Overview
Get started with the SparQ™ Cumate Switch System
We’ve made it easy to get started with the SparQ™ Cumate Switch System, with the SparQ Cumate Switch Starter Pack. The Starter Pack includes all three components of the SparQ Cumate Switch System so you can quickly get cumate-inducible expression of your gene- or miRNA-of-interest into your lab.
- Robust—increase expression up to 32-fold
- Adjustable—tune expression levels by titrating the amount of cumate
- Reversible—turn expression on, then off, then on again
- Versatile—choose from all-in-one formats that co-express CymR and your gene-of-interest, or two-vector systems where CymR is expressed from a different plasmid
- Powerful—suitable for in vivo applications
With SBI’s SparQ™ Cumate Switch System, you can get inducible gene expression in mammalian cells through the binding of cumate, a non-toxic small molecule, to CymR. Expression levels of your gene-of-interest are tightly controlled and increase with increasing cumate concentration until maximum induction is reached—see as much as a 32-fold increase in gene expression. Even better, induction is reversible, so you can turn expression levels on and off. Delivering negligible background expression in the absence of cumate, the SparQ System is an excellent choice for achieving controlled levels of gene expression.
What’s included in the SparQ Cumate Switch Starter Pack?
The Starter Pack includes:
- CymR expression lentivector pCDH-EF1α-CymR-T2A-Puro as pre-packaged virus (# QM200VA-2)
- Cumate Solution (1,000x; # QM100A-1)
- And any one of our two-component SparQ Cloning and Expression Lentivectors (the All-in-one SparQ Lentivectors Cat.# QM800A-1 and QM812B-1 are not eligible to be included in the SparQ Cumate Switch Starter Pack)
- pCDH-CuO-MCS (# QM500A-1)
- pCDH-CuO-MCS-EF1α-GFP (# QM511B-1)
- pCDH-CuO-MCS-EF1α-RFP (# QM512B-1)
- pCDH-CuO-MCS-EF1α-GFP+Puro (# QM513B-1)
- pCDH-CuO-MCS-EF1α-RFP+Puro (# QM516B-2)
- pCDH-CuO-MCS-T2A-GFP (# QM521A-1)
- pCDH-CuO-MCS-T2A-RFP (# QM522A-1)
- pCDH-CuO-MCS-IRES-GFP (# QM530A-2)
- pCDH-CuO-MCS-IRES-RFP (# QM531A-2)
How It Works
Tightly-controlled, inducible gene expression
SBI’s SparQ Cumate Switch System delivers robust, titratable gene expression with low background through three components:
- Cumate, a non-toxic, small-molecule inducer
- CymR, a repressor that binds to cumate operator sequences in the absence of cumate
- SparQ Lentivector that contains an MCS to clone-in your gene-of-interest, the cumate inducible promoter with cumate operator sequences (CuO) upstream of the MCS, and one or more markers
CymR has a high binding affinity for cumate and, as more cumate is added, fewer CymR molecules bind to the CuO sequences in the promoter resulting in increased expression. Exhibiting much lower background expression than similar systems, SBI’s cumate-inducible vectors can provide up to 32-fold induction of gene expression.
