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BioAssay Systems/EnzyFluo™ NAD/NADH Assay Kit/100 tests/EFND-100
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4000-520-616
EnzyFluo™ NAD/NADH Assay Kit
- Product Overview
- Product FAQ
- Product Citations
- Assay Service
ProtocolSDS
Application
- For sensitive determination of NAD and NADH and evaluation of drug effects on NAD/NADH metabolism. Direct NAD/NADH Assays in 96-Well PlateNEW!!!
Key Features
- Sensitive and accurate. Detection limit of 0.02 μM and linearity up to 1 μM NAD+/NADH in 96-well plate assay.
- Convenient. The procedure involves adding a single working reagent, and reading the fluorescence at time zero and 10 min.
- High-throughput. Can be readily automated as a high-throughput 96-well plate assay for thousands of samples per day.
Method
- F530/585nm
Samples
- Cell, tissue extracts etc Direct NAD/NADH Assays in 96-Well PlateNEW!!!
Species
- All
Size
- 100 tests
Detection Limit
- 0.02 μM
Shelf Life
- 6 months
More Details
- Pyridine nucleotides play an important role in metabolism and, thus, there is continual interest in monitoring their concentration levels. Quantitative determination of NAD+/NADH has applications in research pertaining to energy transformation and redox state of cells or tissue. BioAssay Systems EnzyFluo™ NAD+/NADH assay kit is based on a lactate dehydrogenase cycling reaction, in which the formed NADH reduces a probe into a highly fluorescent product. The fluorescence intensity of this product, measured at λex/em = 530/585 nm, is proportional to the NAD+/NADH concentration in the sample. This assay is highly specific for NAD+/NADH with minimal interference (<1%) by="">+/NADPH and is a convenient method to measure NAD, NADH and their ratio. Direct NAD/NADH Assays in 96-Well PlateNEW!!!
Can I determine NAD/NADH directly in 96-well plates?
Yes, NAD/NADH can be determined directly in 96-well plate. Please see our optimized protocolDirect NAD/NADH Assays in 96-Well PlateWhen tissue is used, should it be freshly obtained? Or is -80°C storage ok?
If direct sample processing is not possible, we recommend snap freezing tissue samples in liquid nitrogen and keeping them either in liquid nitrogen or at -80°C until further processing.I have conducted protocols that involve trypsinizing cells, washing with PBS, pelleting, and then applying extraction buffer. My concern with this method is that PBS is known to cause mitochondrial fragmentation very soon after application to cells. Obviously, the functionality of the mitochondria is very important for NADH/NAD levels. I developed an alternative by keeping my cells adhered to the plate, washing once with pbs, applying heated extraction buffer to the cells directly and then scraping cells off. Do you have any thoughts or experience that would indicate whether one method is better than the other?
The second method is better because the first method may cause mitochondrial fragmentation and thus may alter intracellular NAD/NADH concentrations. The second method involves less pretreatment. Adding the heated extraction buffer terminates the metabolic reactions in the cells and is thus much less likely to alter the intracellular NAD/NADH concentrations.I have also done many experiments with different numbers of cells. What I notice is that there seems to be a sigmoidal relationship between the number of cells and the NAD and NADH concentrations. I am using C2C12 and H9C2 cells. Do you have any experience with these cells at different seeding densities? Also, do you consistently see a relationship between number of cells NAD(H) concentrations? Is this relationship linear, exponential, sigmoidal?
We have not done these experiments. Your results are very interesting, and not unexpected. In general, cells are healthy at certain densities. When cells lack contacts for a healthy environment at low density, they are likely to produce less NAD/NADH, and if too dense, the cells become less active and thus would reach a plateau in NAD/NADH concentrations.For more detailed product information and questions, please feel free to Contact Us. Or for more general information regarding our assays, please refer to our General Questions.Liemburg-Apers, Dania C., et al (2016). Acute stimulation of glucose influx upon mitoenergetic dysfunction requires LKB1, AMPK, Sirt2 and mTOR-RAPTOR. J Cell Sci 129.23: 4411-4423. Assay: NAD/NADH in mouse cells. Kim, Ha-Neui, et al. (2015) Sirtuin1 suppresses osteoclastogenesis by deacetylating FoxOs. Molecular Endocrinology 29.10: 1498-1509. Assay: NAD/NADH in mice.To find more recent publications, pleaseclick here.
