
Biological Activity
Antibiotic; inhibits GlcNAc phosphotransferase (GPT). Blocks the formation of N-glycosidic linkages by inhibiting the first step in glycoprotein synthesis. Activity induces ER stress and causes G1 arrest; can be used to induce autophagy. Tunicamycin contains four main components as follows:- Homolog A, n=8, C37H60N4O16, molecular weight = 816.90
- Homolog B, n=9, C38H62N4O16, molecular weight = 830.93
- Homolog C, n=10, C39H64N4O16, molecular weight = 844.95
- Homolog D, n=11, C40H66N4O16, molecular weight = 858.99
Technical Data
The technical data provided above is for guidance only.For batch specific data refer to the Certificate of Analysis.Tocris products are intended for laboratory research use only, unless stated otherwise.
Background References
- The hepatitis B virus precore protein is retrotransported from endoplasmic reticulum (ER) to cytosol through the ER-associated pathway.Duriez et al.J.Biol.Chem., 2008;283:32352
- Primary murine airway smooth muscle cells exposed to poly(I:C) or tunicamycin synthesize a leukocyte-adhesive hyaluronan matrix.Lauer et al.J.Biol.Chem., 2009;284:5299
- Differential effects of endoplasmic reticulum stress-induced autophagy on cell survival.Ding et al.J.Biol.Chem., 2007;282:4702
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Citations for Tunicamycin
The citations listed below are publications that use Tocris products.Selected citations for Tunicamycin include:
8Citations: Showing 1 - 8
- Caspase-mediated cleavage of IRE1 controls apoptotic cell commitment during endoplasmic reticulum stress.Authors: Shemorry Et al.Elife2019;8
- A CASPR1-ATP1B3 protein interaction modulates plasma membrane localization of Na+/K+-ATPase in brain microvascular endothelial cells.Authors: Zhang Et al.J Biol Chem2019;
- ONC201 kills breast cancer cells in vitro by targeting mitochondria.Authors: Greer Et al.Oncotarget2018;9:18454
- Hyperactivation of nuclear receptor coactivators induces PERK-dependent cell death.Authors: Hossain Et al.Oncotarget2018;9:11707
- N-Glycosylation Regulates the Trafficking and Surface Mobility of GluN3A-Containing NMDA Receptors.Authors: Skrenkova Et al.Front Mol Neurosci2018;11:188
- Tumor-Suppressor Inactivation of GDF11 Occurs by Precursor Sequestration in Triple-Negative Breast Cancer.Authors: Bajikar Et al.Dev Cell2017;43:418
- NCOA3 coactivator is a transcriptional target of XBP1 and regulates PERK-eIF2α-ATF4 signalling in breast cancer.Authors: Gupta Et al.Oncogene2016;35:5860
- ER stress induces anabolic resistance in muscle cells through PKB-induced blockade of mTORC1.Authors: Deldicque Et al.PLoS One2011;6:e20993
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5 μg/ml
I dissolved tunicamycin in DMSO. I added tunicamycin at various concentrations (2uM, 4uM, 6uM, and 10uM) for 24 hours in human primary astrocytes and incubated at 37 C and 5% CO2. Next day, I collected lystates and ran a western blot. The first four lanes are tunicamycin added samples in increasing concentration and the last two lanes are without added. I looked for PERK activation using p-PERK antibody.
It is working well and easily dissolved into DMSO. I used 2.5, 5 µg/ml of Tunicamycin with serum free culture medium to treat the cells for 8h, 16h, 24h, and 48h.
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2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
以这些标准看,目前的基因组测序结果,还没有一个是完美的。
人类基因组:缺点在哪里?
