百万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序显示目的基因已连在载体上，菌落PCR也可以P出目的条带，为什么双酶切只有一条带！！！！
2021-07-28
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mpark
用户
Is the construct maxiprep sequenced? If it is, have you tried sequencing using primers the nucleotide sequence of which is derived from the insert DNA?
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dxy_20y4ry49
用户试过的，分别涉及两对引物，一对在插入的目的基因上，一对在载体上，做质粒PCR都可以P的出目的条带，但是再做双酶切，都只有一条带。
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mpark
用户Canyoufindthetwoenzymesitesinthesequencedata?
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木木夕7
用户是不是连接后没有酶切位点？我之前做的单酶切，连接目的基因后，又做的酶切，通过没有酶切成线性质粒，证明我的目的基因连接上了。跟你的思路完全相反。仅供参考。
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H梦Z
用户会不会是其中一个酶切位点发生了突变或者甲基化导致切不下来?
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dxy_20y4ry49
用户重新连接后的目的序列，经测序分析，双酶切位点都还在的。谢谢各位，已找到原因。
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dxy_anip0c62
用户您好，我是新手，最近遇到了与你一样的问题，请问你是怎样找到问题所在的呢？？
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