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- Product Description:
- Fluorescent dye derived from trimethine cyanine with an azido group. Zwitterion, and forms a 1,2,3-triazole type connection(Click Reaction) with terminal alkynes in the presence of Cu(I).
- Storage Instruction:
- Store in the dark at -20°C.
- Note:
- Maximum Excitation/Emission wavelength: 545/565 nm (in CH3OH)
- Chemical Name:
- 2-((1E,3E)-3-(3,3-dimethyl-1-(5-(3-(pyridin-2-disulfanyl)propanamido)pentyl)indolin-2-ylidene)prop-1-enyl)-1-ethyl-3,3-dimethyl-3H-indolium-5-sulfonate
- Chemical Formula:
- C28H33N5O3S
- MW:
- 519.66 g/mol
- Molar Extinction Coefficient:
- 150000 M-1cm-1 (CH3OH)
- Excitation (Max):
- 545 nm (CH3OH)
- Emission (Max):
- 565 nm (CH3OH)
- Recommended Excitation:
- 532 nm Nd:YAG, 532 nm green diode and 543 nm green HeNe.
- Recommended Filter Sets:
- TRITC
- Solubility:
- Dichloromethane, methanol, DMSO, DMF and acetonitrile.
- Purity:
- ≥ 95%
- Regulation Status:
- For research use only (RUO)
- Datasheet:
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- Conjugation
- Application Image
- Conjugation
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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2021-08-20
一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养，但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞，依据其外形和生长特征可区分为以下三类：上皮细胞（E）、成纤维细胞（F）和羊水细胞（AF）。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长，所以在培养过程中的 查看更多
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2021-08-29
上海联硕生物科技有限公司在发布的人参炔醇,(分析标准品),CAS:81203-57-8供应信息，浏览与人参炔醇,(分析标准品),CAS:81203-57-8相关的产品或在搜索更多与人参炔醇,(分析标准品),CAS:81203-57-8相关的内容。 查看更多
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2021-09-14
常州贝源鑫生物科技有限公司在发布的BYX130482苯唑西林中检所标准品供应信息，浏览与BYX130482苯唑西林中检所标准品相关的产品或在搜索更多与BYX130482苯唑西林中检所标准品相关的内容。 查看更多
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2021-07-23
广州优瓦科技有限公司在发布的LGC杂质标准品磺胺甲苯吡唑Sulfamethylphenazole供应信息，浏览与LGC杂质标准品磺胺甲苯吡唑Sulfamethylphenazole相关的产品或在搜索更多与LGC杂质标准品磺胺甲苯吡唑Sulfamethylphenazole相关的内容。 查看更多
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2021-08-14
上海乔羽生物科技有限公司在发布的辣椒素标准品供应信息，浏览与辣椒素标准品相关的产品或在搜索更多与辣椒素标准品相关的内容。 查看更多
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2021-09-18
一、概述： 人体本身并不能产生足够的维生素，因此所需维生素均要靠从食品中获得。为了避免维生素缺乏，生产商通过混合或喷雾的方式向食品中加入适量的维生素，然而要使其均匀地分布于食品中并非易事。此外，在产品的标签上必须标注保质期内的维生素含量。考虑到在食品生产储存中部分维生素的流失，国际化工企业协会建议，超量添加的维生素量不应超过标签注明含量的 50%。因此，生产商和 查看更多
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2021-09-22
南京森贝伽生物科技有限公司在发布的水蛭(蚂蟥),121061,121061-200503,中检所对照品供应信息，浏览与水蛭(蚂蟥),121061,121061-200503,中检所对照品相关的产品或在搜索更多与水蛭(蚂蟥),121061,121061-200503,中检所对照品相关的内容。 查看更多
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上海信裕生物科技有限公司在发布的硝羟苯胂酸 标准品CAS号：121-19-7供应信息，浏览与硝羟苯胂酸 标准品CAS号：121-19-7相关的产品或在搜索更多与硝羟苯胂酸 标准品CAS号：121-19-7相关的内容。 查看更多
