商品信息
联系客服
郑重提醒：
无质量问题不接受退换货，下单前请仔细核对信息。
下单后请及时联系客服核对商品价格，订单生效后再付款。
Description:
Peptide gold cluster probe (Au26P9)provided by Nanocs is a cell targeting probe consisted of 26 gold (Au) atoms and 9 peptides (peptide sequence: H2N-CCYHWKHLHNTKTEL-COOH). This gold nanocluster peptide conjugate is a useful dual functional probe that can be detected by both fluorescent and mass spectrometry instruments.Au26P9probe can target and quantify proteins on cell membrane and/or tissue sections base on its verstile peptide sequence. Proteins on cell membrance can be illuminated via intrisic fluorescence of gold clusters and be pricisely quantified by counting of Au via ICP-MS at single cell level. Gold cluster peptide probe can label many different proteins including MMPS, Integrins, EGFR, GPx-1, Cadherin and other proteins via the flexible design of pepdies conjugated to gold cluster.
Product Specifications:
- Form: Liquid;
- Color: Light yellow;
- Gold atom numbers: 26
- Peptide sequence: H2N-CCYHWKHLHNTKTEL-COOH
- Concentration: 400 uM;
- Excitation: 540 nm;
- Emission: 640 nm;
- Formular: Au26P9;
Storage Conditions:
- Store at 4-80C. Protect from light. DO NOT FREEZE.
Please note that peptide sequence and the number of Au atoms can be specifically selected and synthesized with customer request according to your unique cell or tissue analysis requirement.
References:
- Zhang, X.; Liu, R.; Yuan, Q.; Gao, F.; Li, J.; Zhang, Y.; Zhao, Y.; Chai, Z.; Gao, L.; Gao, X., The Precise Diagnosis of Cancer Invasion/Metastasis via 2D Laser Ablation Mass Mapping of Metalloproteinase in Primary Cancer Tissue. ACS Nano 2018, 12, 11139-11151.
- Zhang, X.; Liu, R.; Shu, Q.; Yuan, Q.; Xing, G.; Gao, X., Quantitative Analysis of Multiple Proteins of Different Invasive Tumor Cell Lines at the Same Single-Cell Level. Small 2018, 14, 1703684.
- Zhai, J.; Wang, Y.; Xu, C.; Zheng, L.; Wang, M.; Feng, W.; Gao, L.; Zhao, L.; Liu, R.; Gao, F.; Zhao, Y.; Chai, Z.; Gao, X., Facile approach to observe and quantify the alpha(IIb)beta3 integrin on a single-cell. Anal. Chem. 2015, 87, 2546-2549.
- Liu, R.; Zhai, J.; Liu, L.; Wang, Y.; Wei, Y.; Jiang, X.; Gao, L.; Zhu, H.; Zhao, Y.; Chai, Z.; Gao, X., Spatially marking and quantitatively counting membrane immunoglobulin M in live cells via Ag cluster-aptamer probes. Chem. Commun. 2014, 50, 3560-3563.
