微生物鉴定中常用的生理生化试验
郭森
09
级生命基地
200900140029
周二下午
第五排
摘要:
本次实验包括大分子水解试验、
糖发酵试验和
IMViC
试验
(吲哚、
甲基红试验)
三类试验,
根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约
24h
的培养,
之
后按照实验要求进行各个试验。
最后基本上观察到了实验现象,
了解了所用菌种鉴别的方法
和原则。
关键词:
微生物鉴定;生理生化试验;大分子水解试验;糖发酵试验;
IMViC
试验
前言:
不同种类的微生物有着不同的代谢类型,例如对一些物质的分解能力及分解代
谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征,
这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定
和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验,以此证明微生物生理特征的多样性,
证明微生物分类鉴别的依据。
生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、
快捷、
经济实
用,在一般的实验室中都可以进行,因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。
1
材料和方法
1.1
材料
1.1.1
菌种
枯草芽孢杆菌
(
Bacillus
subtilis
)
,
大肠杆菌
(
Esherichia
coli
)
,
金黄色葡萄球菌
(
Staphylococcus
aureus
)
,
普通变形菌(
Proteus
vulgaris
),铜绿假
单胞菌(
Pseudomonas
aeruginosa
),产气
肠杆菌
(
Enterobacteraerogenes
)
。
1.1.2
培养基
固体淀粉培养基,固体油
脂培养基,
葡萄糖发酵培养基,
乳糖培养基,
蛋白胨水培养基,葡萄糖蛋白胨水培养基
。
1.1.3
溶液和试剂
卢戈式碘液,
甲基红
指示剂,乙醚和吲哚试剂等。
1.1.4
仪器和其他用品
无菌平板,无
菌试管,接种环,接种针和试管架等。
1.2
方法
1.2.1
制作培养基
1.2.1.1
淀粉培养基
分别取
3g
蛋白胨、
1.5gNaCl
、
1.5g
牛肉膏、
0.76g
可溶性淀
粉和
5~6.7g
琼脂放入
300ml
蒸馏水中加热
融化,最后总体积在
250ml
左右,
121
℃灭
菌
20min
。
1.2.1.2
油脂培养基
先分别取
3g
香油或
花生油、
5~6.7g
琼脂和
300ml
蒸馏水加热融
化,
然后再分别取
3g
蛋白胨、
1.5g
牛肉膏、
1.5g
NaCl
加热,调节
pH
至
7.2
,然后再加
入
0.3ml1.6%
中性红水溶液。分装时,不
断搅拌,
使油脂均匀分布于培养基中,
121
℃
灭菌
20min
。
1.2.1.3
糖发酵培养基(葡萄糖和乳糖)
取
300ml
蛋白胨水培养基、
0.3~0.6ml1.6%
溴甲酚紫乙醇溶液混合并调节
pH
至
7.6
,
另
配
20%
糖溶液
(葡萄糖、
乳糖等)
每管各
10ml
(
1
)
将含指示剂的蛋白胨水培养基
(
pH7.6
)
分装于试管中,
在每管内放一倒置的小玻璃
管(
Durhamtube
),使充满培养液。
(
2
)
将已分装好的蛋白胨水和
20%
的各种糖
溶液分别
121
℃灭菌
20min
。
(
3
)
灭菌后,
每管以无菌操作分别加入
20%
的无菌糖溶液(葡萄糖和乳糖)
0.5ml
(浓
度约为
1%
)。
1.2.1.4
蛋白胨水培养基
取
3g
蛋白胨、
1.5gNaCl
加入到约
300ml
蒸馏水中加热混
合,
调节
pH
至
7.6
,
然后
121
℃灭菌
20min
。
1.2.1.5
葡萄糖蛋白胨水培养基
取
1.5g
蛋白胨、
1.5g
葡萄糖和
0.6gKHPO
溶于
1000ml
水中,调节
pH
至
7.0~7.2
,过滤。
分装试管,每管
10ml
,
121
℃灭菌
20min
。
1.2.2
大分子水解试验
1.2.2.1
淀粉水解试验
(
1
)
将固体培养基熔化后冷却至
50
℃左