If you or your labs do not have the equipment or scientists necessary to run this assay, BioAssay Systems can perform the service for you.Simply send us your samples:- Fast turnaround - Quality data - Low costPlease email or call 1-510-782-9988 x 2 to request assay service.
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蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
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蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
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蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
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2021-09-23
1.化学合成siRNA项目服务RNAi双链设计：客户需要与我们共同讨论实验方案，并提供靶基因名称、序列或GeneBankID等。siRNA合成根据客户要求可进一步转染哺乳动物细胞；检测抑制效果：荧光定量PCR检测mRNA表达情况、WesternBlot检测蛋白表达情况。提供实验报告：siRNA序列、构建载体的测序报告；荧光定量PCR检测报告、WesternBlot图片等。 查看更多
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南京恩晶生物科技有限公司在发布的ARHGEF15-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector供应信息，浏览与ARHGEF15-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的产品或在搜索更多与ARHGEF15-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的内容。 查看更多
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2016-10-13
近日美国生物技术公司Alnylam宣布叫停revusiran的三期临床开发。revusiran作为RNAi疗法首个进入临床阶段的治疗性药物，它的失利是该领域面临的又一沉重打击。 查看更多
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2021-07-22
RNAi技术先驱Cell子刊：优化RNAi新工具RNAi是在20世纪90年代末发现的一种自然生物学机制，指的是一些短RNA分子结合并“干扰”了包含蛋白质生成指令的一些基因所发送的信息。这样的干扰可以阻止基因表达。除帮助调控基因表达，在包括人类在内的许多物种中RNAi信号通路还保护了基因组对抗寄生病毒及转座子。自2000年代中期科学家们开始利用RNAi以来，它提供了一种人为“抑制”特异基因表达的途经。例如，通过在小鼠一类的模型生物体中... 查看更多
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2016-10-13
近日美国生物技术公司Alnylam宣布叫停revusiran的三期临床开发。revusiran作为RNAi疗法首个进入临床阶段的治疗性药物，它的失利是该领域面临的又一沉重打击。 查看更多
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2018-05-15
上海研生实业有限公司所提供的RNAin（非冻型RNA样品保存液）质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-08-08
《高新技术科普丛书:RNA干扰技术》系统阐述RNA干扰技术原理及在各领域的应用，内容包括RNA干扰技术的发现史、基本原理、基本技术，RNA干扰技术用于基因与基因组功能研究、用于药物靶点的确认、用于治疗药物的研发，以及各类天然的siRNA与miRNA简介。... 查看更多
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2021-09-11
RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默，主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内... 查看更多
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LGALS8Pre-designChimeraRNAi是由亚诺法生技股份有限公司（Abnova)代理或销售的Abnova品牌的试剂，产品来源于台湾。亚诺法生技股份有限公司（Abnova)是中国最权威的LGALS8Pre-designChimeraRNAi试剂销售服务商之一，在台湾等地方销售LGALS8Pre-designChimeraRNAi试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业LGALS8Pre-designChimeraRNAi仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的LGAL 查看更多
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2018-03-20
上海吉凯基因化学技术有限公司在发布的定制RNAi腺病毒产品供应信息，浏览与定制RNAi腺病毒产品相关的产品或在搜索更多与定制RNAi腺病毒产品相关的内容。 查看更多
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2017-12-05
南京恩晶生物科技有限公司在发布的CST4-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector供应信息，浏览与CST4-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的产品或在搜索更多与CST4-set siRNA/shRNA/RNAi Lentivector相关的内容。 查看更多
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2021-08-03
书中对RNA 干扰的理论系统、技术体系及应用研究进行整体的构思，以该领域最新的研究成果为基础，除了双链RNA干扰之外，重点突出了对新发现的微小RNA(miR NA)进展的描述，从而全面系统地描述了RNA干扰；结合作者实验中的研究经验，系统地介绍了当今RNA干扰在多种生物体系中研究的实用技术方法。... 查看更多
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Sh RNA干扰后,mRNA水平干扰不明显,蛋白水平明显,如何解释?相关...123
