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SystemBiosciences,简称SBI,美国加利福尼亚湾区新成立的生技公司,致力于独特,创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定,研究之崭新方法和工具为宗旨。


美国SBI代理SystemBiosciences,简称SBI,美国加州湾区新成立的生技公司,致力于独特、创新生物技术之开发,以研发利于基因及蛋白质功能鉴定、研究之崭新方法和工具为宗旨。现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)研究之相关工具。


现阶段研发重心为RNA干扰(RNAi)的研究之相关工具。系统Biosciences公司(SBI)致力于开发独特,革新的技术,为客户研究蛋白组学和基因组学功能提供研究工具.SBI是专业的慢病毒产品公司,提供基于慢病毒的所有相关产品,质粒,试剂盒及相关配套试剂和慢病毒扩展产品,如IPS细胞多功能性诱导试剂盒和RNAi筛选文库。System Biosciences继续创造新的独特产品以及改善我们完善的产品线。我们对提供领先技术的承诺与我们所有研究试剂和研究项目服务的高质量制造和质量控制相匹配。  2009年要寻找的东西:以下是即将推出的新产品。新型miRZips™:基于慢病毒载体的新型技术可永久敲低MicroRNA。双标记shRNA表达载体:SBI将发布新的功能强大的shRNA表达慢病毒载体pGreenPuro™,以便为稳定的RNAi实验选择稳定转导的细胞的GFP和Puro标记。甾醇反应pGreenFire™慢病毒报告子:基于慢病毒载体的转录报告子,用于监测与固醇感应转录因子相关的转录网络活性-心血管疾病途径的关键。诱导型表达慢载体:新的构建体将允许CDNA,shRNA和microRNA的“按需”表达。2007–2008年的新产品新的miR-SNaRE:MicroRNA小型非编码RNA富集系统,该系统使用带有表位标签的microRNA加工因子来提取蛋白质及其相关RNA。识别驱动RISC复合体的信使RNA。新的GeneNet™聚焦的shRNA库:这些聚焦的shRNA库编码一组针对所有与人类激酶,磷酸酶或细胞凋亡相关基因有关的特定功能或类别基因设计的shRNA集合。这些文库可进行有针对性的高通量RNAi筛选。新的miRNomeMicroRNA分析仪:qPCR阵列在预先格式化的板中包括microRNA分析,可用于人类的完全互补或小鼠单个microRNA的完全互补,每块板上带有三个内源参考RNA对照。所有基于SangermiRBasemicroRNA数据库的microRNA分析均已注册。新的Lenti-miR™MicroRNA前体克隆:在基于HIV的慢病毒载体中可获得更多的microRNA前体集合。超过580个单独的microRNA前体克隆可用阵列形式或合并的慢病毒形式用于HT筛选。新的基于慢病毒的干细胞报道者:SBI越来越多的慢病毒载体已被开发为将基因构建体在体内外几乎传递给任何细胞类型的最有效方法。SBI已将我们的慢病毒构建体系列扩展为干细胞报道分子。使用连接到GFP报告基因的细胞和途径特异性启动子,轻松创建转基因细胞系以监测细胞分化。QuantiMir™RT试剂盒:这项流行的新技术可通过一次cDNA合成同时进行实时qPCR定量分析数百种microRNA。设计您自己的microRNA测定法以进行创新性实验。癌症microRNAqPCR分析小组(OncoMir系列):预格式化的microRNA分析小组,用于评估95种已知与癌症有关的microRNA。干细胞microRNA分析小组:介绍了95种参与干细胞分化的microRNA,可同时监测干细胞的自我维持,造血途径和神经分化。SBI完善的产品线FullSpectrum™完整信使RNA扩增试剂盒:利用针对mRNA最常见基序的mRNA特异性引物提供完整的mRNA转录物(5"和3"末端)的无偏见,完整代表。GeneNet™siRNA库:全基因组,即用型,预包装的慢病毒库为筛选与生物学反应相关的基因功能提供了令人兴奋的机会。干扰素反应检测试剂盒:区分真正的RNA干扰和压力相关的细胞反应。PathNet™转录报告基因慢病毒载体:一种独特的方法,可创建各种稳定的报告基因细胞系,用于信号通路的研究。我们感谢您过去的支持,并期待为您提供最佳的新试剂,技术和服务,以加速您成功的研究目标。