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2021-08-31
随着医药科技不断进步，药品审评标准也在不断提高。开展仿制药一致性评价，保障仿制药在质量和疗效上与原研药一致，在临床上实现与原研药相互替代，同时，对通过一致性评价的品种优先纳入《国家基本药物目录》，未通过一致性评价的品种将逐步调出目录。对于未按期完成一致性评价且未申请延期的包括基本药物在内的仿制药，将不予再注册，批准文号予以注销。 查看更多
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2021-08-08
Yeast IF with Methanol/Acetone DehydrationDavid AmbergNote this protocol is a modified version of the protocol from Mark Rose in the CSH Yeast Genetics Course 查看更多
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2021-07-24
上海雅吉生物科技有限公司在发布的甘草酸单铵盐，甘草酸铵 中检所供应信息，浏览与甘草酸单铵盐，甘草酸铵 中检所相关的产品或在搜索更多与甘草酸单铵盐，甘草酸铵 中检所相关的内容。 查看更多
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2021-09-18
南京森贝伽生物科技有限公司在发布的异丙安替比林,100525,100525-200301,中检所对照品供应信息，浏览与异丙安替比林,100525,100525-200301,中检所对照品相关的产品或在搜索更多与异丙安替比林,100525,100525-200301,中检所对照品相关的内容。 查看更多
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常见问题
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商品咨询
有关于标准品,校准品及质控品的区别 123
tang15092015-12-07
常用荧光染料及应用领域 123
zishuyu2018-01-17
还可以标记细胞内的某些蛋白吧
荧光实验用哪种CCD比较好_问答详情_荧光染料标准品_标准品_生化...123
癧℡2018-01-17
没图片
既说像坐标画曲线曲线应纵轴该荧光强度吧轴数值变化代表荧光强度变化荧光强度变化代表钙离浓度变化 我觉直接用荧光强度值变化代替钙离浓度变化研究意义该钙离浓度变化吧
非要荧光强度值换算钙离浓度需要做列工作
1 取标准钙离浓度染色用共聚焦显微镜测荧光强度
2 标准品需要同像环境主要曝光间相同激光波及能量
3 标准品要用同浓度荧光染料
才能根据标准荧光强度关系推算品钙离浓度
既说像坐标画曲线曲线应纵轴该荧光强度吧轴数值变化代表荧光强度变化荧光强度变化代表钙离浓度变化 我觉直接用荧光强度值变化代替钙离浓度变化研究意义该钙离浓度变化吧
非要荧光强度值换算钙离浓度需要做列工作
1 取标准钙离浓度染色用共聚焦显微镜测荧光强度
2 标准品需要同像环境主要曝光间相同激光波及能量
3 标准品要用同浓度荧光染料
才能根据标准荧光强度关系推算品钙离浓度
荧光染料按照化学架构分属于什么染料123
jffrain742021-08-14
荧光染料按照化学架构分属于什么染料
这些染料的结构式基本是保密的。有些地方能查到,象维基上就有SYBR Green的结果式,但谁也不能肯定是否是正确的。
这些染料的结构式基本是保密的。有些地方能查到,象维基上就有SYBR Green的结果式,但谁也不能肯定是否是正确的。
QPCR常见问题及其分析 实验方法 123
cqpfbyy2021-08-17
1.无Ct值出现
检测荧光信号的步骤有误:一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
2.Ct值出现过晚(Ct>38)
扩增效率低:反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。
PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。
PCR产物太长:一般采用80-150bp的产物长度。
3.标准曲线线性关系不佳
加样存在误差:使得标准品不呈梯度。
标准品出现降解:应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。
引物或探针不佳:重新设计更好的引物和探针。
模板中存在抑制物，或模板浓度过高
4.负对照有信号
引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
引物浓度不佳：重庆新桥医院网上预约挂号www.cqxqyy.net适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。
模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
5.溶解曲线不止一个主峰
引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。
模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
6.扩增效率低
反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。
反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。
反应体系中有PCR反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。
7.同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线，如何判断?
判断标准：扩增效率，灵敏度，特异性
如果扩增效率在90%-110%，都是特异性扩增，都可以把数据用于分析。
8.扩增曲线的异常?比如“S”型曲线?
