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人的嗅觉阈为0.35~0.92mg/m^3,另有报道为3mg/m^3。3~3.6mg/m^3时,对粘膜有刺激; 27.8mg/m^3时眼和呼吸道严重刺激。16mg/m^3,工作3~4周后,不少人出现急性上呼吸道炎; 0.5mg/m^3,工作一周,出现剧烈的咳嗽和呼吸困难。TDI引起支气管哮喘,可能系异氰基团与体内的蛋白质的氨基结合后,生成异性蛋白,成为抗原诱发的变态反应; 也可同时有药理机制和刺激作用。 2,6-TDI的刺激作用比2,4-TDI为大。
甲苯二异氰酸酯(TDI)有两种异构体:2，4-甲苯二异氰酸酯和2，6-甲苯二异氰酸酯。甲苯二异氰酸酯是水白色或淡黄色液体，具有强烈的刺激性气味，在人体中具有积聚性和潜伏性，对皮肤、眼睛和呼吸道有强烈刺激作用，吸入高浓度的甲苯二异氰酸酯蒸气会引起支气管炎、支气管肺炎和肺水肿;液体与皮肤接触可引起皮炎。液体与眼睛接触可引起严重刺激作用，如果不加以治疗，可能导致永久性损伤。长期接触甲苯二异氰酸酯可引起慢性支气管炎。对甲苯二异氰酸酯过敏者，可能引起气喘、伴气喘、呼吸困难和咳嗽。
与乙醚、二甘醇、丙酮、四氯化碳、苯、氯苯、煤油、橄榄油混溶。能与含羟基的化合物、水、胺和具有活泼氢原子的化合物反应生成氨基甲酸酯、脲、氨基脲等。甲苯用混酸硝化得到2,4-和2,6-二硝基甲苯，然后在镍催化剂存在下加氢还原得到2,4-和2,6-二氨基甲苯，再在氯苯溶液中与光气反应制得。主要作为聚氨酯树脂的生产原料，用于生产聚氯酯泡抹塑料、涂料、橡胶、粘合剂、密封剂等。也可用作橡胶硫化剂、蛋白质交联剂等。包括泡沫塑料;聚氨酯涂料;聚氨酯橡胶;聚酰亚胺纤维和胶粘剂等也有一些应用。有2，4-甲苯二异氰酸酯和2，6-甲苯二异氰酸酯(TDI)两种异构体。按两种异构体含量的不同，工业上有三种规格的产品:(1)TDI-65含2,4-TDI65%，2,6-TDI35%;(2)TDI-80含2,4-TDI80%，2,6-TDI20%，最为常见;(3)TDI-100含2,4-TDI100%。与水作用产生二氧化碳。易与含有活性氢原子的化合物作用。与二元醇作用而成线型聚氨基甲酸酯或聚氨酯树脂。
这个问题困扰我多时了：
怎么样才能把一个重组的蛋白连接到一个已知的
单克隆抗体之上，利用单抗的靶向作用导引
重组蛋白到达靶区域，已有的基本路线有：
1.采用融合蛋白的方式，通过将重组蛋白与单抗的Fab段融合，产生的融合蛋白既具有单抗的作用，又具有重组蛋白的作用。
2.采用间接的方法，比如通过biotin标记单抗，再将avidin与重组蛋白连接，这样通过avidin与biotin之间的作用将两者连接起来。关键是如何将avidin与重组蛋白连接。
以上两个方法是我考虑的，但是均感觉难。
欢迎古怪可行的方法。：)谢谢！
Chemical cross-linking化学交联
指在光、热、高能辐射、机械力、超声波和交联剂等作用下，大分子链间通过化学键联结起来，形成网状或体形结构高分子的过程。橡胶的硫化、不饱和树脂的交联、环氧树脂的熟化等都是化学交联的例子。通过化学交联可改善聚合物的性能。如聚乙烯的化学交联可提高其强度和耐热性，又如皮革的鞣制过程是利用其蛋白质分子与甲醛作用，生成交联桥，以至失去溶解性。
本人使用的Collagen是sigma公司的，TypeI,BovineCollagenSolution,浓度为6mg/ml，用浓度为1M的NaOH溶液进行中和。200微升Collagen用了30微升的NaOH溶液，在调PH过程中有絮状物质产生并有局部凝胶，然后将调好PH的Collagen放至细胞培养箱中进行培养，2个小时之后也没有凝胶。是NaOH溶液加多了还是没有搅拌均匀，现在还在摸索阶段，不知道具体该加多少NaOH，还有如何将溶液混合均匀是个问题。求大神指导
我需要做一个人类膜蛋白的co-ip，现在有三种
抗体可以选择，请问大侠我选择哪种比较好：
1.用这个人类膜蛋白c端末短肽（14个残基，478-492）偶联KLH生产的兔
