
Description
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Transfection Reagent for NCI-H23 Cells (Lung Adenocarcinoma Cells, CRL-5800)
- Two component formulation enhances lipid mediated transfection efficiency
- Optimized easy-to-use transfection protocol provided for transfection of siRNA, DNA, mRNA, and microRNA
- Kit includes Transfection Enhancer reagent and recommended transfection protocol
- High transfection efficacy in the presence of serum
- Expand your RNAi application with a reagent optimized for delivery of both siRNA and plasmid
- Reproducible transfection results
- Works well for standard reverse transfection and high-throughput applications
- Download in vitro NCI-H23 transfection protocol: [PDF]
- Download NCI-H23 CRISPR/Cas9 transfection protocol: [PDF]
- Download PowerPoint presentation for NCI-H23 cells transfection kit: [PPT]
- Developed and manufactured by Altogen Biosystems
Transfection Efficiency:
Reagent exhibits at least 94% transfection efficiency of siRNA delivery. Transfection efficiency was determined by qRT-PCR.
Transfection Protocol and MSDS:
Download Altogen Biosystems NCI-H23 Transfection Protocol: [PDF]
Download MSDS: [PDF]
NCI-H23 Cell Line:
The NCI-H23 cell line was established from lung cancer tissue from a 51-year-old male with lung adenocarcinoma. The cell sample was removed prior to any therapy for the disease. NCI-H23 cells exhibit epithelial morphology and carry the K-ras 12 mutation, as well as a mutation in the 246 codon of the p53 gene. It has also been known to have a population doubling time of nearly every 38 hours. NCI-H23 cell line expresses heterogeneous mRNA expression for platelet-derived growth factor subunits A and B, which transforms the epidermal growth factor receptor as well as growth factor alpha and beta. NCI-H23 cells are negative for neurofilament but stain positive for keratins 18 and 5+8. Furthermore, NCI-H23 cells have no detectable amplification of c-myc RNA but exhibit a high degree of c-myc DNA. This cell line is vital for lung cancer research as well as in drug discovery and gene expression studies. Altogen Biosystems provides lipid-based transfection reagent kits for the NCI-H23 lung cancer cell line.
Data:
Figure 1. siRNAs targeting Lamin A/C mRNA or non-silencing control siRNA were transfected into NCI-H23 cells following the recommended protocol. At 48 hours post-transfection the cells were analyzed by qRT-PCR for Lamin A/C gene expression levels. 18S rRNA levels were used to normalize the Lamin A/C data. Values are normalized to untreated sample. Data are means ± SD (n=4).
Figure 2. Protein expression of Lamin A in NCI-H23 cells. DNA plasmid expressing Lamin A or siRNA targeting Lamin A were transfected into NCI-H23 cells following Altogen Biosystems transfection protocol. At 72 hours post-transfection the cells were analyzed by Western Blot for protein expression levels (normalized by total protein, 10 µg of total protein loaded per each well). Untreated cells used as a negative control.
NCI-H23 Transfection Reagent
Altogen Biosystems:
Altogen Biosystems transfection and electroporation products for life sciences and cancer research. Company developed two types of in vivo delivery kits for animal research: Tissue-targeted reagents (delivery to liver, pancreas, and kidney tissues), and broad range in vivo delivery reagents (PEG-Liposome, Nanoparticle-based, Lipid-based, and Polymer-based kits). Advanced formulation of reagents and optimized transfection protocols provide efficient intracellular delivery of proteins, DNA, mRNA, shRNA, siRNA, and other negatively charged molecules in vitro and in vivo. Read more about transfection technology at Altogen’s Transfection Resource.
Altogen Labs Research Services:
Altogen Labs provides GLP-compliant contract research studies for pre-clinical research, IND applications, and drug development. Biology CRO services include: Xenograft models (30+), development of stable cell lines, ELISA assay development, cell-based and tissue targeted RNAi studies, safety pharm/tox assays, and other studies (visit AltogenLabs.com).
