Catalog Code Prefix | In Stock | Catalog Number | Catalog Code | Lot Number | Mean Diameter (µm) | Polymer Description | Product Class | Product Mode | |
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BM | Order | BM569 | BM569 | 9948 | 0.00 | BioMag® mRNA Purification System | II Std | A |
BangsLaboratories位于美国印地安那州,成立于1988年,专业生产生命科学研究用的各种微球达2000种以上,用于流式细胞分析,生物大分子的分离与检测,激光共聚焦,生物影像等。BangsLaboratories于2000年收购了成立于1984年的流式标准品公司,该公司掌握了许多标准品和校正品的专利。Bangs产品通过与流式细胞仪及试剂厂家的OEM合作,进入世界各地实验室。BangsLaboratories的流式分部前称为流式标准品公司,成立于1984年。目前为止,公司自己研发了许多标准品和校正品,并获得美国和其他国家的专利保护。公司的荧光标准品可帮助科研和临床工作人员在实验时更容易更准确地评估数据。公司提供下列领域的质控可定量标准品:流式、荧光显微镜、屏象分析(imageanalysis)以及其它荧光分析。
Bangslabs(BangsLaboratories,Inc.)是高品质特种微球供应商,其产品广泛用于诊断试剂、免疫分析、分子及细胞生物学、流式检测应用等,产品种类已达2000余种,并且逐年递增,完善的技术支持体系为客户提供全方位的项目服务。 热销产品有羧基荧光微球、铕螯合微球、分离磁珠、标准微球、CD抗原标记微球等,适用于时间分辨荧光检测、免疫层析或比浊、细胞及遗传物质分离纯化等科研及工业应用。
BangsLaboratories公司位于美国印地安那州,成立于1988年4月。专业提供生命科学研究用的各种微球。其种类齐全(2000种以上),可用于流式细胞仪检测,细胞与生物大分子的分离与检测,电镜、共聚焦成像仪、荧光显微镜与相差显微镜的观察等。微球除聚苯乙烯外,还有聚甲基丙烯酸酯,聚乙烯甲苯和硅等多种材料,部分提供羧基或氨基修饰,直径大小从20nm-200um不等,均一性高,有很好的热稳定性。公司可提供个性化服务,根据你需要的颜色染色。BangsLaboratories的流式分部前称为流式标准品公司,成立于1984年。目前为止,公司自己研发了许多标准品和校正品,并获得美国和其他国家的专利保护。Bangs作为流式定量领域的领导者,产品已进入世界各地。公司的荧光标准品可帮助科研和临床工作人员在实验时更容易更准确地评估数据。公司提供下列领域的质控可定量标准品:流式、荧光显微镜、屏象分析(imageanalysis)以及其它荧光分析。QuantumTMplex在流式细胞仪的基础上,实现多样品检测或多指标检测,用于细胞因子检测、病毒筛选、自免疫分析、抗体检测、药物、血型、分子诊断以及基因组分析等。使用本试剂盒可在流式细胞仪上对一个样品同时检测20个不同指标(如不同细胞因子或不同抗原)。QuantumPlex?SP微球同样是研究者理想的选择,由于它是以QuantumPlexmultiplex试剂盒内的StarfireRed染料染色,研究者可以在花费不多的情况下处理表面偶联物。QuantumTMMESFKits用于流式细胞仪的标准曲线制作与仪器校正,与QuantumTMplex配套。试剂盒中的每种微球均对应溶液中一定量的荧光分子,用于流式细胞仪的荧光强度校正。试剂盒内除了荧光标准品外,还有一个未染色的微球population以测定荧光阈值或设备的噪音水平。盒内提供QuickCal数据光盘。QuantumTMSimplyCellular®kit本试剂盒是BangsLabs最复杂产品之一,用于流式实验室可直接而简单地定量检测细胞的抗体结合能力和细胞表面的抗原表达。盒内有五种微球,一个为未标记的空白对照,其余四个与不同量人IgGI和IgGII抗体的Fc区特异性抗体偶联,分别具有不同的与小鼠IgG单抗结合的能力。QC3TMkit&QC3Windows®kitQC3kit用于监控与校正仪器的设置及性能,使不同实验室间流式细胞仪的检测结果具有可比性,避免因为污染或pH改变造成的偏差;QC3Windows?kit含有3种不同荧光的QC3微球与一种空白微球。QuickCalTMv.2.1用于BangsLabs公司所有Quantum产品的检测结果的分析。该软件适用于所有的流式细胞仪软件可根据MESF微球的荧光强度等建立标准曲线。该软件还可保存仪器设置,使仪器的性能得到长期有效保证。ProActiveTMProtein-activatedorProtein-CoatedMicrospheres采用独有的包被技术偶联生物素、DNA、HRP/AP以及抗体等,确保包被微球更稳定、包被效果更好。用于免疫学和分子生物学检测 Superparamagnetic磁珠Superparamagnetic磁珠表面可高效共价交联蛋白质或DNA等,被广泛应用于诊断与其它生命科学研究。COMPEL?磁珠适用于各种生物学检测与分离,有3、6和8um等几种直径,磁珠受强磁性吸引,使其与溶液的分离极为方便,同时残余磁性极低,是生命科学研究的理想选择。磁珠分离器MagneticSeparatorsBangsLaboratories公司1.5mL磁珠分离器用于各种不同的磁珠分离实验中,包括细胞分选、mRNA与DNA分离与其它生物大分子的纯化等。使用时,只要将装有磁珠的离心管放入分离器中,仪器就能产生高能磁场使磁珠得以与溶液分离开,从而实现磁珠的分离。此外,BangsLaboratories公司提供各种微球标准,如不同直径、不同荧光的荧光强度;硅微球UniformSilicaMicrospheres除各种分子生物学与免疫学检测用途外,还可用于毛细管电色谱分析(capillaryelectrochromatography,CEC)
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在弱碱性(pH 8~9)、暗处、室温或40℃条件下,氨基酸的α-氨基很容易与2,4-二硝基氟苯(缩写为FDNB或DNFB)反应,生成黄色的2,4-二硝基苯氨基酸(dinitrophenyl amino acid,简称DNP-氨基酸)。多肽或蛋白质的N-末端氨基酸的α-氨基也能与FDNB反应,生成一种二硝基苯肽(DNP-肽)。由于硝基苯与氨基结合牢固,不易被水解,因此当DNP-多肽被酸水解时,所有肽键均被水解,只有N-末端氨基酸仍连在DNP上,所以产物为黄色的DNP-氨基酸和其它氨基酸的混合液。混合液中只有DNP-氨基酸溶于乙酸乙酯,所以可以用乙酸乙酯抽提并将抽提液进行色谱分析,再以标准的DNP-氨基酸作为对照鉴定出此氨基酸的种类。因此2,4-二硝基氟苯法可用于鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸。
荧光标记物常用的有几十种,比如FITC, PE等等,各个生产厂家还有自己的专利产品
那为什么SFDA不批准CA199CEAAFP等检测试剂盒作为癌症检测的手段呢?