多克隆抗体（abcam公司产品）
2.用大鼠的同源膜蛋白c端（具体哪一段不清楚）生产的兔多克隆抗体（abcam公司产品），我比对过人和大鼠的这个膜蛋白，同源性很高，c端完全一样（这里也很困惑公司为什么说是大鼠来源的）
3.用这个人类膜蛋白两个跨膜区之间的一个loop环序列（42个残基，218-260）生产的兔多克隆抗体（santa公司产品）
这三个抗体理论上来讲哪个更好些呢？请有经验的大虾给予指点！
另：我听说abcam的抗体比santa好，是吗？
在线等，急！
一、多肽与载体蛋白交联
对在动物体内发生免疫反响而言，大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等交联以后，不仅能添加抗原的巨细，也能增强免疫性。咱们能够提供与KLH和BSA两种蛋白的交联。大多数客户挑选与KLH交联，由于KLH的免疫性非常好，而且BSA在许多试验中作为Blocking试剂，由于动物体内既会发生对多肽的抗体也会发生对载体蛋白的抗体，这么会呈现假阳性。
二、抗体的运用
由于抗体与许多生物分子，以蛋白和多肽等尤为明显，有很强的联系才能，抗体在生物医学研讨中占据共同的主要位置，在对蛋白的特性、含量的测定、散布状况的分析和蛋白的确证等方面都需要用到抗体。例如：确诊试剂盒如早孕试剂盒等，蛋白microalloy、immunohistochemistry 和普通的ELISA试验等。由于抗体有对特定分子很强的联系才能的特点，用抗体进行体内医治成了许多尽力的方向。成功的典范包含Genetech的Herceptin,用于医治一类特殊的乳腺癌和IDEC药业公司的Ritaxan，用于特定类型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-细胞。
三、抗原和辨认区域
大多数状况下，antigen和immunogen两个字是能够交换运用的，它们的差别是很小的。他们是别离指一个分子与免疫系统之间的两种类型的相互作用。一个immunogen是指能使一个生物组织的免疫系统发生免疫反响的分子，而一个antigen是指能与这种免疫反响的产品联系的分子，所以immunogen一定是antigen，但antigen纷歧定是immunogen，咱们这儿通用antigen，特指能与免疫反响的产品—抗体联系的分子。 辨认区域（epitopes）是指一个抗原分子中一个与抗体直接联系的一段特定的序列，关于任何抗原（抗原蛋白），很有可能有多个抗体辨认区域，对出产抗体而言，易于抗体辨认的部位的辨认区域最为理想。
四、进行KLH交联的化学办法
我们用MBS活化KLH，这么能将载体蛋白（KLH）上面的自在-SH与多肽末端的Cys的侧链-SH连接起来，这种办法直接，特异性高，而且安稳，一般挑选对免疫不主要的一端进行交联。 EDC活化载体上的-COOH，将载体的-COOH和多肽的-NH2连接起来也是一种可行的办法。但咱们只主张在多肽序列中有多个Cys时采用该办法。如果肽链中含有多个-COOH或-NH2基因，不主张运用该办法，由于会构成多重点交联的状况，使多肽构造受影响。常用载体蛋白除KLH外，还有BSA，Ovalbumin等，构成KLH的优势是它不搅扰ELISA或Western Blot等试验。
五、对抗原多肽交联适宜的肽链长度
一般主张10-15个残基进行交联。肽链越长，抗体辨认的区域越多，但也就越多时机构成安稳的二级构造。就不再是天然的方式了。太短的肽一般是没有用的，除非有足够的理由，如与有关宗族蛋白或别的蛋白有序列同源性等。
六、KLH交联多肽溶液呈乳状的要素
KLH是一个很大的而且聚合的蛋白。由于它的构造和巨细，它在水中的溶解度是很有限的，因而是乳状，这并不影响它的免疫性，这种混浊的溶液能够直接免疫动物。
七、抗体的产值
抗体的产值取决于许多要素：辨认区域的挑选，多肽的合成，载体的交联，免疫的操作步骤和动物的生理系统等等，因而抗体的产值是不等的。5-25mg都归于正常规模。