Supporting Data
Tight expression control with low background with the SparQ Cumate Switch System
Resources
Citations
- Shinmura, K, et al. (2017) WDR62 overexpression is associated with a poor prognosis in patients with lung adenocarcinoma. Mol. Carcinog..2017 Aug 1; 56(8):1984-1991. PM ID:28277612
- Maegawa, KI, et al. (2017) The Highly Dynamic Nature of ERdj5 Is Key to Efficient Elimination of Aberrant Protein Oligomers through ER-Associated Degradation. Structure.2017 Jun 6; 25(6):846-857.e4. PM ID:28479060
- Park, TS, Kim, SW & Lee, JH. (2017) Efficient transgene expression system using a cumate-inducible promoter and Cre-loxP recombination in avian cells. Asian-australas. J. Anim. Sci..2017 Jun 1; 30(6):886-892. PM ID:27764912
- Herrington, KA, et al. (2017) Spatial analysis of Cdc42 activity reveals a role for plasma membrane-associated Cdc42 in centrosome regulation. Mol. Biol. Cell.2017 May 24;. PM ID:28539409
- Qi, Z, et al. (2017) An optimized, broadly applicable piggyBac transposon induction system. Nucleic Acids Res..2017 Apr 20; 45(7):e55. PM ID:28082389
- Jain, A, et al. (2017) Abl kinase regulation by BRAF/ERK and cooperation with Akt in melanoma. Oncogene.2017 Apr 3;. PM ID:28368422
- O"Hara, SP, et al. (2017) ETS Proto-oncogene 1 Transcriptionally Up-regulates the Cholangiocyte Senescence-associated Protein Cyclin-dependent Kinase Inhibitor 2A. J. Biol. Chem..2017 Mar 24; 292(12):4833-4846. PM ID:28184004
- Ikushima, S & Boeke, JD. (2017) New Orthogonal Transcriptional Switches Derived from Tet Repressor Homologues for Saccharomyces cerevisiae Regulated by 2,4-Diacetylphloroglucinol and Other Ligands. ACS Synth Biol.2017 Mar 17; 6(3):497-506. PM ID:28005347
- Shinmura, K, et al. (2017) Reduced expression of the DNA glycosylase gene MUTYH is associated with an increased number of somatic mutations via a reduction in the DNA repair capacity in prostate adenocarcinoma. Mol. Carcinog..2017 Feb 1; 56(2):781-788. PM ID:27253753
- Liu, L, Huang, W & Huang, JD. (2017) Synthetic circuits that process multiple light and chemical signal inputs. BMC Syst Biol.2017 Jan 19; 11(1):5. PM ID:28103878
- Ando, T, et al. (2017) Ameloblastin induces tumor suppressive phenotype and enhances chemosensitivity to Dox via Src-Stat3 inactivation in osteosarcoma. Sci Rep.2017 Jan 5; 7:40187. PM ID:28054649
- Barta, T, Peskova, L & Hampl, A. (2016) miRNAsong: a web-based tool for generation and testing of miRNA sponge constructs in silico. Sci Rep.2016 Nov 18; 6:36625. PM ID:27857164
- Choi, JS, et al. (2016) cIAPs promote the proteasomal degradation of mutant SOD1 linked to familial amyotrophic lateral sclerosis. Biochem. Biophys. Res. Commun..2016 Nov 18; 480(3):422-428. PM ID:27773815
- Ushioda, R, et al. (2016) Redox-assisted regulation of Ca2+ homeostasis in the endoplasmic reticulum by disulfide reductase ERdj5. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A..2016 Oct 11; 113(41):E6055-E6063. PM ID:27694578
- Welti, J, et al. (2016) Analytical Validation and Clinical Qualification of a New Immunohistochemical Assay for Androgen Receptor Splice Variant-7 Protein Expression in Metastatic Castration-resistant Prostate Cancer. Eur. Urol..2016 Oct 1; 70(4):599-608. PM ID:27117751
- Narumi, S, et al. (2016) SAMD9 mutations cause a novel multisystem disorder, MIRAGE syndrome, and are associated with loss of chromosome 7. Nat. Genet..2016 Jul 1; 48(7):792-7. PM ID:27182967
- Park, BO, et al. (2016) Selective novel inverse agonists for human GPR43 augment GLP-1 secretion. Eur. J. Pharmacol..2016 Jan 15; 771:1-9. PM ID:26683635
