
Description: | Traditional protocol for yeast mitochondria isolation/extraction involves a range of centrifugation-based sub-cellular fractionation procedures. Typically, the techniques include spheroplast preparation, glass-bead lysis using a homogenization instrument, differential centrifugation and several density gradient procedures using a variety of gradient media with ultracentrifugation. The procedures are very tedious and time-consuming. We feature a simple and efficient protocol for yeast mitochondria enrichment. The procedure is gentle and instrument free. Native mitochondrial proteins can be isolated from yeast in about one hour without ultracentrifugation. This kit contains optimized detergent-free protein extraction buffers. The protein yield is in the range of 150-250 μg/sample. The materials provided are sufficient for 50 extractions. |
Order #: | YM-017 |
Unit Size: | 50 Tests |
Supplier: | Invent Biotechnologies |
Restrictions: | Only available in Germany and selected European countries. |
Shipping: | Ambient |
Storage: | 0°C |
Subcategory: | Cell Fractionation |
More information: | Go to webpage |
MoBiTecGmbH是一家私人控股公司,由StephanDiekmann教授于1987年创立。与Max-Planck学会的密切关系以及德国领先的研究中心之一哥廷根的所在地促进了与某些研究中心的密切合作。德国最具创造力的科学家。此外,MoBiTec一直与欧洲和北美的科学家广泛合作,包括法国巴斯德研究所和荷兰Vrije大学的科学家。通过将许多研究人员的精彩创意商业化,MoBiTec能够提供一系列独特的高质量产品和简化的协议,使实验室生活更轻松,并为实际研究留出更多时间。MoBiTec的产品包括e。G。用于体内检测蛋白质-蛋白质或DNA-蛋白质相互作用的双杂交系统,用于筛选特定肽配体的噬菌粒展示系统和选择具有特异性结合特性的新蛋白质,方便的LamBDaPS基因组文库用于克隆的多功能DNA载体,表达和分析靶基因,有效表达和纯化重组蛋白的试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,固定化和可溶性酶,许多用于基因组学和蛋白质组学研究的产品(例如用于PCR,核酸和蛋白质纯化和分析),众多抗体,细胞因子,生长因子和重组蛋白,优质荧光试剂和试剂盒(如蛋白标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,柱和凝胶电泳附件)。与其自有产品线并行,MoBiTec分销德国多家国际公司的产品,包括荧光探针和研究化学品(AnaSpec,TEFLabs),量子点,各种DNA纯化试剂盒和DNA聚合酶(EdgeBio),诊断工具(ZJBioTech)),凝胶电泳配件(Amresco,ClareChemical),糖生物学产品(DextraLaboratories,Sumitomo),细胞转染试剂(Mirus)以及抗体,蛋白质,底物,精细化学品和分子和细胞生物学试剂盒 -特别是病毒学,免疫学,神经生物学,细胞凋亡,信号转导,细胞增殖,细胞毒性和癌症研究(MBLI,AGScientific,Amresco,AdarBiotech,AnaSpec,Echelon)。MoBiTec提供全面的服务,从清晰完整的产品文档开始,为客户提供个性化的建议和技术服务。MoBiTec产品通过MoBiTec的总部在德国分销,在其他国家由分销商分销。此外,MoBiTec不断寻求新产品和可销售的许可技术,因此对科学合作非常感兴趣,以开发创新的产品理念。
MoBiTec拥有来自欧洲和北美的研究人员,包括法国的Pasteur研究中心和荷兰的Vrije大学的科学家。MoBiTec公司能提供独一无二的高质量产品,从而简化实验设计,而留出更多更宝贵的时间用于实际的研究。产品包括:双杂交和单杂交系统——体内蛋白-蛋白和DNA-蛋白关系,噬菌体展示系统——筛选特殊的多肽配体和选择具有特异性结合特性的新的蛋白质,LamdaPS基因文库,用于克隆的多功能DNA载体,靶基因的表达与分析,重组蛋白质高效表达和纯化试剂盒,细胞转染试剂和细胞培养工具,各种固体和溶解状态的酶,基因组学和蛋白组学研究产品(PCR,核酸,蛋白质纯化分析),各种抗体、细胞因子、生长因子、重组蛋白质,高级荧光试剂和试剂盒(蛋白质标记试剂盒,标记抗体,细胞染色试剂,钙指示器),亲和层析仪,凝胶分析工具——凝胶柱和凝胶电泳附件。
ebiomall.com






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不知道发在这里合适不,实在是求助无门啊!版主手下留情。
一、探针DNA标记方法
步骤 :
1.10ng~3ugDNA每管,双蒸水定量至总体积15ul
2.沸水水浴10分钟后迅速冰浴
3.加入 5号试剂 2ul , 6号试剂 2ul ,7号试剂 1ul
4.37度1小时~20小时
