Study cellular processes with this Cyto-Tracer that labels the cytoskeleton with copGFP (GFP expressed by the CMV promoter)
pCT-Tublin-GFP (pCMV, Cytoskeleton, alpha-tubulin Tag)
pCT-Tublin-GFP (pCMV, Cytoskeleton, alpha-tubulin Tag; pre-packaged virus)
SystemBiosciences,简称SBI,美国加利福尼亚湾区新成立的生技公司,致力于独特,创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定,研究之崭新方法和工具为宗旨。
美国SBI代理SystemBiosciences,简称SBI,美国加州湾区新成立的生技公司,致力于独特、创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)研究之相关工具。
现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)的研究之相关工具。系统Biosciences公司(SBI)致力于开发独特,革新的技术,为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具.SBI是专业的慢病毒产品公司,提供基于慢病毒的所有相关产品,质粒,试剂盒及相关配套试剂和慢病毒扩展产品,如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。System Biosciences继续创造新的独特产品以及改善我们完善的产品线。我们对提供领先技术的承诺与我们所有研究试剂和研究项目服务的高质量制造和质量控制相匹配。 2009年要寻找的东西:以下是即将推出的新产品。新型miRZips™:基于慢病毒载体的新型技术可永久敲低MicroRNA。双标记shRNA表达载体:SBI将发布新的功能强大的shRNA表达慢病毒载体pGreenPuro™,以便为稳定的RNAi实验选择稳定转导的细胞的GFP和Puro标记。甾醇反应pGreenFire™慢病毒报告子:基于慢病毒载体的转录报告子,用于监测与固醇感应转录因子相关的转录网络活性-心血管疾病途径的关键。诱导型表达慢载体:新的构建体将允许CDNA,shRNA和microRNA的“按需”表达。2007–2008年的新产品新的miR-SNaRE:MicroRNA小型非编码RNA富集系统,该系统使用带有表位标签的microRNA加工因子来提取蛋白质及其相关RNA。识别驱动RISC复合体的信使RNA。新的GeneNet™聚焦的shRNA库:这些聚焦的shRNA库编码一组针对所有与人类激酶,磷酸酶或细胞凋亡相关基因有关的特定功能或类别基因设计的shRNA集合。这些文库可进行有针对性的高通量RNAi筛选。新的miRNomeMicroRNA分析仪:qPCR阵列在预先格式化的板中包括microRNA分析,可用于人类的完全互补或小鼠单个microRNA的完全互补,每块板上带有三个内源参考RNA对照。所有基于SangermiRBasemicroRNA数据库的microRNA分析均已注册。新的Lenti-miR™MicroRNA前体克隆:在基于HIV的慢病毒载体中可获得更多的microRNA前体集合。超过580个单独的microRNA前体克隆可用阵列形式或合并的慢病毒形式用于HT筛选。新的基于慢病毒的干细胞报道者:SBI越来越多的慢病毒载体已被开发为将基因构建体在体内外几乎传递给任何细胞类型的最有效方法。SBI已将我们的慢病毒构建体系列扩展为干细胞报道分子。使用连接到GFP报告基因的细胞和途径特异性启动子,轻松创建转基因细胞系以监测细胞分化。QuantiMir™RT试剂盒:这项流行的新技术可通过一次cDNA合成同时进行实时qPCR定量分析数百种microRNA。设计您自己的microRNA测定法以进行创新性实验。癌症microRNAqPCR分析小组(OncoMir系列):预格式化的microRNA分析小组,用于评估95种已知与癌症有关的microRNA。干细胞microRNA分析小组:介绍了95种参与干细胞分化的microRNA,可同时监测干细胞的自我维持,造血途径和神经分化。SBI完善的产品线FullSpectrum™完整信使RNA扩增试剂盒:利用针对mRNA最常见基序的mRNA特异性引物提供完整的mRNA转录物(5"和3"末端)的无偏见,完整代表。GeneNet™siRNA库:全基因组,即用型,预包装的慢病毒库为筛选与生物学反应相关的基因功能提供了令人兴奋的机会。干扰素反应检测试剂盒:区分真正的RNA干扰和压力相关的细胞反应。PathNet™转录报告基因慢病毒载体:一种独特的方法,可创建各种稳定的报告基因细胞系,用于信号通路的研究。我们感谢您过去的支持,并期待为您提供最佳的新试剂,技术和服务,以加速您成功的研究目标。
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两方面的证据提示转座子活性的抑制与siRNA有关
① 发现蠕虫mut-7 基因参与RNAi 并且与转座子的转座抑制有关;
② 在果蝇中, 参与RNAi 的RNA 解螺旋酶Spindle-E 的突变将导致该基因引起的基因沉默的缺失, 同时提高了反转录转座子活性。 RNAi抵御病毒感染
在拟南芥中研究转基因引起基因沉默时发现, sgs2/sde1基因突变的拟南芥对病毒的侵染表现出高度的敏感性 。 RNAi参与异染色质的形成和维持
Hall 等研究表明,着丝粒同源重复序列和RNAi 组分一起正负调节着异染色质的形成并共同促使异染色质组装成核;Vople 等在敲除裂殖酵母( S. pombe) 的RNAi 途径基因( 如Argonaute 、Dicer 、RDRP) 时发现异染色质转录得到的dsRNA可以在RNAi 途径的参与下, 加工成si RNA,si RNA 募集异染色质蛋白1( HP1) , 然后靶向性引起相应异染色质区域的转基因沉默。 RNAi参与机体的发育调控及生理代谢
RNAi 只抑制转录后的基因, 所以RNAi 在生物体发育学研究中具有优势。Chuang 等用RNAi 技术进一步证实了AG、CLV3 、AP1 、PAN 等已知功能基因在拟南芥花发育过程中的功能。在RNAi 过程中形成的RISC 复合物可根据不同情况分别利用si RNA 或stRNA 行使不同的功能, 但最终均导致特定基因沉默。向左转|向右转
