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SBI/pCDH-CuO-MCS-EF1α-RFP SparQ™ Cloning and Expression Lentivector/10 µg/QM512B-1-10 µg
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Gettight,titratablegeneexpressionwiththisdualpromoterSparQLentivector-includesaconstitutively-expressedRFPreporterdrivenbytheEF1αpromoter

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pCDH-CuO-MCS-EF1α-RFPdualpromoterlentivector

10µg
QM512B-1
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SystemBiosciences,简称SBI,美国加利福尼亚湾区新成立的生技公司,致力于独特,创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定,研究之崭新方法和工具为宗旨。


美国SBI代理SystemBiosciences,简称SBI,美国加州湾区新成立的生技公司,致力于独特、创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)研究之相关工具。


现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)的研究之相关工具。系统Biosciences公司(SBI)致力于开发独特,革新的技术,为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具.SBI是专业的慢病毒产品公司,提供基于慢病毒的所有相关产品,质粒,试剂盒及相关配套试剂和慢病毒扩展产品,如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。System Biosciences继续创造新的独特产品以及改善我们完善的产品线。我们对提供领先技术的承诺与我们所有研究试剂和研究项目服务的高质量制造和质量控制相匹配。  2009年要寻找的东西:以下是即将推出的新产品。新型miRZips™:基于慢病毒载体的新型技术可永久敲低MicroRNA。双标记shRNA表达载体:SBI将发布新的功能强大的shRNA表达慢病毒载体pGreenPuro™,以便为稳定的RNAi实验选择稳定转导的细胞的GFP和Puro标记。甾醇反应pGreenFire™慢病毒报告子:基于慢病毒载体的转录报告子,用于监测与固醇感应转录因子相关的转录网络活性-心血管疾病途径的关键。诱导型表达慢载体:新的构建体将允许CDNA,shRNA和microRNA的“按需”表达。2007–2008年的新产品新的miR-SNaRE:MicroRNA小型非编码RNA富集系统,该系统使用带有表位标签的microRNA加工因子来提取蛋白质及其相关RNA。识别驱动RISC复合体的信使RNA。新的GeneNet™聚焦的shRNA库:这些聚焦的shRNA库编码一组针对所有与人类激酶,磷酸酶或细胞凋亡相关基因有关的特定功能或类别基因设计的shRNA集合。这些文库可进行有针对性的高通量RNAi筛选。新的miRNomeMicroRNA分析仪:qPCR阵列在预先格式化的板中包括microRNA分析,可用于人类的完全互补或小鼠单个microRNA的完全互补,每块板上带有三个内源参考RNA对照。所有基于SangermiRBasemicroRNA数据库的microRNA分析均已注册。新的Lenti-miR™MicroRNA前体克隆:在基于HIV的慢病毒载体中可获得更多的microRNA前体集合。超过580个单独的microRNA前体克隆可用阵列形式或合并的慢病毒形式用于HT筛选。新的基于慢病毒的干细胞报道者:SBI越来越多的慢病毒载体已被开发为将基因构建体在体内外几乎传递给任何细胞类型的最有效方法。SBI已将我们的慢病毒构建体系列扩展为干细胞报道分子。使用连接到GFP报告基因的细胞和途径特异性启动子,轻松创建转基因细胞系以监测细胞分化。QuantiMir™RT试剂盒:这项流行的新技术可通过一次cDNA合成同时进行实时qPCR定量分析数百种microRNA。设计您自己的microRNA测定法以进行创新性实验。癌症microRNAqPCR分析小组(OncoMir系列):预格式化的microRNA分析小组,用于评估95种已知与癌症有关的microRNA。干细胞microRNA分析小组:介绍了95种参与干细胞分化的microRNA,可同时监测干细胞的自我维持,造血途径和神经分化。SBI完善的产品线FullSpectrum™完整信使RNA扩增试剂盒:利用针对mRNA最常见基序的mRNA特异性引物提供完整的mRNA转录物(5"和3"末端)的无偏见,完整代表。GeneNet™siRNA库:全基因组,即用型,预包装的慢病毒库为筛选与生物学反应相关的基因功能提供了令人兴奋的机会。干扰素反应检测试剂盒:区分真正的RNA干扰和压力相关的细胞反应。PathNet™转录报告基因慢病毒载体:一种独特的方法,可创建各种稳定的报告基因细胞系,用于信号通路的研究。我们感谢您过去的支持,并期待为您提供最佳的新试剂,技术和服务,以加速您成功的研究目标。


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2017-06-27
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RNA干扰不能称之为基因敲出,只出算是KNOCK-DOWN,使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT,是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
RNA干扰与基因敲除123
蜗牛小灵子2017-02-23

本是小菜鸟,目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响,需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况,但是无论如何夜找不到抑制剂,做RNA干扰的话经费就超出预算了!急求各位大神,帮忙出个解决方案吧!非常感谢!

