
Overview:
c-Jun is a proto-oncogene that forms a complex with c-Fos which regulates transcription from promoters containing AP-1 activation elements (1). c-Jun has specific DNA binding activity and following in vitro translation, c-Jun binds as a homodimer to the AP-1 DNA site. The transactivating function of c-Jun is acutely regulated by a wide variety of cellular signals via modulation of phosphorylation of two serines (63 and 73). Jun N-terminal domain kinases (JNKs), are responsible for mediating S63/73 phosphorylation on c-Jun in response to a variety of cellular stimuli including TNF-a, heat stress and u.v. light (2).
References:
1.Halazonetis, T D. et al: c-Jun dimerizes with itself and with c-Fos, forming complexes of different DNA binding affinitie. Cell. 1988 Dec 2; 55(5):917-24. 2.Dai, T. et al: Stress-activated protein kinases bind directly to the delta domain of c-Jun in resting cells: implications for repression of c-Jun function. Oncogene. 1995 Mar 2; 10(5):849-55.
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(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息。
(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种,可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
(4)样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
(5)单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2. 二抗选择
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
确定了需要检测样品的种属,就可以选择对应的一抗
而二抗是根据一抗来选择的,比如一抗是小鼠来源的,二抗就要是抗小鼠的
羊抗兔IgG抗体同理。
不过现在的技术发达了,为了大批量生产抗体,大多数都是通过单克隆技术完成的。
PS:你的IGg的写法有误,应为IgG或者IgM。。。