可用气相色谱法测定聚氨酯涂料中的游离甲苯二异氰酸酯。
甲苯二异氰酸酯（TDI）有两种异构体：2，4－甲苯二异氰酸酯和2，6－甲苯二异氰酸酯。甲苯二异氰酸酯是水白色或淡黄色液体，具有强烈的刺激性气味，在人体中具有积聚性和潜伏性，对皮肤、眼睛和呼吸道有强烈刺激作用，吸入高浓度的甲苯二异氰酸酯蒸气会引起支气管炎、支气管肺炎和肺水肿；液体与皮肤接触可引起皮炎。液体与眼睛接触可引起严重刺激作用，如果不加以治疗，可能导致永久性损伤。长期接触甲苯二异氰酸酯可引起慢性支气管炎。对甲苯二异氰酸酯过敏者，可能引起气喘、伴气喘、呼吸困难和咳嗽。
与乙醚、二甘醇、丙酮、四氯化碳、苯、氯苯、煤油、橄榄油混溶。能与含羟基的化合物、水、胺和具有活泼氢原子的化合物反应生成氨基甲酸酯、脲、氨基脲等。甲苯用混酸硝化得到2,4-和2,6-二硝基甲苯，然后在镍催化剂存在下加氢还原得到2,4-和2,6-二氨基甲苯，再在氯苯溶液中与光气反应制得。主要作为聚氨酯树脂的生产原料，用于生产聚氯酯泡抹塑料、涂料、橡胶、粘合剂、密封剂等。也可用作橡胶硫化剂、蛋白质交联剂等。包括泡沫塑料；聚氨酯涂料；聚氨酯橡胶；聚酰亚胺纤维和胶粘剂等也有一些应用。
蛋白质的交联作用 ：在一定条件下，蛋白质分子问可以通过其侧链上的特定基团联结在一起形成更大的分子从而使蛋白质变性，即分子交联。在氧化剂(如空气中的氧)存在的条件下，蛋白质分子可发生硫氢基与硫氢基的氧化型交联从而生成二硫键。蛋白质中的半胱氨酸易于发生这种二硫键型交联，使食物的机械强度增加，例如面粉在加水揉制成面团的过程中就发生了这样的变化。拒绝采集！在强热下，蛋白质分子可通过氨基酸残基上的羟基、氨基、羧基之间的脱水缩台而交联，而这种交联多数情况下不利于我们对食品蛋白质的消化利用。在碱性条件下，蛋白质中的半胱氨酸(胱氨酸)或羟基氨酸可发生消去反厦脱去H。s、HzO等，产生脱氢丙氨酸残基。该残基还可与赖氨酸反应．生成对人体不利的赖丙氨酸，使可利用的赖氨酸含量降低-严重降低蛋白质的营养价值。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。
聚丙烯酰胺凝胶有以下优点：
①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有
格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物，没有或很少带有离子的侧基，因而电渗作用比较小，不易和样品相互作用。
②由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质，在聚合前可调节单体的浓度比，形成
不同程度交链结构，其空隙度可在一个较广的范围内变化，可以根据要分离物质分子
的大小，选择合适的凝胶成分，使之既有适宜的空隙度，又有比较好的机械性质。一
般说来，含丙烯酰胺7-7.5%的凝胶，机械性能适用于分离分子量范围不1万至100万物
质，1万以下的蛋白质则采用含丙烯酰胺15-30%的凝胶，而分子量特别大的可采用含
丙烯酰胺4%的凝胶，大孔胶易碎，小孔胶则难从管中取出，因此当丙烯酰胺的浓度增 加时可以减少双含丙烯酰胺，以改进凝胶的机械性能。
③在一定浓度范围聚丙烯酰胺对热稳定。凝胶无色透明，易观察，可用检测仪直接测定。
④丙烯酰胺是比较纯的化合物，可以精制，减少污染。合成聚丙烯酰胺凝胶的原料是丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺。丙烯酰胺称单体，甲撑双
丙烯酰胺称交联剂，在水溶液中，单体和交联剂通过自由基引发的聚合反应形成凝 胶。
在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂和
另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺
成为自由基，发动聚合反应，加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。常用的引发剂 和加速剂的配伍如下表：