NanocsInc.是全球领先的PEG修饰剂(PEGderivatives,PEGylation试剂)供应商，拥有种类齐全的PEG衍生物，包括：NHS-PEG，马来酰亚胺PEG，巯基PEG，氨基PEG，叠氮PEG，DSPEPEG，荧光PEG等。为全世界数以百万计的客户提供产品与服务。修饰性PEG可应用于药物输送、医疗设备改造和诊断分析等领域。Nanocs提供从磷脂PEGs到荧光PEGs的多种选择，种类齐全，产品线丰富。
NanocsInc.由一群在化学，生物学和纳米技术方面具有丰富学术背景的科学家于2001年在美国成立。 在过去十年中，Nanocs已发展成为一家全球材料供应商，其客户遍布50多个国家。凭借其在波士顿的中心研发和生产设施，Nanocs还在纽约，上海和新加坡设立了办事处。
自成立以来，Nanocs已发展成为生命科学研究领域的先进企业。在过去的十年中，我们在多个领域为客户提供服务：
- 用于药物开发，配方和临床前试验的制药公司;
- 大学，工业和政府研究实验室;
- 生物医学设备和诊断公司。
Nanocs的产品包括功能化生物聚合物，纳米粒子，标记蛋白质，抗体，酶，肽和核苷酸。我们还提供丰富的阵列反应分子，用于荧光标记，聚集，生物素化和生物共轭。
凭借我们强大的化学和生物学团队，Nanocs还为我们的客户提供化学合成，生物分子标记和结合以及化验开发方面的服务。
美国NANOCS高纯度PEG修饰剂是由美国NANOCS公司生产，国内由蚂蚁淘生物代理。NANOCS公司提供的聚乙二醇衍生物在世界范围能比任何公司更具有多样化，服务成千上万的全球客户。总之，nanocs聚乙二醇产品提供以下优点：
1.无限的选择，多种功能，品种及其齐全。
2.具有多种活性部位所需的反应
3.可以为客户量身定做各种产品
修饰性PEG的用途
1、蛋白质类药物PEG修饰： PEG修饰蛋白质药物可以延长药物的半衰期、降低免疫原性，同时最大限度地保留其生物活性。作为治疗药物，经过聚乙二醇(PEG)修饰的蛋白质比未修饰的蛋白质更有效。PEG对蛋白药物修饰途径主要有氨基修饰（包括N端氨基的酰化修饰、赖氨酸侧链氨基的酰化修饰、N端氨基的烷基化修饰）、羧基修饰、巯基修饰等。目前，国内外对PEG修饰蛋白质类药物的研究主要集中于腺苷脱氨酶、天冬酰胺酶、干扰素、粒细胞集落刺激因子、白细胞介素等，更有40多个药物正在进行临床研究。
2、肽类化合物PEG修饰：肽类化合物PEG修饰，如畦降钙素、表皮生长因子的PEG修饰产物的半衰期和生物活性显著高于原型药物。尤其是肽类化合物在聚乙二醇定点修饰方面较蛋白质更易于实现。在肽类化合物的PEG修饰研究中应用最普遍的是mPE
3、PEG修饰脂质体：普通免疫脂质体由于在血液中的循环半衰期短，易于被清除，限制了其发展。PEG修饰的长循环脂质体，增加了脂质体的血液循环时间，不但能够逃避网状内皮系统的捕获，还能提高脂质体的被动靶向性。已经被广泛用于脂质体药物制剂。
4、PEG修饰有机小分子药物：很多小分子药物，目前以抗肿瘤药物为多，采用PEG修饰技术，聚乙二醇支载小分子，可以把它的许多优良性质也随之转移到结合物中，使该聚合物具有优异的生物相容性，在体内能溶于组织液中，能被机体迅速排出体外而不产生任何毒副作用。很多抗肿瘤药物通过高分子量PEG修饰，能够达到肿瘤组织的被动靶向给药。
5、其它应用：PEG修饰亲和配体和辅因子在含水的两相分配系统中应用，用于生物大分子和细胞的纯化和分析。PEG修饰糖类可作为新的药物材料、药物载体。寡核苷酸PEG化可以增加溶解度，增加对核酸酶的抵抗和细胞膜穿透性。生物材料PEG化可以减少血栓形成，降低蛋白质和细胞黏附性。
蚂蚁淘电商平台
ebiomall.com
ebiomall.com
公司简介
蚂蚁淘（www.ebiomall.cn）是中国大陆目前唯一的生物医疗科研用品B2B跨境交易平台，
该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
蚂蚁淘承诺
正品保证： 全球直采 在线追溯
蚂蚁淘所有产品都是自运营的，我们已经跟国外多家厂方建立品牌推广合作关系, 获得对方的支持和授权； 同时客户可以通过订单详情查看到货物从厂方至客户的所有流程， 确保货物的来源； 正规报关，提供13%增值税发票。
及时交付： 限时必达 畅选无忧
蚂蚁淘的运营团队都是有着多年经验的成员，他们熟悉海外采购、仓储物流、报关等环节； 同时通过在线的流程监控，蚂蚁淘的进口速度比传统企业提高了50%以上， 部分产品甚至能做到7-10天到货，即蚂蚁淘的“时必达”服务。
