请使用支持JavaScript的浏览器! +,E (SARS-CoV-2) Recombinant Protein (P6637),产品,Abnova,亚诺法蚂蚁淘商城
商品信息
联系客服
Abnova/E (SARS-CoV-2) Recombinant Protein/1kit/P6637
郑重提醒:
无质量问题不接受退换货,下单前请仔细核对信息。
下单后请及时联系客服核对商品价格,订单生效后再付款。
Abnova/E (SARS-CoV-2) Recombinant Protein/1kit/P6637
品牌 / 
Abnova
货号 / 
P6637
美元价:
(友情提示:该价格仅为参考,欢迎联系客服询价!)
数    量:
免费咨询热线
4000-520-616
  • Specification
  • Product Description:
  • SARS-CoV-2 E (QHD43418.1, 1 a.a. - 75 a.a.) recombinant protein with an initial Met, His-Avi tag at N-terminal expressed in Escherichia coli.
  • Host:
  • Escherichia coli
  • Theoretical MW (kDa):
  • 11.4
  • Form:
  • Liquid
  • Preparation Method:
  • Escherichia coli expression system
  • Purification:
  • Affinity purification
  • Purity:
  • > 95% by SDS-PAGE.
  • Endotoxin Level:
  • < 0.1 EU/ug of the protein by LAL method.
  • Activity:
  • Measured by its binding ability in a functional ELISA. Immobilized E (SARS-CoV-2) Recombinant Protein at 2 ug/mL (100 uL/well) can bind Recombinant 2019-nCoV Nucleocapsid with a linear range of 1.2-41.1 ng/mL.
  • Quality Control Testing:
  • SDS-PAGE Stained with Coomassie BlueQC Testing of P6637This protein was determined by SDS-PAGE with Coomassie Blue, showing a band at 12 kDa.
  • Storage Buffer:
  • In 20 mM Tris, 250 mM NaCl, pH 8.0 (0.5% TritonX-100).
  • Storage Instruction:
  • Store at -80°C.Aliquot to avoid repeated freezing and thawing.
  • Note:
  • Result of bioactivity analysis
  • Datasheet:
  • PDF DownloadDownload
  • Applications
  • SDS-PAGE
  • Application Image
  • SDS-PAGE
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
公司介绍
公司简介
蚂蚁淘(www.ebiomall.cn)是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台, 该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁 淘搜索全球供应信息,找到合适的产品后在蚂蚁淘下单,然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、 运输到中国口岸,最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证: 全球直采 在线追溯 蚂蚁淘所有产品都是自运营的,我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权; 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程, 确保货物的来源; 正规报关,提供13%增值税发票。
及时交付: 限时必达 畅选无忧 蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员,他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节; 同时通过在线的流程监控,蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上, 部分产品甚至能做到7-10天到货,即蚂蚁淘的“时必达”服务。
轻松采购: 在线下单 简单省事 蚂蚁淘的价格是真实透明的,并且具有很大的价格优势,不需要繁杂的询价比价; 报价单与合同可以直接在线生成或打印;就像在京东购物一样, 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购,订单详情会告诉您所有进程。
售后申请: 耐心讲解 优质服务 蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时, 您可通过我的订单提交您的“申请售后”, 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理, 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线:4000-520-616。
