WBStainingofJurkatCellLysates

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●Anti-PARP1,wholeproteinIgYchickenpolyclonalantibodyTheTulipBiolabs,Inc. IgYchicken polyclonal antibody,anti-PARP1,cat#1051,wasmadeusinghighlypurified,recombinantfull-lengthhumanPARP1,expressedinabaculovirusexpressionsystem.ByWB,Cat.#1051recognizesintactPARP1MW=113kDa,the89kDaapoptosis-inducedcleavageproduct,andotherlowermolecularweightfragmentsofPARP1.
RecognizesPARP1,poly(ADP-ribose)polymerase-1enzyme,inhuman,rat,andmouse. Otherspecieshavenotbeentested.
●UseinWesternBlot,1µg/mlusingHRP/TMBcolorimetricmethods; <1µg/mlforECL●ELISA
PleaseseetheCat.#1051Datasheet(pdf) foracompletedescription.
TulipBiolabs生产用于Poly(ADP-核糖)和合成大麻素研究的蛋白质,抗体和试剂盒,可用于学术,制药,工业和政府实验室。Tulip还提供定制的ELISA分析开发生化分析,以及大分子的生物分析方法验证。专注于开发和执行针对生物分子和药物的专门化验。TulipBiolabs,Inc.成立于2000年,是一家私人研究和产品开发实验室。多年来,Tulip扩大了产品线,并完成了许多项目的合同工作。Tulip对开发用于药物发现的聚ADP-核糖基化研究试剂和测定法感兴趣。Tulip还对开发用于大分子药物组织分析和滥用药物的检测方法感兴趣。Tulip的实验室设施位于美国宾夕法尼亚州的兰斯代尔。
抗pADPr,克隆10H,小鼠单克隆抗体该小鼠单克隆抗体,克隆10H,识别聚(ADP-核糖)。它由H.Kawamitsu等人开发并最初描述。(1984)Biochemistry23,3771。聚(ADP-核糖)是由称为聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的一类酶合成的聚合物。使用NAD+作为底物,PARP可催化聚合物pADPr的形成,链长范围为2至300个残基,在链中包含约2%的支链。pADPr附着于核蛋白和PARP自身(自动修饰)。克隆10H单克隆抗体的用途已在文献中进行了广泛描述,包括Western印迹,免疫染色,基于ELISA的PARP活性筛选和免疫斑点印迹。
抗PARP1,全蛋白IgY鸡多克隆抗体TulipBiolabs,Inc.抗PARP1,目录号1051的IgY鸡多克隆抗体,是使用在杆状病毒表达系统中表达的高度纯化的重组全长人PARP1制备的。由WB,Cat。#1051识别完整的PARP1MW=113kDa,89kDa细胞凋亡诱导的裂解产物以及其他较低分子量的PARP1片段。
PARP14m3MARylated磁性亲和树脂TulipBiolabs,Inc.PARP14m3磁性树脂设计用于从细胞和组织裂解物中分离单ADP-核糖基化(MARylated)蛋白质。通过使用高度特异性的PARP14m3亲和树脂,可以从细胞或组织裂解物中分离出单ADP-核糖基化(MARylated)蛋白。使用与PARP14m3共价结合的磁珠的便利性进行纯化。可以从亲和树脂中干净地洗脱与树脂结合的蛋白质,然后通过质谱,免疫印迹和其他方法进行分析。PARP14m3磁性亲和树脂,产品目录。#2414是高度纯化的人PARP14巨域3融合蛋白构建体,在大肠杆菌中表达,并化学结合到1μm超顺磁珠上。
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1. 血细胞与血清分离:
取人血液 1000ml,放置10min, 1000rpm离心20min .弃沉淀,留上清备用(沉淀为血细胞,上部为血清).
2. 乳糜粒分离:4000rpm 10°C离心10分钟,采用密度梯度离心
梯度液配置:离心管下部3/4容积加血浆,上部1/4容积加0.5MnaCl+0.3MEDTA,PH7.4 乳糜粒上浮,将乳糜粒吸出,留其余液体备用.
3. 血清蛋白分离:除去球蛋白,白蛋白及其它蛋白质.
①在用超滤除白蛋白,IgG中硫酸铵盐时,膜包该如何选择?选择几个?
②如用凝胶过滤来分级纯化血清中65%硫酸铵盐析出的白蛋白和纯化33%硫酸铵盐析出的IgG,其填充介质应选择什么?其洗脱缓冲液应用什么好?
下面有些关于这方面的数据,供参考:
①牛血清白蛋白:分子量:66210;分子形状:椭圆形;分子大小:
40Å*140Å;等电点:4.7;血浆中的含量:52.0g/L。
②IgG:分子量:15300;分子形状:球状;等电点:5.8—7.3;血浆中含量:2.0g/L。
③另外,我从书上看到说:凝胶过滤在分级方法中分辨率为中等,但对脱盐效果优良;流速较低,对分级每周期约≥8小时,对脱盐仅30分钟;适用于大规模纯化的最后步骤,在纯化过程的任何阶段均可进行脱盐处理,尤其适用于两种缓冲液交替时。
期待您的帮助,谢谢您。
1.以沉淀形式保存在高浓度的硫酸铵中。
2.添加50%甘油冷冻,尤其适用于酶类。
3.如果样品要用于生物学检测,避免使用防腐剂。在体内实验中不能添加防腐剂,而应当将样品分装成小份冷冻。
4.可使用无菌滤器以延长保存时间。
5.添加稳定剂,如甘油(5-20%)、血清白蛋白(10mg/ml)、配基(浓度取决于活性蛋白的浓度)以帮助维持生物活性。
6.避免反复冻融或冻干重溶解过程,这样很可能会降低生物活性。
7.一些冷沉淀蛋白会在4度沉淀出来,包括一些小鼠IgG3亚族的抗体,不能保存在4度冰箱中,可添加防腐剂保存在室温中。