轻松采购： 在线下单 简单省事
蚂蚁淘的价格是真实透明的，并且具有很大的价格优势，不需要繁杂的询价比价； 报价单与合同可以直接在线生成或打印；就像在京东购物一样， 您的鼠标点击几 次即完成在蚂蚁淘的采购，订单详情会告诉您所有进程。
售后申请： 耐心讲解 优质服务
蚂蚁淘提供的产品在使用过程中如因产品质量问题有售后需求时， 您可通过我的订单提交您的“申请售后”， 蚂蚁淘产品顾问会第一时间为您处理， 在售后服务过程中如遇到问题也可致电蚂蚁淘客服热线：4000-520-616。
2021-08-23
分子诊断是指应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术。分子诊断是预测诊断的主要方法，既可以进行个体遗传病的诊断，也可以进行产前诊断。分子诊断主要是指编码与疾病相关的各种结构蛋白、酶、抗原抗体、免疫活性分子基因的检测。... 查看更多
>
2021-09-21
上海钰博生物科技有限公司在发布的ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imaging 内质网红色荧光探针（活细胞）供应信息，浏览与ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imaging 内质网红色荧光探针（活细胞）相关的产品或在搜索更多与ER-Tracker Red (BODIPY® TR Glibenclamide), for live-cell imag 查看更多
>
2021-08-21
内质网绿色荧光探针（活细胞）是由上海前尘生物科技有限公司代理或销售的Yeasen品牌的试剂，产品来源于Yeasen。上海前尘生物科技有限公司是中国最权威的内质网绿色荧光探针（活细胞）试剂销售服务商之一，在浦东新区等地方销售内质网绿色荧光探针（活细胞）试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业内质网绿色荧光探针（活细胞）仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的内质网绿色荧光探针（活细胞）产品 查看更多
>
2021-08-13
在紫外-可见-近红外区有特征荧光，并且其 荧光性质（激发和发射波长、 强度、寿命、 偏振等）可随所处环境的性质，如极性、折射率、粘度等改变而灵敏地改变的一类荧光性分子。... 查看更多
>
2018-03-20
广州威佳科技有限公司在发布的寡核苷酸探针稀释液供应信息，浏览与寡核苷酸探针稀释液相关的产品或在搜索更多与寡核苷酸探针稀释液相关的内容。 查看更多
>
2018-03-24
杭州晓柚生物科技有限公司在发布的HP1 HypoxyprobeTM-1 Kit 缺氧探针检测试剂盒供应信息，浏览与HP1 HypoxyprobeTM-1 Kit 缺氧探针检测试剂盒相关的产品或在搜索更多与HP1 HypoxyprobeTM-1 Kit 缺氧探针检测试剂盒相关的内容。 查看更多
>
2018-03-16
北京孚博生物科技有限公司在发布的EML4 Breakapart 探针供应信息，浏览与EML4 Breakapart 探针相关的产品或在搜索更多与EML4 Breakapart 探针相关的内容。 查看更多
>
2018-04-12
western 免疫组化试剂盒 放射免疫试剂盒 流式细胞试剂盒 细胞库/细胞培养 查看更多
>
2021-08-19
经气管镜超声引导针吸活检术（EBUS-TBNA）是一项具有重要辅助诊断价值的技术。有研究表明，与外科纵膈镜手术检查相比，EBUS-TBNA 操作安全性更高，而诊断阳性率无明显区别。近来较多研究着眼于在保持操作安全及有效性的同时，如何简化 EBUS-TBNA 的操作过程。在传统 EBUS-TBNA 操作中，当内置探针的活检针进入目标淋巴结后，探针才拔出，以此阻止细胞或血液进入气管镜内腔 查看更多
>
2018-07-12
广州伯信生物科技有限公司在发布的Blot探针供应信息，浏览与Blot探针相关的产品或在搜索更多与Blot探针相关的内容。 查看更多
>
北京博凌科为生物科技有限公司在发布的2 x RealTime PCR Mix （Probe探针法）供应信息，浏览与2 x RealTime PCR Mix （Probe探针法）相关的产品或在搜索更多与2 x RealTime PCR Mix （Probe探针法）相关的内容。 查看更多
>
2018-05-07
