材料
十二烷基硫酸钠(SLS,SDS),水溶3.5mmol/L或0.3mol/LNaOH。考马斯亮蓝G-250,0.12mmol/L(0.01%),溶于4.7%乙醇和85%(W/V)磷酸:将100mg考马斯蓝溶于50ml95%乙醇,加人100ml85%磷酸;然后以1L水稀释。
蛋白质标准溶液(如BSAlOpg/ml);设计实验,然后间隔1~2个月,以BSA或相似的标准蛋白质(150ug/ml)制作标准曲线。
操作步骤
1.将蛋內质(1~20ug)或细胞(约1X106)溶于100ul3.5mmol/LSLS或0.3mol/LNaOH中。
2.分别加人100ul试剂空白对照(SLS),100ul受测蛋白质溶液,lOOulBSA标准品,每个3管。
3.加人lml考马斯蓝。混匀溶液,静置10min。
4.在分光光度计595nm处,以试剂空白作对照,阅读受测管如BSA标准数字。
提示Bradford法的试剂可以从Bio-Rad购得试剂盒。试剂盒中的磺基罗丹明(SulforhodamineB)[Skehanetal,1990]和试剂N-二(羟乙基)甘氨酸(BCA)[Smithetal.,1985]都可用于测定蛋白质的含量并且对微量滴定实验敏感度很高。Micro-BCA试剂盒可从Piece(见附录ID)得到。这些试剂很灵敏,适用于少量细胞(约1X103)的检测。