【求助】大公司的大鼠抗小鼠单克隆抗体检出好几条带，是不是同源性太高了？

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2021-08-14

问题描述：

检测小鼠的炎性因子，分子量15kd。用罗氏的大鼠抗小鼠单克隆抗体，二抗用博士德兔抗大鼠IgG（γ）1：3000，结果出来好多带，其中在72kd和54kd处量最多，17kd处似乎有，不明显。怎么会有这么多带，是不是大小鼠之间同源性太高了，望高手指点！

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iris_palm

用户

应该是抗体浓度太高了相应降低下

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futureyu

用户

感谢斑竹解答。我看到有些帖子提到过IgG重链（40-60kd）和轻链（15-20kd）的问题，我这会不会是抗大鼠IgG的二抗检测出了小鼠的IgG重链和轻链呢？

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iris_palm

用户

你先降低一抗二抗的浓度试一试,如果26KD和54KD还有,而且很明显的话,再做个阴性对照,只加二抗,不加一抗,如果还有条带的话,说明是二抗引起的抗大鼠IgG的二抗是有可能检测到小鼠的IgG重链和轻链的,因为IG的抗原性主要在constantregion,这些功能区不同物种间还是有一定同源性的你的蛋白样品是不是来源于细胞的?如果是,应该不会有ig,除非是一些脾,血管,肝肾了什么组织,不排除这种可能性补充一点，最近我师姐做大鼠肾组织的WB，二抗用抗小鼠IgG,总会在25和50KD的地方出现条带，她做的是肾纤维化模型而且正常对照组条带淡，模型组条带浓，用药之后比模型又降低，她以前做过不加一抗的对照，这两条带总存在推测是一些病理性IgG在肾组织内沉积。

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