butterflybow2021-07-20
RNA干扰原理图解 实验方法 123
xiaoxia61952018-01-20
您好！（RNA干扰的原理附图有六张，但是这里只能粘贴插入一张图片，你把邮箱给我，我发给你全的原理图）短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNAinterference，RNAi）。siRNA（smallinterferingRNAs）就是这种短片断双链RNA分子，能够以序列同源互补的mRNA为靶目标，降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA（siRNA）。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员，切割dsRNA为19~23ntsiRNA，这是一个依赖ATP的耗能过程.切割后的siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体（RISC，RNA-inducedsilencingcomplex）。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本，最终导致基因沉默效应。向左转|向右转
RNA干扰与基因敲除123
蜗牛小灵子2017-02-23
本是小菜鸟，目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响，需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况，但是无论如何夜找不到抑制剂，做RNA干扰的话经费就超出预算了！急求各位大神，帮忙出个解决方案吧！非常感谢！
【进展】RNA干扰在眼科的应用进展 眼科专业讨论版论坛123
apiao992021-07-27
相关疾病：单纯疱疹病毒感染先天性卵巢发育不全综合征年龄相关性黄斑变性视网膜脱离青光眼白内障RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程，是生物进化过程中保留下来的基因表达调控......
动物体内RNA转染,RNA干扰,基因沉默实验的创举 123
ding2000yj2021-07-30
将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠，2天后，取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图，图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg，后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。
根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA（作用于LaminA/C）和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织，分离RNA，用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果，图5为各器官分别局部注射结果。
英格恩生物体内转染试剂，3天可完成动物体内转染实验，让动物干扰，基因敲除实验变得简单、快速有效！
【求助】有关RNA干扰的问题123
奈何楼楼主2021-07-25
本人正在进行某一基因的RNA干扰试验，今天PCR显示干扰后结果不降反升，不知道问题出在什么地方，小生刚入此道，希望各位多多指教！多谢！
【求助】RNA干扰回复 核酸基因技术讨论版论坛123
庞紫2021-07-28
求大神解惑，RNA干扰回复实验是怎么做的？我的实验需要设计一个RNArescue组，不知道怎么操作。
RNA干扰与基因敲除 123
泽速浪02652021-07-21
基因敲除是指利用各种手段使某个基因不再表达，常见的方法是在基因的转录区插入一段外源DNA序列，从而破坏该基因的表达；RNA干扰是指一类小RNA可以与目的基因配对结合，从而使正常的基因表达受到干扰；基因沉默是指位于有些基因座的基因其表达不活跃甚至不表达的现象。
RNA干扰技术原理及应用123
2018-01-20
请说出其要点。谢谢。急着要啊！周四要考试了啊！呵呵！
CRISPRCas9基因敲除与RNA干扰优点比照_cas9基因编辑_cas12a_...123
橙asmxm31832018-01-14
RNA干扰不能称之为基因敲出，只出算是KNOCK-DOWN，使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT，是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
营养物质刺激肠道L细胞分泌GLP1的机制123
丽梨子2018-01-14
如题...如果可以遗传,遗传下去的物质是什么?谢谢
RNA干扰的详细实验步骤 实验方法 123
玩世3102018-01-20
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。 Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype. RNA Accepted (2006).）他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低，并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同，反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
简单来说，Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径，通过microRNA途径，其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用，而如果进入microRNA途径，只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果，这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默，造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因，正好与目的基因位于同一信号通路中，或者与目的基因的生物学功能相似，那么，如果因脱靶而干扰了其它基因，亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上，可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰，或者虽然干扰了目的基因，但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因，自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后，越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明，您所获得的实验结果，不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
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