首先,人类基因组还不够精确。人是“二倍体”,也就是有一半遗传物质来自父亲,一半遗传物质来自母亲,且在受精卵形成过程中,还会发生基因重组,这是人类遗传多样性的来源之一。科学家们需要更精确的“单倍型”数据,这样基因组才够“完美”,而这种“完美”正是研究者们追求的目标。
其次,人类基因组还不够多元。
按照传统的人种分类,人类按照肤色黑白黄棕,被粗分为四大类:尼格罗人种、高加索人种、蒙古人种、澳大利亚人种。基因组测序数据是从高加索人种开始的,人类基因组计划是人类的标准参考基因组,也是高加索人种的标准参考基因组。文特尔的基因组,测序对象是他自己,同样是高加索人种。
然而,从基因组研究的角度,为了尽可能地包括各种遗传背景,需要为更多族裔建立自己的参考基因组。
资料来源:http://www.mv163.cn/jkgl/news/2015/1224/5227.html
你所说的“测序酶”在一般情况下就是“聚合酶”。
因为目前的的测序方法主要就是借助聚合反应。
当然,有些测序方法(比如曾经的SOLiD系统)是利用连接反应,那么它用的“测序酶”肯定是连接酶。
估计,也就是这个原因有人把它。
两个基因大小分别230kb和450kb,酶切后,450kb的有目的条带,但很弱,230kb的质粒条带亮,其下方有一很微弱条带,用的酶分别是:Ncol和Spel体系是(Takara,两个酶切体系不同,用的官网推荐体系):
NcoI1μl
Spel1μl
10×KBuffer2μl
0.1%BSA2μl
DNA3ul
灭菌水upto20μl37℃4h电泳1h
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
3.HRM法 高分辨率熔解曲线分析(HRM)是近几年兴起的SNP研究工具,它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况,来判断是否存在SNP,而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形,因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限,无需序列特异性探针,在PCR结束后直接运行高分辨率熔解,即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针,操作简便、快速,成本低,结果准确,并且实现了真正的闭管操作。
4.Mass Array法 MassARRAY分子量阵列技术是Sequenom公司推出的世界上领先的基因分析工具,通过引物延伸或切割反应与灵敏、可靠的MALDI-TOF-MS技术相结合,实现基因分型检测。基于MassARRAY平台的iPLEX GOLD技术可以设计最高达40重的PCR反应和基因型检测,实验设计灵活,分型结果准确性高。根据应用需要,对数十到数百个SNP位点进行数百至数千份样本检测时,MassARRAY具有最佳的性价比,特别适合于对全基因组研究发现的结果进行验证,或者是有限数量的研究位点已经确定的情况。
5.Illumina BeadXpress法 采用Illumina公司的BeadXpress系统进行批量SNP位点检测,可以同时检测1-384个SNP位点,往往用于基因组芯片结果确认,适合高通量检测。微珠芯片具有高密度、高重复性、高灵敏度、低上样量、定制灵活等特点,极高的集成密度,从而获得极高的检测筛选速度,在高通量筛选时可显著降低成本。向左转|向右转
2.SNaPshot法 该技术由美国应用生物公司(ABI)开发,是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术,也称小测序,主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中,引物延伸一个碱基即终止,经ABI测序仪检测后,根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点,根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类,从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析。
●应用酶水解多肽不会破坏氨基酸,也不会发生消旋化。水解的产物为较小的肽段。向左转|向右转
2.SNaPshot 该技术由美应用物公司(ABI)发基于荧光标记单碱基延伸原理型技术称测序主要针等通量SNP型项目含测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临态位点5’-端同度延伸引物PCR产物模板反应体系引物延伸碱基即终止经ABI测序仪检测根据峰移位置确定该延伸产物应SNP位点根据峰颜色知掺入碱基种类确定该本基型于PCR产物模板通重PCR反应体系获通用于10-30SNP位点析
利用NheI和HindIII双酶切插入目的片段,为什么双酶切有目的片段和切开的质粒,测序却没有?
并且测序后在NheI位点后的序列变成了-GGCTAGGTAC-Kpn位点(CGTTTAAACTTAAGCTTG消失。之前和之后的序列都相符),之间的怎么都没了?