近日，国家药品监督管理局经审查，批准了北京纳捷诊断试剂有限公司研制的创新产品“丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法)”的注册。该产品基于自主创新的一管法的PCR专利技术，用于体外定量测定血清样本中的丙型肝炎病毒(HCV)核酸(RNA)。该产品适用于需要进行HCV感染检测的患者和接受抗病毒治疗的丙型肝炎患者。国家药品监督管理局鼓励支持医疗器械产业创新发展，进一步做好创新医疗器械审查。食品药品监管部门将加强产品上市后质量监管，保障公众用械安全，确保医疗器械产业的健康有序发展。 查看更多
>
常见问题
蚂蚁淘所售产品均为正品吗？
蚂蚁淘的创始人兼CEO是钟定松先生，具有十年的从业经验，在业界享有良好的口碑；
Ebiomall是跨境直采平台，我们直接从厂家采购，自己的团队负责国际物流和清关，中间没有第三方，蚂蚁淘承诺所售产品仅为正品，假一罚十。
下单后可以修改订单吗？
未确认状态的订单可以修改，打开“订单详情”页面，点击右上角的“修改订单”即可，若已审核确定，则订单无法修改。
商品几天可以发货？
现货产品付款审核后即可发货,大部分期货产品在3周左右即可到货,提供时必达服务的产品订单审核十天内即可发货。
订单如何取消？
如订单处于未确定状态，进入“我的订单"页面，找到要取消的订单，点击“取消订单”按钮。
可以开发票吗？
本网站所售商品都是正规清关，均开具13%正规发票，发票金额含配送费金额，另有说明的除外。
如何联系商家？
蚂蚁淘任何页面都有在线咨询功能，点击“联系客服”、“咨询”或“在线咨询”按钮，均可咨询蚂蚁淘在线客服人员，
或拨打4000-520-616，除此之外客户可在 联系我们页面找到更多的联系方式。
收到的商品少了/发错了怎么办？
同个订单购买多个商品可能会分为一个以上包裹发出，可能不会同时送达，建议查看订单详情是否是部分发货状态；如未收到，可联系在线客服或者致电4000-520-616。
退换货/维修需要多长时间？
一般情况下，退货处理周期为客户收到产品一个月内（以快递公司显示签收时间为准），包装规格、数量、品种不符，外观毁损、短缺或缺陷，请在收到货24小时内申请退换货；特殊商品以合同条款为准。
商品咨询
PCR引物和探针 123
夏至chxdx2018-01-23
探针应用在Southern杂交反应中，引物应用在扩增反应中
在分子生物学中，探针是根据碱基互补的原理，用来与特定的DNA片段做杂交以对特定的DNA片段进行检测，如Southern杂交
引物是用来扩增DNA序列的，因为核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸，引物就是用来提供3-OH的。
只要是符合要求的DNA片段都可以用来做探针和引物，引物是用来扩增DNA序列，探针用来与特定的DNA片段做分子杂交的
在分子生物学中，探针是根据碱基互补的原理，用来与特定的DNA片段做杂交以对特定的DNA片段进行检测，如Southern杂交
引物是用来扩增DNA序列的，因为核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸，引物就是用来提供3-OH的。
只要是符合要求的DNA片段都可以用来做探针和引物，引物是用来扩增DNA序列，探针用来与特定的DNA片段做分子杂交的
MGB探针与普通的探针有什么区别_问答详情_引物与探针_其他分子...123
casperhehe2021-08-16
在普通探针基础上MGB修饰的探针，它的杂交能力更强，更稳定。
kstore服务端中文版kstore服务端纯净版下载最火软件站123
wbcldx2018-01-23
通常不会通用的。除了引物设计的一些基本原则以外，他俩的引物设计要求是不一样的。
原位杂交引物要求：
1. 为了避免检测mRNA时基因组序列的干扰,设计探针时尽量选择在跨内含子的部位。
2. 通常探针的长度（既PCR产物长度）以100-400bp为宜，过长不易穿透组织，杂交效率减低；过短特异性低。
而Realtime引物设计：
1.产物长度80-150bp为宜，可延伸到300bp。
而且你做实时定量的时候，还要做标准曲线，确定引物的扩增效率好不好。
原位杂交引物要求：
1. 为了避免检测mRNA时基因组序列的干扰,设计探针时尽量选择在跨内含子的部位。
2. 通常探针的长度（既PCR产物长度）以100-400bp为宜，过长不易穿透组织，杂交效率减低；过短特异性低。
而Realtime引物设计：