您好!(RNA干扰的原理附图有六张,但是这里只能粘贴插入一张图片,你把邮箱给我,我发给你全的原理图)短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNAinterference,RNAi)。siRNA(smallinterferingRNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA(siRNA)。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员,切割dsRNA为19~23ntsiRNA,这是一个依赖ATP的耗能过程.切割后的siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体(RISC,RNA-inducedsilencingcomplex)。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本,最终导致基因沉默效应。向左转|向右转
RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。 Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype. RNA Accepted (2006).)他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低,并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同,反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说,Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径,通过microRNA途径,其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用,而如果进入microRNA途径,只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果,这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默,造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因,正好与目的基因位于同一信号通路中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其它基因,亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因,自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后,越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明,您所获得的实验结果,不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
【求助】有关RNA干扰的问题123
奈何楼楼主2021-07-25
本人正在进行某一基因的RNA干扰试验,今天PCR显示干扰后结果不降反升,不知道问题出在什么地方,小生刚入此道,希望各位多多指教!多谢!
Argonaute (AGO):一类庞大的蛋白质家族,是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域:PAZ和PIWI两个结构域,但具体功能尚不清楚。的研究表明,PAZ结构
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域,对于siRNA和目标mRNA相互作用,从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程,是必不可少的。同时,不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如,在人当中,AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程;而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC:是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一员,主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地,我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域,最先在果蝇中发现,并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC:是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物(80S)。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员,RLC成员,和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在,表明了RISC组装不是孤立的,同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系,很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor:一种核内的复合物,主要由Drosha和Pasha两者组成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC):是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋,为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋;R2D2部分是非对称性的感受器,为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes (miRLCs)的研究尚未报导,因为它的过程更为复杂,而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer:在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转


近期,北京大学基础医学院鲁凤民教授课题组与许中伟、夏宁邵教授等合作,在《Theranostics》杂志上在线发表了题为“ThegRNA-miRNA-gRNAternarycassettecombiningCRISPR/Cas9withRNAiapproachstronglyinhibitshepatitisBvirusreplication”的研究论文。该研究通过模拟microRNA(miRNA)的生成过程,整合双gRNA导向的CRISPR/Cas9和RNA干扰技术,高效破坏乙型肝炎病毒(HBV)的复制模板-共价闭合环状DNA(ccCDNA),探索病毒清除新路径。北医王杰讲师、陈然和张瑞阳博士研究生为该论文的共同第一作者。

目前,我国仍有慢性HBV感染者约7800万人,慢乙肝患者约2800万人。HBV感染仍是我国病毒性肝炎、肝硬化及肝癌的重要致病因素。作为HBV复制模板的cccDNA,由于其半衰期相对较长,加上cccDNA池的不断补充,使得细胞核内的cccDNA持续存在、感染慢性化。目前,临床上治疗慢乙肝的常用药物为核苷(酸)类似物和长效干扰素,二者均不直接作用于cccDNA,难以有效清除病毒实现临床治愈。因此,研发直接靶向cccDNA的药物,寻找清除cccDNA的新方法和新策略,是当前慢乙肝治疗药物研发的热点。

该研究以miRNA-31为基本骨架,通过模拟其核心序列的二级结构设计HBV特异的miRNA(miR-HBV),miRNA两侧侧翼序列为特异性靶向cccDNA不同位点的引导RNA(gRNA)。如图所示,该gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联体表达体系导入细胞后,在细胞核内转录形成gRNA-(miR-HBV)-gRNA长转录本,经内源的Drosha/DGCR8复合体剪切,形成2个gRNA和1个miR-HBV前体(pre-miR-HBV)。进入细胞质后,pre-miR-HBV进一步经Dicer酶剪切,形成成熟的miR-HBV。一方面双gRNA导向的CRISPR/Cas9系统通过切割并去除cccDNA的关键调控和编码序列直接破坏cccDNA,另一方面通过miR-HBV在转录后水平抑制HBV复制,进而抑制cccDNA池的补充,协同促进HBVcccDNA的清除。此外,本研究还发现,当pri-miRNA-31的侧翼序列长度为38bp时与双gRNA组成的三联体对HBV复制的抑制效率最高。

双gRNA导向的CRISPR/Cas9整合RNAi技术高效抑制HBV复制模式图

当然,该技术离临床应用尚有较远的距离。一方面如何高效和靶向性地将三联体递送到HBV感染的肝细胞内是需要攻克的一大障碍;另一方面,CRISPR/Cas9基因编辑技术的脱靶效应也有安全性之虞。然而,近年来随着Cas核酸酶的不断改造,其脱靶效应得到了有效控制,安全性大为提高。而且,随着金黄色葡萄球菌Cas9的发现,使得CRISPR/Cas9系统可以装入腺相关病毒载体中,致使该技术应用于临床的距离逐渐缩短。

总之,本研究通过gRNA-(miR-HBV)-gRNA三联表达框架联合CRISPR/Cas9和RNA干扰技术高效破坏cccDNA,促进HBV清除,为慢乙肝抗病毒治疗提供了新的思路。该项研究得到国家十二五重大科技专项计划“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”项目和国家自然科学基金的支持。

论文链接:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28839466


求大神解惑,RNA干扰回复实验是怎么做的?我的实验需要设计一个RNArescue组,不知道怎么操作。
欲研究某基因的功能,只知道现在很多干扰实验是在细胞水平体外进行实验的.不清楚目前能否应用RNA干扰在小鼠或其它动物上进行,这种设计是否可行.
  请有经验的战友指点,若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章.
  非常感谢!

找公司设计了重组慢病毒载体,共设计3条干扰序列,转染靶细胞测干扰效率。发现mRNA表达水平下降不明显,而蛋白水平明显下降。请问该如何解释,有相关文献吗?可以用抑制了靶蛋白翻译来解释吗?


新手上路,请大家多多关照,我是一名研究生,现在正在做RNA干扰方面的实验,可是却不知道RNA干扰的具体步骤,需要什么试剂,在网上查了半天也查不到,所以到这里来求助各位前辈,希望各位以前做过或者现在正在做这方面研究的前辈们能给指点一下迷津,在此谢谢了。
请说出其要点。谢谢。急着要啊!周四要考试了啊!呵呵!
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