SPM-Biocameltec品牌介绍产品代理 查看更多>
燕麦蛋白质是以天然优质燕麦蛋白为原料,运用生物酶技术研发的护肤、洁肤专用的活性蛋白。燕麦富含丰富的营养活性成分,主要是燕麦膳食纤维、燕麦β-葡萄糖、燕麦蛋白质、燕麦抗氧化物质及燕麦脂肪等。目前,国内对燕麦膳食纤维、燕麦β-葡萄糖、燕麦抗氧化物质及燕麦脂肪已经进行了广泛的... 查看更多>
解离/非解离native缓冲液系统很多应用蛋白质聚丙烯酰胺凝胶区带电泳(zone electrophoresis)的研究使用一种缓冲液系统,该系统的设计把所有的蛋白质分解成单一多肽亚单位。最常用的解离试剂是十二烷基硫酸钠(SDS),一种离子型去污剂,它通过包围在多肽骨架的周围变性蛋白质。在包含有过量的SDS和巯基 查看更多>
Preparation of Brain Cytosol1. Chill a glass plate on ice. 2. Place brain tissue on the chilled glass plate and cut slices of brain into small pieces. 3. Resus 查看更多>
血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物。可利用不同的方法将其分离。血浆中的白蛋白、a1、a2、β球蛋白,纤维蛋白原,凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。γ球蛋白主要来自浆细胞。当肝脏发生病变时,肝细胞合成蛋白质的功能减退,血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检... 查看更多>
血清铁蛋白(serum ferritin,SF)是去铁蛋白和铁核心Fe3 形成的复合物,是铁的贮存形式,它是判断机体是否缺铁或铁负荷过多的有效指标。... 查看更多>
蛋白质的分离纯化方法很多,主要有:(一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析  中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加 查看更多>
到目前为止,蛋白质结构解析的方法主要是两种,x射线衍射和NMR。近年来还出现了一种新的方法,叫做Electron Microscopy。其中X射线的方法产生的更早,也更加的成熟,解析的数量也更多,我们知道,第一个解析的蛋白的结构,就是用x晶体衍射的方法解析的。而NMR方法则是在90年代才成熟并发展起来的。这 查看更多>
人造纤维的一个类别,指由从牛奶、大豆、花生、玉米等自然物中提取到的蛋白质为原料,溶解于适当溶剂中所制得的纤维。该纤维在20世纪30年代开始实现工业化生产,随着众多合成纤维的问世,相继停止生产。由于该纤维手感柔软,穿着舒适;进入90年代以来,又有生产者开始从牛奶中提取乳酪蛋白... 查看更多>
美国ImmunoBioScience Corp(IBSC)公司介绍/品牌代理 查看更多>
1。根据序列比对,相似性分析,初步估计蛋白质可能的功能2。查阅文献,看有否相关研究3。如果用血清,在未知功能情况下,很难有所作为,建议等初步知道功能后,用血清是验证抉具体作用的4。比较常用的未知基因分析方法,是从基因水平入手:将该基因敲除(现在可以考虑RNAi),看看在功能组、蛋白 查看更多>
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法……1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。2,免疫沉淀法:得有特异性抗体!3,硫酸铵沉淀法:利用高浓度 查看更多>
常见问题
蚂蚁淘所售产品均为正品吗?
蚂蚁淘的创始人兼CEO是钟定松先生,具有十年的从业经验,在业界享有良好的口碑; Ebiomall是跨境直采平台,我们直接从厂家采购,自己的团队负责国际物流和清关,中间没有第三方,蚂蚁淘承诺所售产品仅为正品,假一罚十。
下单后可以修改订单吗?
未确认状态的订单可以修改,打开“订单详情”页面,点击右上角的“修改订单”即可,若已审核确定,则订单无法修改。
商品几天可以发货?
现货产品付款审核后即可发货,大部分期货产品在3周左右即可到货,提供时必达服务的产品订单审核十天内即可发货。
订单如何取消?
如订单处于未确定状态,进入“我的订单"页面,找到要取消的订单,点击“取消订单”按钮。
可以开发票吗?
本网站所售商品都是正规清关,均开具13%正规发票,发票金额含配送费金额,另有说明的除外。
如何联系商家?
蚂蚁淘任何页面都有在线咨询功能,点击“联系客服”、“咨询”或“在线咨询”按钮,均可咨询蚂蚁淘在线客服人员, 或拨打4000-520-616,除此之外客户可在 联系我们页面找到更多的联系方式。
收到的商品少了/发错了怎么办?
同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出,可能不会同时送达,建议查看订单详情是否是部分发货状态;如未收到,可联系在线客服或者致电4000-520-616。
退换货/维修需要多长时间?
一般情况下,退货处理周期为客户收到产品一个月内(以快递公司显示签收时间为准),包装规格、数量、品种不符,外观毁损、短缺或缺陷,请在收到货24小时内申请退换货;特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
我有些问题向各位请教:
①在用超滤白蛋白,IgG中硫酸铵盐时,膜包该如何选择?选择几个?
②如用凝胶过滤来分级纯化血清中65%硫酸铵盐析出的白蛋白和纯化33%硫酸铵盐析出的IgG,其填充介质应选择什么?其洗脱缓冲液应用什么好?