- Herrington, KA. (2016) New technologies for a better understanding of the Golgi: FLIM-FRET and click chemistry. Thesis.;. Link:Thesis
- Shinmura, K, et al. (2015) NEIL1 p.Gln282Stop variant is predominantly localized in the cytoplasm and exhibits reduced activity in suppressing mutations. Gene.2015 Oct 15; 571(1):33-42. PM ID:26095805
- Cheng, YS, et al. (2015) PPP2R5C Couples Hepatic Glucose and Lipid Homeostasis. PLoS Genet..2015 Oct 1; 11(10):e1005561. PM ID:26440364
SystemBiosciences,简称SBI,美国加利福尼亚湾区新成立的生技公司,致力于独特,创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定,研究之崭新方法和工具为宗旨。
美国SBI代理SystemBiosciences,简称SBI,美国加州湾区新成立的生技公司,致力于独特、创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)研究之相关工具。
现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)的研究之相关工具。系统Biosciences公司(SBI)致力于开发独特,革新的技术,为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具.SBI是专业的慢病毒产品公司,提供基于慢病毒的所有相关产品,质粒,试剂盒及相关配套试剂和慢病毒扩展产品,如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。System Biosciences继续创造新的独特产品以及改善我们完善的产品线。我们对提供领先技术的承诺与我们所有研究试剂和研究项目服务的高质量制造和质量控制相匹配。 2009年要寻找的东西:以下是即将推出的新产品。新型miRZips™:基于慢病毒载体的新型技术可永久敲低MicroRNA。双标记shRNA表达载体:SBI将发布新的功能强大的shRNA表达慢病毒载体pGreenPuro™,以便为稳定的RNAi实验选择稳定转导的细胞的GFP和Puro标记。甾醇反应pGreenFire™慢病毒报告子:基于慢病毒载体的转录报告子,用于监测与固醇感应转录因子相关的转录网络活性-心血管疾病途径的关键。诱导型表达慢载体:新的构建体将允许CDNA,shRNA和microRNA的“按需”表达。2007–2008年的新产品新的miR-SNaRE:MicroRNA小型非编码RNA富集系统,该系统使用带有表位标签的microRNA加工因子来提取蛋白质及其相关RNA。识别驱动RISC复合体的信使RNA。新的GeneNet™聚焦的shRNA库:这些聚焦的shRNA库编码一组针对所有与人类激酶,磷酸酶或细胞凋亡相关基因有关的特定功能或类别基因设计的shRNA集合。这些文库可进行有针对性的高通量RNAi筛选。新的miRNomeMicroRNA分析仪:qPCR阵列在预先格式化的板中包括microRNA分析,可用于人类的完全互补或小鼠单个microRNA的完全互补,每块板上带有三个内源参考RNA对照。所有基于SangermiRBasemicroRNA数据库的microRNA分析均已注册。新的Lenti-miR™MicroRNA前体克隆:在基于HIV的慢病毒载体中可获得更多的microRNA前体集合。超过580个单独的microRNA前体克隆可用阵列形式或合并的慢病毒形式用于HT筛选。新的基于慢病毒的干细胞报道者:SBI越来越多的慢病毒载体已被开发为将基因构建体在体内外几乎传递给任何细胞类型的最有效方法。SBI已将我们的慢病毒构建体系列扩展为干细胞报道分子。使用连接到GFP报告基因的细胞和途径特异性启动子,轻松创建转基因细胞系以监测细胞分化。QuantiMir™RT试剂盒:这项流行的新技术可通过一次cDNA合成同时进行实时qPCR定量分析数百种microRNA。设计您自己的microRNA测定法以进行创新性实验。癌症microRNAqPCR分析小组(OncoMir系列):预格式化的microRNA分析小组,用于评估95种已知与癌症有关的microRNA。干细胞microRNA分析小组:介绍了95种参与干细胞分化的microRNA,可同时监测干细胞的自我维持,造血途径和神经分化。SBI完善的产品线FullSpectrum™完整信使RNA扩增试剂盒:利用针对mRNA最常见基序的mRNA特异性引物提供完整的mRNA转录物(5"和3"末端)的无偏见,完整代表。GeneNet™siRNA库:全基因组,即用型,预包装的慢病毒库为筛选与生物学反应相关的基因功能提供了令人兴奋的机会。干扰素反应检测试剂盒:区分真正的RNA干扰和压力相关的细胞反应。PathNet™转录报告基因慢病毒载体:一种独特的方法,可创建各种稳定的报告基因细胞系,用于信号通路的研究。我们感谢您过去的支持,并期待为您提供最佳的新试剂,技术和服务,以加速您成功的研究目标。
ebiomall.com
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
>
这种技术,以前曾被用来研究植物和蠕虫等,但直到现在才发现它对哺乳动物细胞也有效。
如果把这个思路用于医疗,使致病的基因“沉默”下来,不就可以治好许多疾病吗?而哈佛医学院的研究人员首次用RNA干扰使活体动物的致病基因“沉默”。美国哈佛医学院的科学家在最新一期英国《自然医学》杂志上报告说,他们已经成功地利用这种核糖核酸干扰技术治愈了实验鼠的肝炎。如果进一步证实这种技术在人体内有效,将为许多疾病和感染提供新疗法。
在研究中,科学家干扰的目标是“凋亡相关蛋白质(FAs)基因”。这种蛋白质存在于细胞表面,它能够启动细胞的自杀程序,据认为,许多肝病是由于病毒、免疫系统失常或慢性酒精中毒激活了FAs基因所导致的。
研究人员给实验鼠尾部的血管注入旨在“沉默”FAs基因的小干扰RNA,发现有90%的肝细胞接收到了这种RNA分子,FAs蛋白质的产量变成原先的十分之一。随后,科学家给实验鼠注入大量FAs抗体,激活细胞自杀程序,模拟实验鼠患有严重肝炎的情形。
结果,未接受RNA干扰治疗的实验鼠有40%在3天内死亡。而40只接受过治疗的实验鼠有33只活了下来,10天后研究人员检查这些实验鼠的肝部,发现完全正常。
对于人来说,身体比老鼠大得多,血液循环系统也庞大。科学家目前正在寻找把小干扰RNA送到人体特定部位的方法,以便验证RNA干扰技术在人体中的效果。
在此,我只是抛砖引玉,向大家简单介绍一种新的技术,希望对其感兴趣的同仁多多发表,也希望版主给予支持。
将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠,2天后,取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图,图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg,后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。
根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA(作用于LaminA/C)和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织,分离RNA,用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果,图5为各器官分别局部注射结果。
英格恩生物体内转染试剂,3天可完成动物体内转染实验,让动物干扰,基因敲除实验变得简单、快速有效!
