NEB公司是如何做到万无一失的。NEB公司的RNA实验室统一使用RNA专用的一次性耗材。他们认为高压灭菌会使溶液中的微生物释放出RNase,而这些RNase会在灭菌之后复性。因此NEB公司只信任经过认证的无RNAse器皿,抛弃了高压灭菌过程。Robb介绍道,目前市面上有许多经过认证的RNA专用产品(试剂盒、试剂和耗材),进行RNA实验已经比十几年前容易得多了。
“过去人们在配制溶液的时候总是胆战心惊,恨不得屏住呼吸进行称量和搅拌,以免把RNase带到样本中去,”他解释道。而现在,你可以很方面的买到各种无RNAse的试剂,从水、1MTris到5MNaCl。“使用这些试剂可以为RNA实验提供额外的保障。”
许多无核酶的塑料产品都经过了第三方的检测和认证,MoBioLaboratories就提供这样的服务。“我们可以帮助制造商建立始终如一的无污染生产线,”培训操作者如何识别和消除污染源,MoBio公司的CarlTsang介绍道。
我国大多数实验室还是使用玻璃器皿,这些器皿至少需要在180°C的条件下烘烤几个小时,才能确保将RNAse永久性地摧毁。之后,研究者们可以通过商业化的试剂盒进行RNAse检测,比如NEB公司的RNAse污染分析试剂盒。
添加剂的使用DEPC(Diethylpyrocarbonate)一直被用于处理水和溶液,失活其中的RNAse。“多余的DEPC可以在高压锅中去除,因为DEPC在高温下很不稳定,会释放出CO2然后消失,”Schlumpberger说。不过许多人并不爱和这种可能致癌的化合物打交道,Schlumpberger强调,如果没有正确处理,残余的DEPC也会使RNA失活。
对于那些不能高压灭菌的器物,我们可以用RNaseAway试剂处理,然而将其浸泡在无RNAse的水里。
Vincent指出,RNAse抑制剂的使用应当成为常规。以Promega公司的RNAsin为例,RNAse抑制剂能够特异性结合并抑制实验室中常见的RNAse,包括RNAseA、B、C和人胎盘RNAse。“等你发现引入了RNAse时往往已经太迟了,多加一层保险是很有必要的,”他说。
只要我们了解威胁RNA的主要因素(高pH、高温、金属离子和内切酶),就能够想办法一一化解。这时你会发现,RNA制备其实并没有那么难。
http://seq.cn/article-10584-1.html
但是,这样做的前提的,RNA提得要好,浓度要高,这样免得RNA降解到不能用了。因为在有二价阳离子的(DNAseI buffer含有)情况下,RNA在60度以上时必然发生非酶促降解。