一、探针DNA标记方法
步骤 :
1.10ng~3ugDNA每管,双蒸水定量至总体积15ul
2.沸水水浴10分钟后迅速冰浴
3.加入 5号试剂 2ul , 6号试剂 2ul ,7号试剂 1ul
4.37度1小时~20小时
5.中止反应 加2ul 0.2M EDTA (pH 8.0) 和/或 65度 水浴 10分钟
二、标记效率检测
(一) 试剂配置
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution 1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
(二)对照的标记DNA(4号试剂)系列稀释
(三)步骤
1、取以上制备的管2~9各1ul,以及自己标记的探针1ul,点到一小片尼龙膜
2、通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、膜置塑料盒中加Maleic acid buffer 20ml ,15~25度轻摇孵育2分钟
4、10ml Blocking solution 孵育30分钟
5、10ml Antibody solution 孵育30分钟
6、10ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
7、10ml Detection buffer中平衡2~5分钟
8、膜在2ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间避免摇动
9、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水洗5分钟
蛋白酶K预处理
三、样品检测与杂交
(一) 步骤
1、 稀释供试品及阳性对照DNA,点膜
2、 通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、 将标记好的探针稀释到约25ng/ml, 煮沸5分钟后迅速冰浴
4、膜放入预热好的预杂交液(3.5ml/100cm2)中,充分混匀,避免起泡
5、倒掉预杂交液,加入杂交液及已变性的探针。杂交温度下至少孵育6小时
四、洗膜
1、2 × SSC, 0.1% SDS , 15-25° C,洗膜2次,每次5分钟。
2、0.5× SSC, 0.1% SDS ,预热至65~68° C,洗膜2次,每次5分钟
五、结果检测
(一) 试剂配制
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
(二) 步骤
1、Washing buffer洗膜1~5分钟
2、100ml Blocking solution 孵育30分钟
3、20ml Antibody solution 孵育30分钟
4、100ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
5、20ml Detection buffer中平衡2~5分钟
6、膜在10ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间摇动
7、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水50ml洗5分钟展开
而放射性核素标记,是对体外诊断试剂的某些元素进行放射性特征性标记,便于检测而已,这类的放射性强度不大,危害不高
TUNEL的缺点是:1),操作要求高,组织样本需要固定(即使是培养细胞,也需要固定),不恰当的固定方法对实验结果影响很大,导致背景过高或者信号过弱,因此实验结果重复性不好;有的人花上半年做一个体内的TUNEL是一点都不奇怪的。2),大部分诱导凋亡的药物也引起DNA损伤,从而产生DNA断裂,易引入假阳性;3)凋亡晚期细胞基因组大量降解,导致TUNEL标记反而减少,因此此法反应的是早期凋亡比例,不能严格反应凋亡比例,属于半定量研究。
尽管有如此多缺点,但由于其是目前为数不多的能原位标记凋亡细胞的方法,因此用于组织体内凋亡研究仍然是首选。但体外细胞实验研究,很少用此法。
凋亡检测中,TUNEL并不是过时的方法,现在研究凋亡的文献仍然常见。而且相反,还比以前多一点,因为现在体内实验越来越多了,甚至线虫的凋亡研究,都用TUNEL。
凋亡研究中,的确有几种方法过时了,当然是因为有替代方案了,比如DNAladder,电镜。至于AnnexinV是不能用来和TUNEL一起评论的,前者用于细胞,而且主要是悬浮细胞,后者主要用于组织。虽然有人也做镜下的AnnexinV观察,TUNEL的细胞staining,但这都不是主流。
回到lz的原帖,的确如大家所言,做贴壁细胞,不推荐用TUNEL。如果是经典凋亡途径,只是确定比例,用最经典,最常用的subG1法即可,如果是不确定是否是凋亡,用AnnexinV,不过贴壁细胞用此法,要注意消化时间。
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测 试剂盒成分 1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)向左转|向右转