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RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。基因沉默,主要有转录前水平的基因沉默(TGS)和转录后水平的基因沉默(PTGS)两类:TGS是指由于DNA修饰或染色体异染色质化等原因使基因不能正常转录;PTGS是启动了细胞质内... 查看更多>
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CRISPR由两部分组成,一部分是可以切割基因的“手术刀”蛋白Cas9,另一部分是拖着“手术刀”在基因组的“茫茫大海”中精确定位的向导RNA(核糖核酸)。一些科学家用灭活版本的Cas9蛋白与向导RNA结合,改造出只有精确定位功能的CRISPR技术,可用来关闭或打开几乎任何单个基因,或者精细地调控它们... 查看更多>
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请说出其要点。谢谢。急着要啊!周四要考试了啊!呵呵!
您好!(RNA干扰的原理附图有六张,但是这里只能粘贴插入一张图片,你把邮箱给我,我发给你全的原理图)短片断的双链RNA可以通过促使特定基因的mRNA降解来高效、特异的阻断体内特定基因表达,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNAinterference,RNAi)。siRNA(smallinterferingRNAs)就是这种短片断双链RNA分子,能够以序列同源互补的mRNA为靶目标,降解特定的mRNA。首先外源导入的dsRNA被切割为19~23nt的小分子干扰RNA(siRNA)。Dicer作为特异性RNA酶家族的一个成员,切割dsRNA为19~23ntsiRNA,这是一个依赖ATP的耗能过程.切割后的siRNA具有3’两个核苷酸TT突出末端。然后siRNA结合到RNA酶复合物上形成RNA诱导的基因沉默复合体(RISC,RNA-inducedsilencingcomplex)。该复合体依赖ATP释能而解siRNA双链成单链以激活RISC。活化的RISC通过由siRNA决定的碱基互补配对原理切割具有同源序列的基因转录本,最终导致基因沉默效应。向左转|向右转
RNA干扰与基因敲除123
蜗牛小灵子2017-02-23

本是小菜鸟,目前研究某个比较新的蛋白对内质网应激的影响,需要抑制这个蛋白的表达看下游信号的表达情况,但是无论如何夜找不到抑制剂,做RNA干扰的话经费就超出预算了!急求各位大神,帮忙出个解决方案吧!非常感谢!