1.产物长度80-150bp为宜，可延伸到300bp。
而且你做实时定量的时候，还要做标准曲线，确定引物的扩增效率好不好。
引物探针引物和探针有什么区别吗123
如琬似花10fP2021-08-02
如果你做的事荧光定量PCR，其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的，只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西，探针法还需要taqman探针，这个探针的设计是比较有讲究的，并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计，一般使用相关软件进行。
【求助】荧光定量PCR如何设计引物 核酸基因技术论坛123
lovedurian2021-08-10
探针与引物的区别 匠子生活123
capitalbio52021-08-14
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过分子杂交与目的基因结合，产生杂交信号，能从浩翰的基因组中把目的基因显示出来。根据杂交原理，作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。
引物，又名引子。是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上。
引物，又名引子。是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上。
PCR中的引物和探针是一个东西吗?不是的话有什么区别,具体一点.123
小火柴qfpb2021-08-06
prR的引物一般是RNA（单链）,而探针是已知碱基序列的dna或rna
引物与探针相关问答,引物与探针知道,引物与探针疑问,引物与探针...123
dealdream2021-08-09
请问大家一个qpcr引物探针设计的问题 分子生物 学术...123
【圣之裁决】灡2021-07-21
一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引 物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用MasterMix，模板和引物的不同进行优化，达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中，有下面几点需要注意：
1. MasterMix不要反复冻融，如果经常使用，最好溶解后放在4度。
2. 更多的配制Mix进行，减少加样误差。最好能在冰上操作。
3. 每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样！
4. 所有成分加完后，离心去除气泡。
5. 每个样品至少3个平行孔。
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引 物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用MasterMix，模板和引物的不同进行优化，达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中，有下面几点需要注意：
1. MasterMix不要反复冻融，如果经常使用，最好溶解后放在4度。
2. 更多的配制Mix进行，减少加样误差。最好能在冰上操作。
3. 每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样！
4. 所有成分加完后，离心去除气泡。
5. 每个样品至少3个平行孔。
RNA转染试剂的对比 实验动物_中国实验动物信息网123
上帝在云端微笑2021-08-17
引物肯定需要特异性的啊要不然你扩增出乱七八糟的条带对结果影响很大的
看引物能不能特异性扩增，你可以检查一下扩增后的熔解曲线，一般单一的峰是特异性引物，如果有双峰那就是扩出来了杂带
看引物能不能特异性扩增，你可以检查一下扩增后的熔解曲线，一般单一的峰是特异性引物，如果有双峰那就是扩出来了杂带
免疫学实验一抗,二抗的选择与搭配原则和方法.ppt文档全文免费阅读...123
2018-03-25