Volume Options:
- 0.5 ml (Catalog #6856)
- 1.5 ml (Catalog #6857)
- 1.5 ml CRISPR (Catalog #2178)
- 8.0 ml (Catalog #7068)
AltogenBiosystems是一家开发和制造用于生命科学研究,药物发现和开发的转染试剂盒的生物技术公司。转染试剂盒针对特定癌细胞系和原代细胞培养进行了优化,可将生物分子有效递送到靶组织中。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现体外(癌细胞系)和体内(动物组织靶向试剂、癌细胞系)递送货物分子,包括质粒DNA,各种类型的RNA(mRNA,siRNA,shRNA,microRNA),蛋白质和小分子研究。
Altogen生命科学公司致力于研发,生产和销售特定细胞系的转染试剂,用于细胞间生物分子的传递,并通过对转染试剂类型的设计将siRNA和质粒DNA有效地转入不同的细胞系和原代细胞内。Altogen公司开发的聚合物,脂质体,纳米粒子为基础的转染技术分别针对分子生物学,组合化学,和细胞生物学而分别应用。Altogen定制服务提供符合GLP要求定制研究服务,包括代稳定的细胞系,细胞银行和冷冻保存,焦磷酸测序,克隆,RNA干扰(RNAi)和基因沉默服务,发展分析,siRNA文库筛选,并转染服务。稳定的肿瘤细胞株和原代细胞的产生,可以是非常昂贵和费时。该公司的细胞培养科学家的细胞株的选择,无论是利息或shRNA表达载体的稳定表达的基因改造。标准的RNAi技术服务,包括设计与合成的siRNA的利益,验证siRNA的沉默效率,siRNA转染条件的优化,使高效的基因沉默细胞系或原代培养细胞的靶基因。转染培养细胞的瞬时或稳定的引入外源性分子和遗传物质(即RNA或DNA),通常是在生物实验室用来研究基因功能,基因表达的调节,生化映射,突变分析,和蛋白质的生产。科学家利用各种载体分子,这种分子,使质粒DNA(PDNA),信使RNA(mRNA),短干扰RNA(siRNA),小分子RNA(miRNA)的,并进入肿瘤细胞株和原代细胞的蛋白质的基因交付。不幸的是,无单提货的方法或转染试剂,可以适用于所有类型的细胞,细胞的细胞毒性和转染效率显着不同,取决于试剂,协议,并正在利用细胞类型。Altogen生物系统公司提供超过60种类型的细胞的预优化转染试剂盒。纳米粒子,脂质和聚合物基ALTOGEN®在体内转染试剂,使交付功能的RNA和DNA分子在体内。PEG脂质体在体内输送系统减少由于PEG修饰的先天免疫反应,并提供高效的siRNA转染的DNA,并在体内的蛋白质。由科学“杂志(2010年12月17日):PEG脂质体在体内转染试剂盒siRNA的特色Altogen生物系统功能的特定细胞系转染试剂盒
120+细胞转染试剂和活体组织靶向试剂盒制造商AltogenBiosystems是一家生物技术公司,开发和制造用于生命科学研究、药物发现和开发的转染试剂盒。Altogen®体内转染试剂可有效地将生物分子导入靶组织。细胞转染试剂盒针对特定的癌细胞系和原代细胞进行了优化。通过先进的试剂配方和优化的转染方案实现货物分子(DNA、RNA、蛋白质)的高效传递。AltogenBiosystems利用高分子化学、分子和细胞生物学的专业知识,开发了新的体内外给药技术。转染是将外源分子导入培养细胞中,常用于研究基因功能、基因表达调控、生化定位和蛋白质生产。不幸的是,由于细胞毒性和转染效率的差异很大,并且取决于所使用的试剂、方案和细胞类型,因此没有一种单一的传递方法或转染试剂可应用于所有类型的细胞。AltogenBiosystems为120多个癌细胞系和原代细胞类型提供优化的转染试剂盒和电穿孔产品。体内转染试剂可实现组织靶向给药。Altogen的转染试剂盒包括用于体外(癌细胞系)和体内(用于动物研究的组织靶向试剂)转染的转染增强剂试剂和转染复合物冷凝器。Altogen实验室提供符合GLP的实验室合同研究服务。我们的生物CRO服务包括异种移植物的疗效、IND应用的pharm/tox研究和安全性测试、分析开发(ELISA、IC-50、qPCR)、90多个异种移植物动物模型、RNAi和基因沉默服务。Altogen的细胞培养科学家通过在28天内培育出稳定的细胞系,将选择的细胞系转化为稳定表达感兴趣的基因。
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免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞,亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有:免疫荧光组织(细胞)化学技术、免疫酶组织(细胞)化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。免疫荧光组织(细胞)化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。
石蜡切片组织茜素红钙染色试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
石蜡切片组织茜素红(ALIZARINREDS)钙染色试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和鳌和技术,使钙离子和茜素红S产生复合物,来分析存档中的石蜡包埋的组织切片中橘红色钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,显色清晰。
