【求助】纯化蛋白制作血清
2021-08-08
问题描述:
各位大虾,我想问春花出来的蛋白如果用来打兔子制作一抗,那么变性纯化的蛋白用不用复性?我的蛋白是用Ni柱纯化,其中含有尿素和咪唑,这些用不用除去在进行注射呢?
谢谢各位
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mydream_520
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纯化的蛋白最好做过透析,去除掉里面富含的盐离子,及一些小分子杂质,减少对受体动物的伤害,所用的免疫原蛋白最好是有生物活性的,但有报道也直接用变性的蛋白打出了抗体,将纯化的蛋白与佐剂体积1:1混匀完全乳化至油包水状态,皮下多点以0.1-0.5mg/kg的量免疫兔子,两到三周后免疫第二次,以后每两周免疫一次,期间采血检测抗体效价!
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ljw1979
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小分子可以不用去除,特别是一些动物本身的代谢产物,曾经用8M的尿素保存的蛋白,一样直接打,兔子没什么问题如果蛋白溶液里面含有毒性的物质最好考虑去除,比如叠氮钠,巯基乙醇,SDS等
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