下面有些关于这方面的数据,供参考:
①牛血清白蛋白:分子量:66210;分子形状:椭圆形;分子大小:
40Å*140Å;等电点:4.7;血浆中的含量:52.0g/L。
②IgG:分子量:15300;分子形状:球状;等电点:5.8—7.3;血浆中含量:2.0g/L。
③另外,我从书上看到说:凝胶过滤在分级方法中分辨率为中等,但对脱盐效果优良;流速较低,对分级每周期约≥8小时,对脱盐仅30分钟;适用于大规模纯化的最后步骤,在纯化过程的任何阶段均可进行脱盐处理,尤其适用于两种缓冲液交替时。
期待您的帮助,谢谢您。
芯片生化反应概述.pdf123
晚安8642021-07-31
一般认为血清白蛋白的正常值为40-55g/L,血清球蛋白为20-30g/L,血清总蛋白的正常值为60-80g/L,白球比的正常值为1.5-2.5。向左转|向右转
用镍柱镍柱分离纯化
固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子,例如锌。铜,镍,铁等形成复合物。因此,该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以,结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。
金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料,借助醚长生7个原子的空间。
全部容量:24-30um的含有zn的干胶
柱料结构:6%的高铰链的琼脂糖
柱料大小:45-165um
平均微粒:90um
直流速度:25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米
最大压强:0.3MPa
PH变化:长期3-13
短期2-14
化学稳定:通用含水缓冲液
0.01M盐酸,1.0M NAOH,20%乙醇(保存7天)
物理性质:可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化
耐热性能:121度下0.1M乙酸钠作用半小时
金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。
处理金属螯和柱料:
1 平衡所有用到的材料于室温。
2 搅拌金属螯和柱料
3 倒水进柱子,驱除气体。用无离子水液封几厘米。
4 将金属螯和柱料连续倒进柱子,用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。
5 然后立即用无离子水液封,装上柱盖,连接上泵。
6 打开柱子底部的开关,然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。
7 经过一个稳定的柱床填鸭后,维持填压速度为3个柱床。
使用adaptor
1 经过上溯填鸭后,关闭柱床下面开关,移开上面的薄膜,小心的加上去离子水进行液封。
2 一定角度插入adaptor,确保没有气泡。
3 确保所有的连接都没有问题,柱子/泵/样品接受器
4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。
5 固定adaptor,打开柱子开关,开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。

固定金属离子:
金属螯和柱料通过水来螯和金属的,避免发生沉淀在胶上。
1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床(去离子水)
2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好,避免形成沉淀和共沉。
3 加入一倍柱床的金属离子溶液
45倍柱床的去离子水洗涤
5至少2倍柱床的平衡缓冲液
结合:
发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后
初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐
最通用缓冲液:
0.01-0.2M磷酸钠
0.05M乙酸钠
强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。
通常如果不知道一个蛋白的结合能力,最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐,同时含有0.15-0.5M NaCl
去垢剂不会影响蛋白质的结合能力
金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定
洗脱蛋白:(3种方法)
1 降低PH(一步或者分步),大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐,磷酸或者乙酸盐。
2 逐步提高咪唑的浓度(0-0.5M),梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。
3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。
利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白
通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白,然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。

以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料,然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时,这些方法也是很好用的。
为了获得高纯度的蛋白,必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱,然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。
为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质,(包含体),可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。
样品处理:
样品要经可能溶解,避免出现堵塞现象,所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志
如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中(含有0.5M Nacl,PH7.4),必须调整PH到7-8。
上柱前准备:
洗柱料:
1 亲柔震动胶瓶充旋胶料
2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白
3 500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
4 小心去除上清
5 加入5倍体积去离子水,充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟,不要机械搅拌。
6 再次500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
7 再次小心去除上清
挂镍:
1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍,充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟,不要机械搅拌。
2500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
3小心去除上清
洗柱:
1加入5倍体积去离子水,充分振荡柱料,来回倒置5分钟
2500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
3小心去除上清
4 再洗两次柱料(一共3×5柱床去离子水)
5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料(20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4)