探针是能与特异靶分子反应并带有供反应后检测的合适标记物的分子。利用核苷酸碱基顺序互补的原理，用特异的基因探针即识别特异碱基序列的有标记的一段单链DNA（或RNA）分子，与被测定的靶序列互补，以检测被测靶序列的技术叫核酸探针技术。探针制备就是将目的基因进行标记。特异性探针有三种形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是目前最常采用的探针。RNA探针用途很广，也容易获得，但其不稳定性限制了其商业用途。cDNA探针的获得是，将特定的基因片段装载到质粒或噬菌体中，经过扩增、酶切、纯化等复杂的步骤，才能得到一定长度的cDNA探针。这一过程比较复杂，有相应条件的实验室才能做到。寡核苷酸探针是在已知基因序列的情况下，由核酸合成仪来完成，可廉价获得大量的此类探针。质量也相对来说更为稳定。由于cDNA探针长度通常为数百至数千个碱基，所以有良好的信号放大作用，但其渗透性比较差。寡核苷酸探针一般为十数个至数十个碱基，渗透性强，但信号放大作用则较差，合成的多相寡核苷酸探针，敏感性可以达到cDNA探针水平。
探针的标记方式有放射性标记和非放射性标记。标记物质有放射性元素（如32P等）和非放射性物质（如生物素、地高辛等）。32P是最常用的核苷酸标记同位素，被标记的dNTP本身就带有磷酸基团，便于标记。特点是比活性高，可达9000Ci/mmol；发射的β射线能量高。用它标记的探针自显影时间短，灵敏度高。32P的半寿期短，虽使用不方便，但为废弃物的处理减轻了压力。非放射性标记法有酶标法和化学物标记法。酶标方法与免疫测定ELISA方法相似，只是被标记的核酸代替了被标记的抗体，事实上被标记的抗体也称为探针，现有许多商品是生物素、地高辛标记的。血凝素与生物素有非常高的亲和性，当血凝素标记上过氧化物酶或碱性磷酸酶，经杂交反应最终形成探针-生物素-血凝素酶复合物（ABC法），酶催化底物显色，观察结果。ABC法底物显色生成不溶物，以便观测结果。酶标记法复杂、重复性差，成本高，但便于运输、保存，灵敏度与放射物标记法相当。 ①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同时在3´端修复加入被标记核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀，多用于大分子DNA标记，(>1000bp最好)，但单链DNA、RNA不能用该法标记。
②随机引物法。随机引物是指含有各种可能排列顺序的寡聚核苷酸片断的混合物，因此它可以与任意核苷酸序列杂交，起到聚合酶反应的引物作用。将待标记的DNA探针片断变性后与随机引物一起杂交，然后以此杂交的寡聚核苷酸为引物，在大肠杆菌DNA聚合酶I大断段（KlenowFragment）催化下，合成与探针DNA互补的DNA链，当在反应体系中含有a-32P-dNTP时，即形成放射性同位素标记的DNA探针。具有上述优点，可代替缺口平移法。此外大小、单双DNA均可标记，标记均匀，标记率高，但也不能标记环状DNA。随机引物法标记探针一般长400~600bp。
③末端标记法（又叫尾标）。利用末端转移酶可进行“尾标”，尾标适用于寡核苷酸探针标记，寡核苷酸探针多用于核酸“点”突变的检测，该探针可用核酸合成仪人工合成，克隆出的探针一般较长，特异性好，标记量大，杂交的检出信号强。 1、4—6微米切片，用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附
2、56—60℃烤片2—16h
3、新鲜二甲苯脱蜡，10minX2（趁热脱蜡）
4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空气干燥
5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释，浓度为25μg/ml），37℃消化10—15min
6、弃去蛋白酶K工作液，0.1MTBS洗涤3minX3次逐级酒精脱水（85%，95%，100%酒精）1minX3次然后空气干燥
7、加入20μl探针，加盖薄膜。（探针用预杂交液稀释，浓度为5μg/ml）。
8、95℃变性10—12min；立刻置于冰块上，防止复性。
9、37℃杂交16—20h
10、揭去薄膜，每张切片加入以下杂交后洗涤液：
>用2—3滴2XSSC37℃洗涤3minX2次；
>0.5XSSC37℃洗涤3minX2次；
>0.2XSSC37℃洗涤3minX2次；
11、0.1MPBS/TBS缓冲液洗涤，1minX3次
12、滴加小鼠抗地高辛生物素标记的抗体工作液，37℃孵育45—60min；
13、0.1MPBS浸洗，5minX3次