参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时，选NONE)
模板的浓度太高或者降解
荧光染料的降解
检测荧光信号的步骤有误:一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性。
模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
模板降解:避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
2.Ct值出现过晚(Ct>38)
扩增效率低:反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。
PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。
PCR产物太长:一般采用80-150bp的产物长度。
3.标准曲线线性关系不佳
加样存在误差:使得标准品不呈梯度。
标准品出现降解:应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。
引物或探针不佳:重新设计更好的引物和探针。
模板中存在抑制物，或模板浓度过高
4.负对照有信号
引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
引物浓度不佳：重庆新桥医院网上预约挂号www.cqxqyy.net适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。
模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
5.溶解曲线不止一个主峰
引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix试剂盒。
模板有基因组的污染：RNA提取过程中避免基因组DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
6.扩增效率低
反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。
反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。
反应体系中有PCR反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。
7.同一试剂在不同仪器上产生不同的曲线，如何判断?
判断标准：扩增效率，灵敏度，特异性
如果扩增效率在90%-110%，都是特异性扩增，都可以把数据用于分析。
8.扩增曲线的异常?比如“S”型曲线?
参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时，选NONE)
模板的浓度太高或者降解
荧光染料的降解
请教原料药的原料质量标准问题原料药/兽药蒲公英 制药技术的传播...123
fannyuu2009-09-02
常用抗体标记荧光染料的选择 实验方法123
尼玛君ekN2021-07-30
溴化乙锭通过嵌入碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分子的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多溴化乙锭，直至达到饱和( 每2个碱基对大约结合1个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分子在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。尽管这些方法大多数均被束之高阁，但其中最好的方法，也应是聚乙二醇分级沉淀法。
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱基性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽提到的质量DNA可用于酶切、连接和转化。对于分子量较大拷贝较少对的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用吕华铯密度超高离心法抽提DNA，且具有纯度高、步骤少、方法稳定且获得的质量DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用少量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。
质粒DNA纯化的试验步骤：
测量DNA溶液的体积，按lg/ml的用量精确地加入固体CsCl, 将溶液加温至30℃助溶。温和地混匀溶液直到盐溶解。
每10mlDNA溶液加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水）；立即将溴化乙锭溶液（漂浮在表层）与DNA－氯化铯溶液混匀， 溶液的终密度应为1.55g/ml（溶液的折射率为1.3860）溴化乙锭浓度大约740μg/ml。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。
室温下用Sorvall SS34头（或与其相当的转头）以8000rpm离心5min， 浮在溶液上面的水垢状浮渣是溴化乙锭和细菌蛋白所形成的复合物。
