生化与细胞所研究探索在细胞内酵母tRNALeu的功能中国科学院
| 货号： | 26173 |
| 供应商： | ThermofisherScientific |
| 数量： | 大量 |
| 规格： | 50mgSDA/50mgLC-SDA/50mgSDAD |
琥珀酰亚胺酯重氮甲烷（SDA）试剂是一类新型的交联剂，将已被证实可与胺反应的化学物与创新且高效的基于重氮甲烷的光化学结合，用于将含有胺的分子交联到几乎所有其他功能基团上。SDA交联剂包括六种化合物，它们具有不同的间隔臂长度，不同的剪切交联蛋白质的能力以及具有或不具有膜通透性的带电基团。蛋白质交联是用于研究蛋白质结构以及稳定蛋白质-蛋白质相互作用的重要技术。ThermoScientificSDA试剂扩展了此方法所能探究的相互作用的效率和范围。
产品特点：
•通用-不同的与胺反应的重氮甲烷衍生物可捕获细胞内或细胞表面的特定蛋白质相互作用
•可控制-使用普通的实验室紫外灯即可激活两步化学交联
•可逆-含有二硫键的间隔可被还原剂剪切
•简便-在典型的实验室灯光条件下试剂具有光稳定性，因此无需在黑暗中进行试验
•优于芳基叠氮化物-重氮甲烷光反应基团具有更好的光稳定性，且可被长波紫外光更有效地活化。
在捕获蛋白质相互作用时，双功能性胺或可与巯基反应的交联剂需要两种蛋白质的特定氨基酸基团（例如，赖氨酸或半胱氨酸）具有适当的间距。SDA交联剂通过允许使用可与胺反应的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯对一种蛋白质进行特定标记，然后使用紫外线活化，将重氮甲烷部分交联于第二种蛋白质的任意氨基酸侧链或肽段主链，从而避开了这一限制。基于重氮甲烷的光交联剂较基于苯基叠氮化物的光交联剂具有更好的光稳定性，并且易于被长波紫外光（330-370nm）活化。N-羟基琥珀酰亚胺酯重氮甲烷衍生物（SDA，LC-SDA和SDAD）缺少带电基团，具有膜通透性。此特性使其理想用于细胞内和膜内交联。相反，Sulfo-SDA，Sulfo-LC-SDA和Sulfo-SDAD含有带负电荷的硫酸盐基团，改善了其水溶性并降低了细胞膜通透性，因此可将其用于细胞外蛋白质的交联。SDAD和Sulfo-SDAD的间隔中还含有一个二硫键，可被还原剂剪切。利用N-羟基琥珀酰亚胺-重氮甲烷光反应性交联细胞内和细胞外的蛋白为了说明使用SDA试剂光反应性交联细胞内蛋白质复合体，我们检测了HeLa细胞中有关早期内涵体抗原1（EEA1）蛋白质的蛋白质相互作用。EEA1通过卷曲结构域形成同二聚体，结合到磷脂囊泡上从而参与到内涵体的运输。细胞用各种N-羟基琥珀酰亚胺-重氮甲烷衍生物孵育并用紫外光处理。
然后将细胞裂解并使用抗-EEA1抗体进行SDS-PAGE和蛋白质印迹分析。暴露于紫外线后，EEA1还原部分的形成仅在SDA和SDAD处理的样品中检测到，而在模拟处理对照样品中未检测到（见图示）。由于EEA1是细胞内蛋白质复合体，它不会被不通透细胞膜的Sulfo-SDA交联。此外，在较慢的流动性下，SDAD-交联的EEA1可被还原剂二硫苏糖醇（DTT）在间隔内剪切。
为了说明细胞膜蛋白质交联，我们对比了使用可逆的磺化的N-羟基琥珀酰亚胺-重氮甲烷（Sulfo-SDAD），磺化的苯基叠氮化物交联剂（Sulfo-SANPAH）或同双功能N-羟基硫代琥珀酰亚胺酯（BS3）处理细胞后异二聚体钠钾（Na/K）ATPase的交联。样品使用ThermoScientificBCA蛋白质含量测定标准化蛋白含量，并且使用抗GAPDH的抗体检测以表明等量上样。暴露于紫外线后，通过蛋白质印迹观察，使用Sulfo-SDAD处理的样品比使用Sulfo-SANPAH或BS3处理的样品明显具有更多的细胞表面Na/Kβ链交联产物（图示）。
参考文献
Bomgarden,R.,etal.(2007).Previews11(2),16-18.
Hermanson,G.T.(2008).BioconjugateTechniques,2nded.,Elsevier
Inc.Suchanek,M.,etal.(2005).Nat.Methods.2(4),261-267.
Tanaka,Y.andKohler,J.(2008).JACS.10.1021/ja7109772.
订购信息：
产品货号 | 产品名称 | 包装 | 价格￥ |
26167 | SDA（琥珀酰亚胺基4，4’-叠氮戊酸盐） (Succinimidyl4,4’-azipentanoate) | 50mg | 2466 |
| 26168 | LC-SDA（琥珀酰亚胺基6-[4，4’-叠氮戊酰胺]己酯）(Succinimidyl6-[4,4’-azipentanamido]hexanoate) | 50mg | 2777 |
26169 | SDAD（琥珀酰亚胺基3-（[4，4’-叠氮戊酰胺]乙基） 1，3’-二硫代丙酸盐）(Succinimidyl2-([4,4’- azipentanamido]ethyl)-1,3’-dithiopropionate) | 50mg | 2777 |
26173 | Sulfo-SDA§（硫代琥珀酰亚胺基4，4’-叠氮戊酸盐） (Sulfosuccinimidyl4,4’-azipentanoate) | 50mg | 2777 |
26174 | Sulfo-LC-SDA（硫代琥珀酰亚胺基6-[4，4’-叠氮戊酰胺]己酯） (Sulfosuccinimidyl6-[4,4’-azipentanamido]hexanoate) | 50mg | 2777 |
26175 | Sulfo-SDAD（硫代琥珀酰亚胺基3-（[4，4’-叠氮戊酰胺]乙基） 1，3’-二硫代丙酸盐(Sulfosuccinimidyl2-([4, 4’-azipentanamido]ethyl)-1,3’-dithiopropionate) |
温馨提示：不可用于临床治疗。
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发布于 ： 2021-09-17
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