利用离心来纯化:
上样:
1 在起始缓冲液中加入样品,然后使整体胶浓度达到50%
2 亲柔搅拌,室温离心5-30分钟,结合能力取决于蛋白和样品浓度。
3 500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
洗胶:
1 加入5倍体积起始缓冲液,搅拌5分钟
2 500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳
4再洗两次柱料(一共3×5柱床起始缓冲液)。记得取出上清,部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱:
1 加入2倍体积洗脱缓冲液(20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4)搅拌5分钟
2再次500g 离心2-5分钟,沉淀柱料。
3再洗四次柱料(一共5×2柱床洗脱缓冲液)。记得取出上清,部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳,280nM吸光值,ELISA,WESTERN
利用流速和重力纯化:
1 在柱子底部加上滤器
2 加水排气
3 加柱帽,去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了
样品结合:
1 倒胶进入柱子
2 小心上样,用波棒室温搅拌5-30分钟
3 打开柱帽,收集流出峰用于分析
洗胶:
1 加入5倍体积起始缓冲液,收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳
2再洗两次柱料(一共3×5柱床起始缓冲液)。记得取出上清,部分用于SDS-PAGE 蛋白
电泳
洗柱:
1 加上柱帽,加入2倍体积洗脱缓冲液(20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4)搅拌5分钟。打开柱帽,收集流出峰
2再洗四次柱料(一共5×2柱床洗脱缓冲液)。记得取出上清,部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳,280nM吸光值,ELISA,WESTERN
注意:0.5M咪唑的280nM吸光值=0.5
常见问题:
1 样品太粘稠
答:核酸存在影响,可以继续超声,加入RNA酶至10ug/mlDNA酶至5ug/ml。然后冰浴1
0-15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。
2 平衡时样品洗脱了下来
答: 检查PH和缓冲液成分,如果缓冲液成分不正确,EDTA加入,强还原剂加入,都会导致这个现象出现。
加大胶的量,如果胶料承载能力过头,也绘出出现这现象。
准备新鲜的柱料,如果柱料断裂,也挂不上蛋白。
3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白
答:如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中
超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。(通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL,PH6-8),避免发泡以降解融合蛋白。
蛋白可能是是包含体,可以使用4-6M盐酸呱或者4-8 M尿素溶解。
尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳,盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳,必须换缓冲液。
洗脱液浓度太稀,可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白,证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高,可适当降低。
4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带
答:加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。
在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂(2%TRITON x-100或者2%Tween20)50% 葡萄糖,20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力,可以改变缓冲液来洗脱。
如果杂志和目的蛋白有相同结合能力,那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统,例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B
柱料再生,清洁和保存
柱料再生:
1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA
2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜
3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白
清洗柱料:
1 0.5倍柱床2M NaCl,反向洗脱10-15分钟
2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白
3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗
4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。
也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1-2小时。最后用5个柱床的70%乙醇去除去垢剂。
清洁:
1 尽可能去除微生物
2 0.5-1M NaOH反向流动半小时
3 再用3-5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡
4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力
保存:
长期保存于20%乙醇或者0.01M NaOH 于4度
抗体纯化分了几种类型,根据用途决定选择哪种方法进行纯化:
1. 粗纯:将制备抗体的血清或是腹水,细胞上清,直接用盐析法进行处理,这样可以将这些物质里面的其他杂质去掉,获得蛋白的成分,但是由于是粗纯,里面会混有大量的其他蛋白,这样获得的抗体,纯度较低,用于实验中背景比较高。
2.通用型纯化:用抗体结合蛋白Protein A,Protein G或者Protein L。因为不同来源的抗体和这些抗体结合蛋白的结合能力不同,所以需要根据抗体来源选择使用哪种抗体将诶和蛋白最好。对于有一些单链抗体,则多半使用protein L来进行纯化。经过抗体结合蛋白的亲和纯化后,溶液中基本只保留了抗体的成分,其他蛋白都去掉了,抗体纯度可以比较高。相对来说,这种方法是大规模抗体制备中,用得最多的纯化方法,很多抗体公司都采用这种方法来对抗体进行纯化。
3.特异型纯化:但是有些抗体,需要纯度特别高,特异性特别好,就不能简单采用上述两种方法进行纯化了。必须要通过将抗原固定制备成特异的亲和纯化柱,再纯化抗体。这个时候得到的就全是针对一种抗原的抗体了,特异性最好。当然,由于牵涉到抗原固定等操作,成本相应是最高的。
盐析,中性盐使蛋白质脱去水化层而聚集沉淀。eg.硫酸铵
有机溶剂沉淀,极性有机溶剂降低介点常数使蛋白质凝集沉淀。eg.甲醇、乙醇、丙酮。
磺基水杨酸也可以沉淀蛋白质,但要加酸调节ph,使之低于血清蛋白的pi,使蛋白质带正电荷,与水杨酸酸根结合生成不溶盐而沉淀。
血清蛋白质均带负电荷,但各种蛋白质带负电荷的程度有所差异,以白蛋白为最多。而血清白蛋白等电点为4.7-4.9。所以把ph调到4.7以下就可以了。
我所分离的血清中含有较多的血红蛋白,我是通过辛酸-硫酸铵沉淀和high-Q离子层析,在通过辛酸-硫酸铵之后的沉淀还是红色的,不知道能不能过离子交换柱,会不会堵死,或者有什么方法把血红蛋白除去,请高手指教,谢谢大家了
根据什么来确定它是清蛋白还是γ-球蛋白?判定它们纯度的依据是什么?