RNA干扰回复实验,主要是为了说明Off-target效应。 Off-target effects(脱靶效应)最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出(Fedorov,Y.,et al. Off-targeting By siRNA Can Induce Toxic Phenotype. RNA Accepted (2006).)他们给细胞转染特定基因的单条siRNA后运用全基因组芯片检测技术鉴定表达上调/下调1.5到3倍的靶基因数量。研究人员发现在这种情况下有大量的基因被非特异性的调控着。siRNA正义链和反义链与脱靶基因的互补水平有高有低,并且每条siRNA所引发的脱靶基因表达谱也不尽相同,反映了序列依靠性的脱靶效应。
简单来说,Off-target效应就是指干扰shRNA序列进入了microRNA途径,通过microRNA途径,其可以不受完全互补的限制而调控大量靶基因的表达。原本需要19~23nt的RNA序列完全互补才能发生干扰作用,而如果进入microRNA途径,只需要11~15nt互补就可以产生干扰效果,这使得siRNA可能与非靶基因结合而导致非靶基因沉默,造成脱靶。 如果脱靶干扰的部分基因,正好与目的基因位于同一信号通路中,或者与目的基因的生物学功能相似,那么,如果因脱靶而干扰了其它基因,亦会造成和目的基因受到干扰后相同的细胞表型改变。而实际上,可能选择的这条shRNA序列并没有对目的基因造成有效干扰,或者虽然干扰了目的基因,但是并不会引起预期的细胞表型改变。
基于以上原因,自从Off-target效应被发现并被研究者们广泛认同后,越来越多的杂志要求研究者们在投稿时需要有相应的对照来说明Off-target效应。即您需要有相关对照或者实验来说明,您所获得的实验结果,不是由于Off-target效应而产生的。向左转|向右转
Argonaute (AGO):一类庞大的蛋白质家族,是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白质主要包含两个结构域:PAZ和PIWI两个结构域,但具体功能尚不清楚。的研究表明,PAZ结构
域结合到siRNA 的3’的二核苷酸突出端;一些AGO蛋白质的PIWI结构域赋予slicer以内切酶的活性。PAZ和PIWI两个结构域,对于siRNA和目标mRNA相互作用,从而导致目标mRNA的切割或者翻译抑制过程,是必不可少的。同时,不同的AGO蛋白质有着不同的生物学功能。例如,在人当中,AGO2“筹划”了RISCs对于目标mRNA的切割过程;而AGO1 和AGO3则不具备这个功能。
Core RISC:是介导目标mRNA切割过程或者翻译抑制的最小的RNA-蛋白质复合物。在人和果蝇身上发现的分子量少于200kDa的RISCs可能就是core RISC的重要代表。AGO蛋白质和Core RISC密切相关。
Dicer (DCR):是RNAase Ⅲ家族中的一员,主要切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子。对应地,我们将这种小RNAs分子命名为siRNAs和miRNA。Dicer有着较多的结构域,最先在果蝇中发现,并且在不同的生物体上表现出很高的保守性。
Holo RISC:是在果蝇中发现的有着RISC活性的最大的RNA-蛋白质复合物(80S)。Holo RISC的生物学活性牵涉到几乎所有的RISC的成员,RLC成员,和一些其他通路上的蛋白质分子。Holo RISC的存在,表明了RISC组装不是孤立的,同时还是一个有序的过程。以RISC为中心的RNAi和miRNA通路与一些其他的通路密切联系,很可能借此调控生物体的生长发育过程。
Microprocessor:一种核内的复合物,主要由Drosha和Pasha两者组成,在miRNA的生物合成中促使原始的miRNA成为miRNA前体。
MicroRNA (miRNA):是含有茎环结构的miRNA前体,经过Dicer加工之后的一类非编码的小RNA分子(~21-23个核苷酸)。MiRNA,以及miRISCs(RNA-蛋白质复合物)在动物和植物中广泛表达。因之具有破坏目标特异性基因的转录产物或者诱导翻译抑制的功能,miRNA被认为在调控发育过程中有重要作用。
RISC loading complex (RLC):是一种促使RISC形成的复合物。RLC有方向性地调节小RNA双螺旋,为以后的RISC组装作好铺垫。siRISC loading complexes (siRLCs)在果蝇中研究最多。有研究者认为在果蝇中的siRLCs包含DCR2-R2D2异型二聚体和siRNA双螺旋;R2D2部分是非对称性的感受器,为RISC组装调整好siRNA的方向。miRISC loading complexes (miRLCs)的研究尚未报导,因为它的过程更为复杂,而且体外研究miRLCs的方法还没有建立。
RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing (RITS):是一种组织染色质变型的复合物。RITS复合物也包含Dicer加工形成的siRNA和AGO蛋白质,通过结合到异染色质的基因池上来促使异染色质上基因的沉默。
RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。
Slicer:在切割型RISC中的内切酶的另外一种表述方法。
Small interfering RNA (siRNA):是一种小RNA分子(~21-25核苷酸),由Dicer(RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员,激发与之互补的目标mRNA的沉默。向左转|向右转

将EntransterTM-invivo与AmbioninvivosiRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠,2天后,取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见上图,图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg,后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。

根据推荐用量注射EntransterTM-invivo和siRNA(作用于LaminA/C)和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织,分离RNA,用qRT-PCR分析LaminA/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果,图5为各器官分别局部注射结果。

英格恩生物体内转染试剂,3天可完成动物体内转染实验,让动物干扰,基因敲除实验变得简单、快速有效!