转录抑制
与RNAi有关的dsRNA及蛋白质可参与染色质的修饰作用,使其中的组蛋白和DNA发生甲基化作用,使相应基因不能被转录,从而导致受阻基因不能表达。这种在转录水平上阻断基因功能,使基因沉默的RNAi方式被称为转录基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS)。这种现象先在植物中得到证实,但是在哺乳动物中是否存在仍有争议。2004年Svoboda等研究表明,在小鼠卵母细胞中,通过RNAi引起靶基因表达沉默的长dsRNA不能引起相应DNA区域从头合成DNA的甲基化。Morris等也于同年得出实验结论,针对内源基因启动子的siRNA能够引起其区域内CG岛以及组蛋白H3K9的甲基化,从而在转录水平抑制基因的表达。
转录后抑制
不同来源的dsRNA通过各种转基因技术转入植物、线虫或哺乳动物细胞内,、被切割产生siRNA片断,再由合成的RISC切割靶mRNA从而阻断基因表达。这种基因能正常转录成mRNA,但mRNA因被降解使基因功能被阻断,这种RNAi方式叫做转录后沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS)。siRNA对靶mRNA降解具有序列特异性,只能引起同源mRNA降解,如果siRNA与mRNA有一个bp不配对,RNAi作用就极大降低,如果两者有4个bp不配对,就不能产生RNAi。
翻译抑制
Grishok等在研究RNAi时,发现在细胞中在细胞中存在内源性小片段单链RNA(ssRNA),其长度也在21~25 nt之间,这种ssRNA可与mRNA的3′非翻译区(3′UTR)特异性地结合,从而抑制mRNA的翻译和相应的功能蛋白质合成。这种小片段的ssRNA叫做stRNA(small temporal RNA)。ssRNA的形成是因为当RNA的大小为70~80 nt时,容易形成双链的茎环状结构,其双链茎的长度正好在21~25 nt之间,这样的双链结构易被Dicer酶识别并切割成stRNA,由stRNA抑制翻译。这种方式的RNAi也作用于转录后形成的mRNA,它在调节生物细胞内基因的表达、自身的发育方面起着重要的作用。
⒉特异性:Elbashir等和Brummel kamp等发现在21~23个碱基对中有1~2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应:Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中,hTF167i和hTF372i能够抑制85%~90%的基因活性,hTF562i只能抑制部分基因活性,而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA,有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基,但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性,相对而言,GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应:Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比,两者的沉默基因效果无差异,但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后,hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性:在线虫中,双链RNA可以从起始位置传播到远的地方,甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1,它可以将双链RNA转运出细胞,因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物,因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
本是小菜鸟,目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响,需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况,但是无论如何夜找不到抑制剂,做RNA干扰的话经费就超出预算了!急求各位大神,帮忙出个解决方案吧!非常感谢!
dsRNA(double-stranded RNA)介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径:特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径:要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’-5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶(RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶)作用加工裂解21-23核甘酸干扰RNA片断(siRNA)Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物(RNA-induced silencing complex or RISC)siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
View Products
View Products
View Products