家兔免疫我用的是Histag的重组蛋白
纯化时准备用GSTtag的重组蛋白,蛋白是一样的
以前实验室也有人做过

前面的表达、纯化和透析的时候都好好的
当我把透析好的蛋白跟处理过的CNBr活化的Sepharose4B混合4度旋转过夜后,第二天下午就发现有沉淀。拿沉淀跑了胶,就是我得重组蛋白
另外,透析和过夜是我用的溶液都是纯化时用的PH8.3的结合缓冲液

不知道是什么原因。为什么好好的蛋白一跟Sepharose旋转过夜就会有沉淀呢
his-tag的蛋白,40多kD,提的包涵体,溶解后有不少杂带,大小条带都有,相对量倒是不大。现在兔子已经四免了,得到了抗血清。该如何纯化血清,得到较多的针对目的蛋白的抗体呢。
可以先用柱子提纯包涵体里的his-tag蛋白,然后再IP么?
谢谢
动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因的B淋巴细胞合成不同的抗体.当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞.被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中.如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆.单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体. 简介 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上,创建立杂交瘤技术,他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合,成为杂交细胞系,既具有瘤细胞易于在体外无限增殖的特性,又具有抗体形成细胞的合成和分泌特异性抗体的特点.将这种杂交瘤作单个细胞培养,可形成单细胞系,即单克隆.利用培养或小鼠腹腔接种的方法,便能得到大量的、高浓度的、非常均一的抗体,其结构、氨基酸顺序、特异性等都是一致的,而且在培养过程中,只要没有变异,不同时间所分泌的抗体都能保持同样的结构与机能.这种单克隆抗体是用其他方法所不能得到的. 这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题,可用于探讨①蛋白质的精细结构;②淋巴细胞亚群的表面新抗原;③组织相容性抗原;④激素和药物的放射免疫(或酶免疫)分析;⑤肿瘤的定位和分类;⑥纯化微生物和寄生虫抗原;⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合,将药物带至病灶部位.因此,单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究,为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景. 2制备过程 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程. 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射. 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞. 2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液. 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇.在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞. 3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基.在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡. 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡. 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖. 4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化.通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养.采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增.经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存. 5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法. (1)体内诱生法 取Balb/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理.1-2周后,腹腔内接种杂交瘤细胞.杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖,并产生和分泌单克隆抗体.约1-2周,可见小鼠腹部膨大.用注射器抽取腹水,即可获得大量单克隆抗体. (2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养.在培养过程中,杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体,收集培养上清液,离心去除细胞及其碎片,即可获得所需要的单克隆抗体.但这种方法产生的抗体量有限.各种新型培养技术和装置不断出现,大大提高了抗体的生产量.
血清免疫蛋白的纯化为什么要检测柱子流出的液体是否有铵根
血清中蛋白质按电泳法一般可分为五类:清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白,其中γ-球蛋白含量约占16%,100 mL血清中约含1.2 g左右。不同种类的蛋白质其分子量、溶解度,以及在一定条件下带电荷的情况有所不同,可根据这些性质的差别,分离及提纯蛋白质。首先利用清蛋白和球蛋白在高浓度中性盐溶液中(常用硫酸铵)溶解度的差异而进行沉淀分离,此为盐析法。半饱和硫酸铵溶液可使球蛋白沉淀析出,清蛋白则仍溶解在溶液中,经离心分离,沉淀部分即为含有γ-球蛋白的粗制品。用盐析法分离而得的蛋白质中含有大量的中性盐,会妨碍蛋白质进一步纯化,因此首先必须去除。常用的方法有透析法、凝胶层析法等。本实验采用凝胶层析法,其目的是利用蛋白质与无机盐类之间分子量的差异。当溶液通过SephadexG-25凝胶柱时,溶液中分子直径大的蛋白质不能进入凝胶颗粒的网孔,而分子直径小的无机盐能进入凝胶颗粒的网孔之中.因此在洗脱过程中,小分子的盐会被阻滞而后洗脱出来,从而可达到去盐的目的。纯化后的γ-球蛋白可利用醋酸纤维素薄膜电泳法鉴定其纯度。
品牌分类