TheKi-67nuclearantigenisassociatedwithcellproliferationandfoundthroughoutthecellcycle;thoughnotinG0phase(1,2).TheassessmentofKi-67proliferationinbreastcancershasshowntheKi-67labellingindexisanimportantpredictorofsurvival(3).Cytokeratin(CK)7isexpressedinepithelialcellsoftheovary,lungandbreast.RabbitmonoclonalCK7(CloneBC1)isoftenusedinconjunctionwithCK20andCDX-2indistinguishingpulmonary,ovarianandbreastcarcinomas(CK7+)frommostcoloncarcinomas(CK7-)(4).ClonesEP17andEP30recognizeCK8andCK18,bothofwhichrecognizelowmolecularweightintermediatefilamentproteins.Innormaltissues,CK8/18recognizesallsimpleandglandularepithelium(5).Inneoplastictissues,CK8/18mayproveusefulfortheidentificationofmostadenocarcinomasandsomesquamouscellcarcinomas.CK8/18expressionpatternsmayalsoaidintheclassificationoftumorsofunknownoriginandpoorlydifferentiatedcarcinomas(5-7).CK8/18rabbitmonoclonalmaybeusefulasastainingmaskinamultiplexstainwithmousemonoclonalantibodyKi-67.
| IntendedUse | IVD |
|---|---|
| Format | Predilute |
| Volume | 6.0ml |
| Antigen | 1002bpKi-67CDNAfragment,CK18,CK7,CK8 |
| Source | MouseMonoclonal,RabbitMonoclonal |
| Isotype | IgG,IgG/kappa |
| Clone | BC1,BiocareClone,EP17,EP30,MIB-1 |
| Localization | Cytoplasmic,Nuclear |
References:
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看引物能不能特异性扩增，你可以检查一下扩增后的熔解曲线，一般单一的峰是特异性引物，如果有双峰那就是扩出来了杂带
设计方法：通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物，正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列，反向引物在茎环上。
反转录茎环通用序列：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAC
miRNA序列：
>mmu-miR-99b-5p
MIMAT0000132 Mus musculus miR-99b-5p
CACCCGUAGAACCGACCUUGCG
mmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为：
GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG
定量PCR反向引物为：TGTCGTGGAGTCGGC
正向引物为：CACCCGTAGAACCGAC
一般来讲，进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液，只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高，所以每个样品至少要做3个平行孔，以防在后面的数据分析中，由于Ct相差较多或者SD太大，无法进行统计分析。通常来讲，反应体系的引 物终浓度为100-400mM；模板如果是总RNA一般是10ng-500，如果cDNA，通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液，要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值，在操作过程中，还需要根据所用MasterMix，模板和引物的不同进行优化，达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中，有下面几点需要注意：
1. MasterMix不要反复冻融，如果经常使用，最好溶解后放在4度。
2. 更多的配制Mix进行，减少加样误差。最好能在冰上操作。
3. 每管或每孔都要换新枪头！不要连续用同一个枪头加样！
4. 所有成分加完后，离心去除气泡。
5. 每个样品至少3个平行孔。
在分子生物学中，探针是根据碱基互补的原理，用来与特定的DNA片段做杂交以对特定的DNA片段进行检测，如Southern杂交
引物是用来扩增DNA序列的，因为核苷酸必须要连接在3-OH上才能够合成延伸，引物就是用来提供3-OH的。
只要是符合要求的DNA片段都可以用来做探针和引物，引物是用来扩增DNA序列，探针用来与特定的DNA片段做分子杂交的
引物，又名引子。是一小段单链DNA或RNA，作为DNA复制的起始点，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶仅仅可以把新的核苷酸加到已有的DNA链上。