技术背景
茜素红(ALIZARINREDS)是一种蒽醌(anthraquinone)衍生物:9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐(9,10-Dihydro-3,4-dihydroxy-9,10-dioxo-2-anthracenesulfonicacidsodiumsalt),又称媒介红3(MordantRed3)或茜素磺酸钠(Sodiumalizarinesulfonate)。其分子式为C14H7NaO7S,分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物,用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜素红染色,产生桔红色沉积,但会受到其它金属元素的干扰。
产品内容
脱蜡液(ReagentA)自备
补水液A(ReagentB)100毫升
补水液B(ReagentC)100毫升
补水液C(ReagentD)100毫升
补水液D(ReagentE)100毫升
清理液(ReagentF)30毫升
染色液(ReagentG)10毫升
产品说明书1份
保存方式
保存在4℃冰箱里;染色液(ReagentG),避免光照;试剂具有腐蚀性,注意操作安全。有效保证3月
用户自备
小型染色缸:用于石蜡切片的脱蜡操作
光学显微镜:用于组织细胞染色后观察分析
实验步骤
一、脱蜡处理
1.取出10片待测的石蜡包埋的组织切片(注意:石蜡包埋前,组织切片须用10%甲醛4℃条件下,固定16小时,此步很重要)
2.(选择步骤)放进80℃烘箱,孵育30分钟
3.(选择步骤)室温下静置15分钟
4.按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸
孵育时间
50毫升脱蜡液(ReagentA)
15分钟
50毫升脱蜡液(ReagentA)
15分钟
50毫升脱蜡液(ReagentA)
15分钟
50毫升补水液A(ReagentB)
3分钟
50毫升补水液B(ReagentC)
3分钟
50毫升补水液C(ReagentD)
3分钟
50毫升补水液D(ReagentE)
3分钟
5.小心移去切片上的补水液D(ReagentE)
6.小心加上200微升清理液(ReagentF)在切片上,铺满整个切片样品表面
7.室温下孵育5分钟
8.小心移去切片上的清理液(ReagentF)
二、样本染色处理
1.小心加上200微升染色液(ReagentG),铺满整个切片样品表面
2.室温下孵育2分钟(注意:可以延长至20分钟);或直至可见桔红色
3.小心移去切片上的染色液(ReagentG)
4.空气中晾干
三、样本澄清处理
1.小心加上200微升补水液B(ReagentC)在切片上,铺满整个切片样品表面
2.小心移去切片上的补水液B(ReagentC)
3.重复实验步骤1和2二次
4.小心加上200微升补水液A(ReagentB)在切片上,铺满整个切片样品表面
5.小心移去切片上的补水液A(ReagentB)
6.重复实验步骤4和5二次
7.小心加上200微升脱蜡液(ReagentA)在切片上,铺满整个切片样品表面
8.小心移去切片上的脱蜡液(ReagentA)
9.重复实验步骤7和8一次
10.放上盖玻片或封片
11.即刻在一般光学显微镜下观察:钙沉积阳性细胞呈现桔红色
注意事项
1.本产品为50次操作
2.操作时,须带手套
3.试剂具有腐蚀性,注意操作安全
4.石蜡包埋前,组织样品须用10%甲醛4℃条件下,固定16小时,否则造成样品支离破碎
5.所有操作在室温下进行
6.试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面
7.样品染色避免过度,肉眼可见桔红色即可终止染色
8.组织细胞染色完成后,即刻进行光学显微镜观察
9.本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品
质量标准
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定显色清晰
的抗体不容易染色,哪为同仁有这方面的经验?另外基因公司卖的cellsignalingtechnology的抗体要1875元,而中山公司卖的这个抗体只有800多,其中差距在哪里?请赐教
有没有朋友使用碧云天的细胞衰老β-半乳糖苷酶染色试剂盒做过细胞衰老,本人小白,求相关细胞处理的过程及数据分析方法。贴壁细胞六孔板需要接种多少,染色后怎样计数进行数据处理。谢谢啦!
最近开始做TUNEL染色,第一次按罗氏protocol做的,阴性对照是没有显色的。没做阳性对照。第二次、第三次做出来背景都很深,肾小管每个细胞核上都染上了棕黄色,DAB染色很快,几秒就变一片黄。具体步骤是:1烤片脱蜡至水2.蛋白酶K20ug/ML37℃10分钟3.tunel液冰上配置后加组织上,37度1h。4.pod液37℃30min5.DAB显色。在蚂蚁淘中检索后,优化了实验条件,在蛋白酶K前加了3%H2O2封闭10min,缩短了tunel液至40min。这是第三次的结果大家帮我看看
这是对照组
这是模型组