用巴斯德吸管或带大号针头的一次性注射器将浮渣下的清亮红色溶液转移到离心管中。用轻石蜡油加满管的其余部分并封口。
以20℃对所得的密度梯度以45 000rpm离心16h（VTi65 转头）、 以45 000rpm离心48h（Ti50转头）、以60 000rpm离心24h（Ti65转头）或者以60 000rpm离心24h（Ti70.1转头）。普通光照下，在梯中心可见两条DNA区带， 上部区带材料通常较少，由线状的细菌（染色体）DNA和带切口的环状质粒DNA组成：下部区带则由闭环质粒DNA组成。管底部深红色的沉淀是溴化乙锭RNA复合物，位于CsCl溶液和石蜡油之间的是蛋白质。Beckman Quick-Seal离心管中的CsCl－溴化乙锭梯度可容纳4mg 闭环质粒DNA而不至超负荷。如有更大量的质粒存在，将扩展为一条宽带，并与染色体DNA相重叠。这种问题只有在质粒复制达到极高水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现负荷，可收集整个DNA区高产水平时才会出现，只要将该质粒提取物分为2个梯度即可解决。如出现超负荷，可收集整个DNA区带，用CsCl溶液（ρ=1.58g/ml）将体积调到15ml，在两个离心管中再度离心，使DNA达到平衡。
收集DNA带。将21 号皮下注射针头插入管的顶端以使空气进入，为尽量减少污染的机会，首先用18号皮下注射针头按下述方法收集上部的区带（杂色体DNA）：用乙醇小心擦拭管外壁以除去任何油脂，然后将一块Soctch胶带贴于管外壁。穿过Soctch胶带将18号皮下注身针头（其斜面向上）插入管中，以便使针头的斜面开口恰好位于染色体DNA区带之下并与该区带相平行。将粘稠状DNA收集到一次性使用的管内，用造型粘土块封住皮下注射针头的末端并将第2根针头留于原处。 穿过Soctch 胶带插入第3根皮下注射针头（18号），将下部的质粒DNA区带收集到玻璃或塑料管中。展开
凝胶层析法分离蛋白质 实验方法123
2018-01-17
带荧光的染料含不含重金属
PSL标准粒子发生器每分钟可以产生多少PSL微球?123
2018-01-17
高输出聚苯乙烯胶乳粒子发生器可以每分钟产生高达7.2x1010 PSL微球，粒径为0.12μm。当这种气溶胶与720cfm的空气混合，用于以每分钟90英尺测试24“×48”过滤器时，系统输出将产生每立方英尺1×108挑战性上游气溶胶量。
对于六分之一效率（99.9999％）ULPA过滤器，该系统挑战将产生100个粒子/ 立方英尺的下游气溶胶浓度或将在标称1.0cfm激光粒子计数器（LPC）中产生100个粒子/分钟的计数速率。
过滤器效率以及过滤器中任何相关联的泄漏可以通过LPC简单地检测。标准集团的高输出PSL气溶胶发生器取代了传统过滤器测试和无尘室认证中使用的DOP（邻苯二甲酸二辛酯）和其他油基气溶胶发生器。
对于六分之一效率（99.9999％）ULPA过滤器，该系统挑战将产生100个粒子/ 立方英尺的下游气溶胶浓度或将在标称1.0cfm激光粒子计数器（LPC）中产生100个粒子/分钟的计数速率。
过滤器效率以及过滤器中任何相关联的泄漏可以通过LPC简单地检测。标准集团的高输出PSL气溶胶发生器取代了传统过滤器测试和无尘室认证中使用的DOP（邻苯二甲酸二辛酯）和其他油基气溶胶发生器。
【求助】关于荧光定量RQPCR中定量方法的两个求助问题!123
zhoubinbj2021-07-25
小弟就要进行荧光定量试验，所以在园子里面看了很多的资料？，真是似懂非懂，出现了很多的疑问，所以恳请各位指教一下，有些可能比较弱智，请各位不要见笑！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
敬请指教！非常感谢！
1.我知道一般缺省域值是3－15个循环荧光强度的标准方差的10倍，但是为什么公式是10×SD（6－15）？那仪器的本底荧光强度是前15个循环的荧光强度就算是baseline，那么仪器中用域值分析和用baseline分析有什么不同？域值能否改动？改动后的结果对于后续的分析有什么影响？一般什么时候需要改动？
2.所谓读板温度是不是就是每一部反应后检测荧光强度的步骤？是不是可以任意设定在某一步骤？譬如变性，退火，延伸甚至自己设定一个温度？
3.在做标准曲线的时候，对于标准品的要求是不是一般要求就是待扩增的目的片断，便于以后的扩增效率可比性？是不是这个也是购买的绝对标准品进行曲线作图的缺陷之一，虽然其绝对的定量已知？
4.在相对定量时候，如果内参和目的基因在同一管中进行扩增就是内参照法?不同管就是外参照法？是不是不太赞成内参照法，因为无法预知目的基因起始浓度，从而可能导致内参扩增效率远远大于目的基因而无法使用2-△△CT方法分析？
5.融解曲线的导出是不是在反应结束以后进行？融解曲线出现主峰异常增宽是什么原因导致？我还是不明白探针法是如何得出融解曲线的，主要是原理，因为染料法就是升高温度双链解链染料脱离？
6.如果用荧光染料方法进行试验，出现引物二具体很多，那么在NTC和加入模板的溶解曲线中dimer的峰值和模板中的峰值是否重叠？
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du_yq2005-09-01
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dugsh2021-07-24
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