聚合反应催化剂配伍
引 发 剂 加 速 剂
（NH4)2S2O8 TEMED
(NH4)2S2O8DMAPN
核 黄 素 TEMED
注：(NH4)2S2O8，过硫酸胺 TEMED：N，N，N，N';四甲基乙二胺 DMAPN：β－二甲基胺基丙晴
用过硫酸铵引发的反应称化学聚合反应；用核黄素引发，需要强光照射反应液， 称光聚合反应。 聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响：
1、大气中氧能淬灭自由基，使聚合反应终止，所以在聚合过程中要使反应液与空气 隔绝。 2、某些材料如有机玻璃，能抑制聚合反应。
3、某些化学药物可以减慢反应速度，如赤血盐。 4、温度高聚合快，温展开
我在选择交联剂，但我对交联剂的一些还不是很清楚，想请问大家：
1。什么叫切断条件。是不是不能切断的话就不能释放出药物
2。透膜性是什么意思。是不是指如果药物要进入细胞内的话就要选有透膜性的交联剂
3。间臂长度是不是臂越长越好
4。iodinatable是什么意思
谢谢大家！
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1.凝胶阻滞实验：在凝胶电泳中,由于电场的作用,裸露的DNA分子向正电极移动距离的大小是同其分子量的对数成反比.如果某种DNA分子结合上一种特殊的蛋白质,那么由于分子量的加大它在凝胶中的迁移作用便会受到阻滞,于是朝正极移动的距离也就相应的缩短,因而在凝胶中出现滞后的条带,这就是凝胶阻滞实验的基本原理. 2.DNaseI足迹试验(DNaseI footFIrinting assay) DNaseI足迹试验是一种测定DNA结合蛋白在DNA上的准确结合位点的技术.当DNA分子中的某一区段同特异的转录因子结合之后便可以得到保护而免受DNaseI 酶的切割作用,而不会产生出相应的切割分子,结果在凝胶电泳放射性自显影图片上便出现了一个空白区,俗称为“足迹”. 3.甲基化干扰实验（Methylation interference assay）是根据DMS（硫酸二甲酯）能够使DNA分子中裸露的鸟嘌呤（G）残基甲基化,而六氢吡啶又会对甲基化的G残基作特异性的化学切割这一原理设计的另一种研究蛋白质同DNA相互作用的实验方法. 4.Pull-down实验：拉下实验又叫做蛋白质体外结合实验（binding assay in vitro）,是一种在试管中检测蛋白质之间相互作用的方法.其基本原理是将某种小肽（例如生物素、6-His标签以及谷胱甘肽转移酶等）的编码基因与诱饵蛋白的编码基因重组,表达为融合蛋白.分离纯化融合蛋白并与磁珠结合,使之固相化之后,再与表达目的细胞提取物混合保温适当时间,例如在4℃下保温过夜,使目标蛋白同已经固定在磁珠表面的融合蛋白中的诱饵蛋白充分的结合.然后回收磁珠,pull出目的片段 5.生物芯片技术是基于生物大分子间相互作用的大规模并行分析方法,使得生命科学研究中所涉及的样品反应、检测、分析等过程得以连续化、集成化和微型化,现已成为当今生命科学研究领域发展最快的技术之一 6.染色体沉淀：用细菌基因组与目的蛋白孵育,然后用甲醛交联,随机断裂,然后WB分析. 7.酵母单杂交： 酵母单杂交(Yeast one-hybrid)是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报道基因表达的原理,克隆与靶元件特异结合的转录因子基因(cDNA)的有效方法.其理论基础是：许多真核生物的转录激活子由物理和功能上独立的DNA结合区(DNA-binding domain BD)和转录激活区(Activation domain AD)组成,因此可构建各种基因与AD的融合表达载体,在酵母中表达为融合蛋白时,根据报道基因的表达情况,便能筛选出与靶元件有特异结合区域的蛋白.理论上,在单杂交检测中,任何靶元件都可被用于筛选一种与之有特异结合区域的蛋白.
苏公网安备 32059002001627号