5.中止反应 加2ul 0.2M EDTA (pH 8.0) 和/或 65度 水浴 10分钟
二、标记效率检测
(一) 试剂配置
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution 1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
(二)对照的标记DNA(4号试剂)系列稀释
(三)步骤
1、取以上制备的管2~9各1ul,以及自己标记的探针1ul,点到一小片尼龙膜
2、通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、膜置塑料盒中加Maleic acid buffer 20ml ,15~25度轻摇孵育2分钟
4、10ml Blocking solution 孵育30分钟
5、10ml Antibody solution 孵育30分钟
6、10ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
7、10ml Detection buffer中平衡2~5分钟
8、膜在2ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间避免摇动
9、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水洗5分钟
蛋白酶K预处理
三、样品检测与杂交
(一) 步骤
1、 稀释供试品及阳性对照DNA,点膜
2、 通过紫外线或者120度半小时使核酸交连到膜上
3、 将标记好的探针稀释到约25ng/ml, 煮沸5分钟后迅速冰浴
4、膜放入预热好的预杂交液(3.5ml/100cm2)中,充分混匀,避免起泡
5、倒掉预杂交液,加入杂交液及已变性的探针。杂交温度下至少孵育6小时
四、洗膜
1、2 × SSC, 0.1% SDS , 15-25° C,洗膜2次,每次5分钟。
2、0.5× SSC, 0.1% SDS ,预热至65~68° C,洗膜2次,每次5分钟
五、结果检测
(一) 试剂配制
Solution Composition Preparation
Washing buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; pH 7.5 (20° C); 0.3% (v/v) Tween 20
Maleic acid buffer 0.1 M Maleic acid, 0.15 M NaCl; adjustwith NaOH (solid) to pH 7.5 (20° C)
Detection buffer 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, pH 9.5 (20° C)
TE-buffer 10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
Blocking stock solution Dissolve Blocking reagent (bottle 10) 10% (w/v) in Maleic
(10 × conc.) acid buffer underconstantly stirring on a heating block(65°C) or heat in a microwave oven,autoclave. The solution remains opaque
Blocking solution Prepare a 1 × working solution by dilutingthe 10 × Blocking solution1:10in Maleic acid buffer.
Antibody solution Centrifuge Anti-Digoxigenin-AP(vial 8) for 5 min at 10 000 rpm in theoriginal vial prior to each use, and pipet the necessary amount carefully from thesurface. Dilute Anti-
Digoxigenin-AP 1: 5 000 (150 mU/ml) in Blocking solution.
Colorsubstrate Add 40 _l of NBT/BCIP (vial 9) to 2 ml of Detection buffer.
solution Note: Store protected from light!
(二) 步骤
1、Washing buffer洗膜1~5分钟
2、100ml Blocking solution 孵育30分钟
3、20ml Antibody solution 孵育30分钟
4、100ml Washing buffer 洗2次,每次15分钟
5、20ml Detection buffer中平衡2~5分钟
6、膜在10ml新鲜配制的 Colorsubstrate solution 中避光孵育。显色期间摇动
7、中止反应 用TE-buffer或者双蒸水50ml洗5分钟展开
荧光标记物常用的有几十种,比如FITC, PE等等,各个生产厂家还有自己的专利产品
2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测 试剂盒成分 1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T 2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1 3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1 5 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1 6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1 7 终止液: 1N硫酸 12mL x 1 8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)向左转|向右转
而放射性核素标记,是对体外诊断试剂的某些元素进行放射性特征性标记,便于检测而已,这类的放射性强度不大,危害不高

