
Overview:
PAK1 is a member of the p21-activated kinases (PAKs) which have been implicated in the regulation of cell morphology, motility and transformation. These serine/threonine kinases are activated by and are effectors of small GTPases, CDC42 and RAC. PAK1 belongs to the Group I PAKs which also includes PAK2 and PAK3 (1). PAK1 is a key regulator of the actin cytoskeleton, adhesion and cell motility. Inactive dimeric PAK1 is mainly cytosolic and interaction with the activators Cdc42-GTP and Rac1-GTP stimulates the kinase at the sites of cellular protrusions forming adhesions to the extracellular matrix (2).
References:
1. Jaffer, Z M. et al: p21-activated kinases: three more join the Pak. Int J Biochem Cell Biol. 2002 Jul;34(7):713-7. 2. Parrini, M C. et al: Spatiotemporal regulation of the Pak1 kinase. Biochem Soc Trans. 2005 Aug;33(Pt 4):646-8.
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(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息。
(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种,可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
(4)样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
(5)单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2. 二抗选择
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗
而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的
羊抗兔IgG抗体同理。
不过现在的技术发达了,为了大批量生产抗体,大多数都是通过单克隆技术完成的。
PS:你的IGg的写法有误,应为IgG或者IgM。。。

