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TAN CHONG INTERNATIONAL LIMITED

来自 : mayitao

提供商：	晶莱生物
服务名称：	探针合成实验
规格：	探针合成实验

【晶莱生物】探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、萤光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。

实验材料	基因
试剂、试剂盒	转录缓冲液DTT RNA酶抑制剂CTP ATPS-UTP乙酸铵乙醇
仪器、耗材	水溶锅离心机培养箱烘箱
实验步骤	1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯0仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉淀至1μg/μl。 2. 室温配罝如下反应混合液（总体积20μl）：（1）4.0μl5×转录缓冲液（2）0.2μl1mol/lDTT （3）60URNA酶抑制剂（4）1.0μl三种10mmol/lNTP中的每一种（5）1.0μl1μg/μl酶切DNA （6）10.0μl［³⁵S］UTP （7）16USP6或T7RNA聚合酶（8）37℃温育30min，再加16U聚合酶并于37℃温育40min。 3. 在反应混合液中加入：60URNA酶抑制剂，20μl10mg/ml 的载体RNA和1.0μl 酶1，于37℃温育10min以除去摸板。 4. 往反应混合液加入以下液体：0.8μl1mol/lDTT、63μl无菌水和10μl3mol/l乙酸钠，取出1μl测定其cpm/μl值。 5. 加36.4μl7.5mol/l的乙酸铵于反应混合液（终浓度2mol/l）加50~100μgtRNA载体和272μl冷无水乙醇，置干冰上沉淀10min，以冷70%乙醇洗沉淀，晾干，需要的话可重复此步。以100μl10mmol/lDTT重溶DNA沉淀。 6. 确定其cpm/μl值，并计算掺入百分比，核糖核酸探针应于2~3天内使用。（70%到90%的标记掺入，结果可得70~90ng标记的RNA）。

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发布于： 2021-09-22 阅读（292）

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