14、滴加高敏碱性磷酸酶链亲和素复合物工作液，37℃孵育45—60min。
15、0.1MPBS浸洗，5minX3次
16、滴加NBT/BCIP显色6—16h，
17、双蒸水终止反应（37℃10min—2h），双蒸水浸洗，5minX2次
18、滴加核固红，30秒—5min；
19、双蒸水浸洗，5minX3次
20、脱水、透明、封片
探针的标记方式有放射性标记和非放射性标记。标记物质有放射性元素（如32P等）和非放射性物质（如生物素、地高辛等）。32P是最常用的核苷酸标记同位素，被标记的dNTP本身就带有磷酸基团，便于标记。特点是比活性高，可达9000Ci/mmol；发射的β射线能量高。用它标记的探针自显影时间短，灵敏度高。32P的半寿期短，虽使用不方便，但为废弃物的处理减轻了压力。非放射性标记法有酶标法和化学物标记法。酶标方法与免疫测定ELISA方法相似，只是被标记的核酸代替了被标记的抗体，事实上被标记的抗体也称为探针，现有许多商品是生物素、地高辛标记的。血凝素与生物素有非常高的亲和性，当血凝素标记上过氧化物酶或碱性磷酸酶，经杂交反应最终形成探针-生物素-血凝素酶复合物（ABC法），酶催化底物显色，观察结果。ABC法底物显色生成不溶物，以便观测结果。酶标记法复杂、重复性差，成本高，但便于运输、保存，灵敏度与放射物标记法相当。 ①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口，然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸，同时在3´端修复加入被标记核苷酸，切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀，多用于大分子DNA标记，(>1000bp最好)，但单链DNA、RNA不能用该法标记。
②随机引物法。随机引物是指含有各种可能排列顺序的寡聚核苷酸片断的混合物，因此它可以与任意核苷酸序列杂交，起到聚合酶反应的引物作用。将待标记的DNA探针片断变性后与随机引物一起杂交，然后以此杂交的寡聚核苷酸为引物，在大肠杆菌DNA聚合酶I大断段（KlenowFragment）催化下，合成与探针DNA互补的DNA链，当在反应体系中含有a-32P-dNTP时，即形成放射性同位素标记的DNA探针。具有上述优点，可代替缺口平移法。此外大小、单双DNA均可标记，标记均匀，标记率高，但也不能标记环状DNA。随机引物法标记探针一般长400~600bp。
③末端标记法（又叫尾标）。利用末端转移酶可进行“尾标”，尾标适用于寡核苷酸探针标记，寡核苷酸探针多用于核酸“点”突变的检测，该探针可用核酸合成仪人工合成，克隆出的探针一般较长，特异性好，标记量大，杂交的检出信号强。 1、4—6微米切片，用防脱片胶（多聚赖氨酸）处理过的玻片贴附
2、56—60℃烤片2—16h
3、新鲜二甲苯脱蜡，10minX2（趁热脱蜡）
4、100%乙醇5minX2次，不用浸水，直接空气干燥
5、加入50μl蛋白酶K工作液（蛋白酶K用蒸馏水稀释，浓度为25μg/ml），37℃消化10—15min
6、弃去蛋白酶K工作液，0.1MTBS洗涤3minX3次逐级酒精脱水（85%，95%，100%酒精）1minX3次然后空气干燥
7、加入20μl探针，加盖薄膜。（探针用预杂交液稀释，浓度为5μg/ml）。
8、95℃变性10—12min；立刻置于冰块上，防止复性。
9、37℃杂交16—20h
10、揭去薄膜，每张切片加入以下杂交后洗涤液：
>用2—3滴2XSSC37℃洗涤3minX2次；
>0.5XSSC37℃洗涤3minX2次；
>0.2XSSC37℃洗涤3minX2次；
11、0.1MPBS/TBS缓冲液洗涤，1minX3次
12、滴加小鼠抗地高辛生物素标记的抗体工作液，37℃孵育45—60min；
13、0.1MPBS浸洗，5minX3次
14、滴加高敏碱性磷酸酶链亲和素复合物工作液，37℃孵育45—60min。
15、0.1MPBS浸洗，5minX3次
16、滴加NBT/BCIP显色6—16h，
17、双蒸水终止反应（37℃10min—2h），双蒸水浸洗，5minX2次
18、滴加核固红，30秒—5min；
19、双蒸水浸洗，5minX3次
20、脱水、透明、封片
miRNA 分析中的 qRTPCR 疑难解答123
supio20162021-08-01
上面较高的是样本曲线，下面较低的是未加样本（茎环引物和引物、探针都加入)
▍
官网分类
▍
品牌问答