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用,使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用,使相应基因不能被转录,从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能,使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明,在小鼠卵母细胞中,通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论,针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化,从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内,、被切割产生siRNA片断,再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA,但mRNA因被降解使基因功能被阻断,这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性,只能引起同源mRNA降解,如果siRNA与mRNA有一个bp不配对,RNAi作用就极大降低,如果两者有4个bp不配对,就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时,发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA),其长度也在21~25 nt之间,这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合,从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70~80 nt时,容易形成双链的茎环状结构,其双链茎的长度正好在21~25 nt之间,这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA,由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA,它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
⒉特异性:Elbashir等和Brummel kamp等发现在21~23个碱基对中有1~2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应:Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中,hTF167i和hTF372i能够抑制85%~90%的基因活性,hTF562i只能抑制部分基因活性,而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA,有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基,但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性,相对而言,GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应:Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比,两者的沉默基因效果无差异,但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后,hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性:在线虫中,双链RNA可以从起始位置传播到远的地方,甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1,它可以将双链RNA转运出细胞,因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物,因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
本是小菜鸟,目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响,需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况,但是无论如何夜找不到抑制剂,做RNA干扰的话经费就超出预算了!急求各位大神,帮忙出个解决方案吧!非常感谢!
请有经验的战友指点,若可以最好能提供几篇应用动物进行RNA干扰研究的文章.
非常感谢!
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域,对于siRNA和目标mRNA相互作用,从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程,是必不可少的。同时,不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如,在人当中,AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程;而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC:是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一员,主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地,我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域,最先在果蝇中发现,并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC:是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物(80S)。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员,RLC成员,和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在,表明了RISC组装不是孤立的,同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系,很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor:一种核内的复合物,主要由Drosha和Pasha两者组成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC):是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋,为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋;R2D2部分是非对称性的感受器,为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes (miRLCs)的研究尚未报导,因为它的过程更为复杂,而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer:在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转
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