相关疾病:单纯疱疹病毒感染先天性卵巢发育不全综合征年龄相关性黄斑变性视网膜脱离青光眼白内障RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导的特异同源靶基因转录后沉默的过程,是生物进化过程中保留下来的基因表达调控......
1.高效性:Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的,只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大,只有当浓度降低到0.05 nmol/L时,沉默的效果才消失。Holen等也证实1~100 nmol/L的双链RNA浓度对基因沉默的效果是一致的。这说明双链RNA介导的基因沉默效率是相当高的。需要ATP:Zamore等认为RNAi过程中至少有2个步骤需要能量的供给:一是长的双链RNA被 Dicer所酶切产生双链RNA;二是在双链RNA与RISC结合解链后形成有活性的RISC。
⒉特异性:Elbashir等和Brummel kamp等发现在21~23个碱基对中有1~2个碱基错配会大大降低对靶mRNA的降解效果。
⒊位置效应:Holen等根据人TF(tissue factor)不同的位置各合成了4组双链RNA来检测不同位置的双链RNA对基因沉默效率的影响。在不同浓度和不同类型的细胞中,hTF167i和hTF372i能够抑制85%~90%的基因活性,hTF562i只能抑制部分基因活性,而hTF478i则几乎没有抑制基因的活性。他们还以hTF167为中心依次相差3个碱基对在其左右各合成了几组双链RNA,有趣的是它们所能抑制该基因活性的能力以hTF167为中心依次递减。特别是hTF158i和 hTF161i只与hTF167i相距9个和6个碱基,但它们几乎没有抑制该基因活性的能力。结果还表明双链RNA对mRNA的结合部位有碱基偏好性,相对而言,GC含量较低的mRNA被沉默效果较好。
⒋竞争效应:Hoten等将10 nmol/L和30 nmol/L的hTF167i相比,两者的沉默基因效果无差异,但将20 nmol/L基因抑制效果很差的PSK314i和10 nmol/L的hTF167i相混和后,hTF167i产生的抑制效果明显降低。
⒌可传播性:在线虫中,双链RNA可以从起始位置传播到远的地方,甚至于全身。Feinberg 和Hunter在线虫细胞膜上发现一种跨膜蛋白SID1,它可以将双链RNA转运出细胞,因此系统性的RNAi包括了SID1介导的双链 RNA在细胞间的运输。但在果蝇上并未发现有此基因的同源物,因此在果蝇上通过注射产生的RNAi不能扩散。向左转|向右转
【求助】有关RNA干扰的问题123
奈何楼楼主2021-07-25
本人正在进行某一基因的RNA干扰试验,今天PCR显示干扰后结果不降反升,不知道问题出在什么地方,小生刚入此道,希望各位多多指教!多谢!
RNA干扰技术的特点123
中国之星01912018-01-14
RNA干扰(RNA interferenceRNAi)通抑制转录水平基表达诱导功能缺失表型力工具由dsRNA(double-stranded RNA)引发特定基表达受抑制现象称RNA干扰作用

dsRNA(double-stranded RNA)介导基沉默作用dsRNA基点研究基沉默机制热点dsRNA指于30碱基RNA哺乳物细胞至少2条路径竞争双链RNA(dsRNA)其特异性路径:特殊dsRNA序列用于RNAi起始阶段dsRNA切siRNA(small interfering RNA 或short interfering RNAs)siRNARNA干扰作用赖发重要间效应能提供定信息允许特定mRNA降解siRNA义链与反义链各21碱基其19碱基配再每条链3’端都2配碱基
另条非特异性路径:要dsRNA存降解所RNA抑制所蛋白质合dsRNA激蛋白激酶PKR激PKR通系列磷酸化关闭翻译起始导致翻译抑制通激2’-5’AS 合激RNase L导致非特异RNA降解
关于特异性RNA作用机制模型包括起始阶段效应阶段起始阶段dsRNADicer酶(RNaseIII家族特异识别双链RNA员属内切核酸酶)作用加工裂解21-23核甘酸干扰RNA片断(siRNA)Dicer含解旋酶性及dsRNA结合域PAZ结构
RNAi 效应阶段siRNA双链结构解旋并形性蛋白/RNA复合物(RNA-induced silencing complex or RISC)siRNA 解双链即RISC激程需ATP由RISCsiRNA反义链与mRNA互补区域结合随切割mRNA达RNA水平干扰基表达RISC由种蛋白组包括核酸酶解旋酶同源RNA链搜索性等
RNA干扰不能称之为基因敲出,只出算是KNOCK-DOWN,使表达降低。基因敲出是KNOCKOUT,是把基因的一段序列在DNA层面上去掉。
求大神解惑,RNA干扰回复实验是怎么做的?我的实验需要设计一个RNArescue组,不知道怎么操作。
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