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Ursabioscience/Mellitus Violet C™
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Ursabioscience/Mellitus Violet C™
品牌 / 
Ursa
货号 / 
18
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MellitusVioletC™istheconvenientcontrolcompoundforMellitusVioletprobes1-3™.Withthesamechromophorefluorescentbackbone,butdoesnotchelatedissolvedglucose,MellitusVioletC™servesasanidealcontrolcompoundforall3oftheMellitusViolet™probes.MellitusVioletC™doesnotshowanyresponsetoglucose,fructoseorotherdiols.Similartotheparentprobemolecules,MellitusVioletC™canreADIlybeexcitedat320nm,withanemissioncentredat≈430nmintheblueregionofthevisIBLespectrum. 

MellitusVioletC™issolddryandissimplyreconstitutedbyaddingwater/MeOH.Onevialofourprobewilltypicallyallowfor10control-likemeasurementstobeundertaken,whenfurtherdilutedinto3cm3volumeswithinacuvette. 50µLofwater/MeOHand/orbufferistypicallyaddedtoeachdryvial.Subsequently,5µLaliquotsdilutedto3cm3,typicallygiveanoptimumODof≈0.25.

Foroptimumperformance,probevialsshouldbestoredat-2to-8Cwhennotbeingused.Probesolutionsshouldbeusedafterdilution.

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DIG配基随机标记DNA探针1.标记DNA探针 每次标准的反应可标记10ng至3线性的DNA,也可标记更大量的DNA,但所有的成分和体积要相应增加。(1)DNA探针热变性,煮沸10min,迅速冷却于冰/乙醇中5min以上,待用。(2)取Eppendorf管(1.5ml)置于冰上,加下列及试剂:新鲜变性的DNA 1-3六聚核苷酸混合物 2(管5)dNTP标记用混合底物 2(管6)加无菌重蒸水至 19DNA聚合酶Ⅰ大片段(Kl... 查看更多>
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近日,国家药品监督管理局经审查,批准了北京纳捷诊断试剂有限公司研制的创新产品“丙型肝炎病毒核酸测定试剂盒(PCR-荧光探针法)”的注册。该产品基于自主创新的一管法的PCR专利技术,用于体外定量测定血清样本中的丙型肝炎病毒(HCV)核酸(RNA)。该产品适用于需要进行HCV感染检测的患者和接受抗病毒治疗的丙型肝炎患者。国家药品监督管理局鼓励支持医疗器械产业创新发展,进一步做好创新医疗器械审查。食品药品监管部门将加强产品上市后质量监管,保障公众用械安全,确保医疗器械产业的健康有序发展。 查看更多>
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prR的引物一般是RNA(单链),而探针是已知碱基序列的dna或rna
如果你做的事荧光定量PCR,其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的,只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西,探针法还需要taqman探针,这个探针的设计是比较有讲究的,并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计,一般使用相关软件进行。
miRNA引物设计(茎环法+染料法检测)

设计方法:通用茎环后端加miRNA后面6个碱基的反向互补序列为反转录引物,正向引物为miRNA去除后面6个碱基的序列,反向引物在茎环上。

反转录茎环通用序列:

GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGAC

miRNA序列:

>mmu-miR-99b-5p
MIMAT0000132 Mus musculus miR-99b-5p

CACCCGUAGAACCGACCUUGCG

mmu-miR-99b-5p反转录颈环引物为:

GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACCGCAAG

定量PCR反向引物为:TGTCGTGGAGTCGGC

正向引物为:CACCCGTAGAACCGAC
主要看你的产物大小,如果你的PCR产物在80-250bp之间,且用的是SYBR法或有合适的探针,那还是通用的
如果你做的事荧光定量PCR,其引物和一般引物在构成上是没有什么区别的,只是要更加注意引物二聚体、PCR产物大小等问题。染料法不需要其他东西,探针法还需要taqman探针,这个探针的设计是比较有讲究的,并且上面有荧光集团和猝灭基团。具体设计,一般使用相关软件进行。
是RNA探针。TaqMan 荧光探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭剂则在3’末端。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。常用的荧光基团是FAM,TET,VIC,HEX。 而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。
senseprimer5`TGGGCAGCAACAGCATCT3`Tm57.6℃GC%55.6%
anti-senseprimer5`CAAGGACCTCAAAGTCACAGC3`Tm52.4℃GC%52.4%
probe5`CTTCCGAGACACGCACATCA3`Tm59.9℃GC%55.0%,
是以mRNA序列为目的基因,欲做RT-PCR
这是我第一次合成引物和探针,因此格外小心,还请各位高手帮助看一下.谢谢!
我手上有用于RT-PCR的引物和探针(上海合成的,20bp),做培养细胞成功得到结果。现在做体内实验,不知道是否可以用这个探针来作FISH。
有的老师告诉我用甲醛固定的石蜡切片标本,因为石蜡和甲醛本身会激发荧光,作FISH效果不好,而且不容易成功。
这样的话,
1.是否需要重新设计探针做ISH?
2.检测目的mRNA只需要确定位置和在实验条件下发生的量的改变。使用FISH是否大材小用(本来我是希望能节省费用,用以前的引物探针的)?
核心探针发射器和延伸探针发射器的区别是什么?
一般Taqman定量PCR实验过程为:目的基因查找比对→探针与引物设计→探针与引物合成→配置反应体系→反应参数→重复实验,优化条件→获得曲线数据,比对标准曲线→再重复验证。
一个qpcr反应中是不是只需要一个探针引物就可以了
一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引 物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因 的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用MasterMix,模板和引物的不同进行优化,达到一个最佳反应体系。在反应体 系配置过程中,有下面几点需要注意:

1. MasterMix不要反复冻融,如果经常使用,最好溶解后放在4度。

2. 更多的配制Mix进行,减少加样误差。最好能在冰上操作。

3. 每管或每孔都要换新枪头!不要连续用同一个枪头加样!

4. 所有成分加完后,离心去除气泡。

5. 每个样品至少3个平行孔。