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ImmunoChem/Progesterone HRP/100 μg/CN1020
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ImmunoChem/Progesterone HRP/100 μg/CN1020
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ImmunoChem
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CN1020
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Progesterone HRP

Catalog # Pack Size Price(USD)
CN1020 100 μg $295.00

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Product Description
Progesterone is covalently linked to HRP through acylation. Progesterone-labelled HRP could be utilized for direct competitive ELISA for the detection and quantization of progesterone.
Direct competitive inhibition ELISA using immobilized anti-progesterone (3 µg/mL), and progesterone-labelled HRP (100 ng/mL). 50% inhibition occurred at 5 ng/mL of free progesterone under non-optimized conditions.
Structure of the Progesterone HRP Conjugate
Formulation
0.5 mg/mL in peroxidase stabilizing buffer with 50% glycerol
Conjugation
Progesterone-3(O-Carboxymethyl) Oxime-NHS active ester, via an acylation reaction
Progesterone/HRP molar ratio, approximately 3:1
Applications
ELISA
Scientific Description
Progesterone is a C-21 steroid hormone involved in the female menstrual cycle, pregnancy (supports gestation) and embryogenesis of humans and other species. Progesterone belongs to class of hormones called progestogens, and is the major naturally occurring human progestogen.
Storage & Stability
Product is stable for several weeks at 4°C. For extended storage, store product at –20ºC. Expiration date is six months from date of shipping if properly stored.
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2021-08-09
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底物???酶也是一种蛋白质,可以发生反应

各位大神求助,本人用TATARA的逆转录试剂盒进行逆转录过程,该过程为37度15分钟,85度5秒一个循环完成,我没注意今天让它跑了25个循环,反应体系里包含总RNA,逆转录引物(oligodT和随机引物6),dNTP,这样子会反复扩增CDNA么?因为有底物有引物在85度条件下不知道RNA会不会失活,就算RNA失活,以cDNA为模板,会不会进行扩增呢?谢谢各位啦

我用的试剂盒是avivasystem的,TMB底物加入之后感觉反应太过剧烈,加入之后高浓度的孔立即就开始变蓝,说明书是37度15-30分钟,孵育恰当的标准是:高浓度四孔变蓝色,低浓度(包含空白孔)无明显蓝色。我实际操作过程中,37度孵育15分钟已经全部孔变蓝,最终测下来od值过高,标曲八个点,空白0.2+,高浓度两空3以上,结果就是前六个点还是线性挺好的(r=0.9991),高浓度两个点完全不行。另一个问题是:我摸索了待测血清的稀释浓度,分别是不稀释、1/10、1/50、1/100,结果不稀释和1/10两个浓度测出来是负值(od小于空白对照),1/50和1/100测出来的值在标曲范围内(只取了线性好的前六个点),但是测值和稀释倍数也不成比例。请教各位:1.听人说TMB底物常温避光反应也可以,我能不能常温呢?这样我就好控制反应时间,还是继续37度孵育,把孵育时间缩短到10分钟甚至5分钟2.高浓度血清标本(不稀释、1/10稀释)测出负值应该怎么解释,厂家技术支持说可能浓度太大影响抗原抗体结合,这个能说得通吗?3.空白孔是不是应该不变色才对?空白孔显色是不是洗板时孔间污染导致的?要是这样的话,为什么前六点(含空白)标曲是好的?谢谢大家了
Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度,与酶浓度成正比,Km是酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度,那为什么又说Km与酶浓度无关??!!
Km值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时所对应的底物浓度,是酶的特征常数之一。
不同的酶Km值不同,同一种酶与不同底物反应Km值也不同,Km值可近似的反应酶与底物的亲和力大小:Km值大,表明亲和力小;Km值小,表明亲合力大。

Km最小的那个底物,就是酶的最适底物。
水解过程如下几种方法
向左转|向右转向左转|向右转向左转|向右转向左转|向右转
我做了ELISA方法学建立的实验,可惜按照三版全国临床检验规程上的方法配制底物液,显色偏浅,请高手指教,或者给我新的配方.或者给我指导,谢谢!

ELISA实验,操作的时候,加入底物,溶液变成蓝色,孵育一段时间后,加入终止液,变成黄色,测吸光值。然后,当天忘记扔板子了,第二天想到去扔的时候,所有孔都变成无色透明的了!!!为什么会褪色???是试剂有问题?还是因为室温太高环境影响?如果是试剂问题那我之前做的结果还能信么?

酶的活性和温度,酸碱度等条件有关
调节至最适合温度(一般是37度),合适的酸碱度时,酶的活性最高
科学网10月29日上海讯(记者黄辛)今天,国际顶级学术期刊《自然》(Nature)在线发表了复旦大学生物医学研究院徐彦辉教授课题组的论文。该项研究成果揭示了TET蛋白底物偏好性机制,对研究多种疾病的发病机制,尤其对血液肿瘤(如髓系白血病)治疗性药物开发有重大意义。
这篇题为“晶体结构揭示TET蛋白介导的氧化反应底物偏好性机制”的研究论文,首次报道了TET蛋白对三种DNA甲基化衍生物不同催化活性的分子机制,为基因组中5-羟甲基胞嘧啶相对稳定存在提供了分子水平的解释。该论文是徐彦辉课题组在DNA甲基化领域作出的又一突破性成果。组长徐彦辉为复旦大学生物医学研究院研究员,复旦大学附属肿瘤医院兼职教授。该课题组曾于2013年在《细胞》杂志报道TET蛋白的三维结构,于2015年初在《自然》杂志报道DNA甲基化建立的机制研究(参考徐彦辉课题组网站,http://xtal.fudan.edu.cn/index-ch.html)。
据悉,人体基因组DNA是生命遗传信息的基本载体,生命延续和繁衍需要DNA上的一种“甲基化修饰”。“甲基化修饰”具有调控人体内特定基因的表达和决定细胞命运的作用,可使细胞发生程序化的改变。哺乳动物基因组的胞嘧啶上会产生甲基化修饰,称为5-甲基胞嘧啶(5mC,即第5种碱基)。而TET蛋白是哺乳动物细胞中的一种氧化酶,可以执行DNA去甲基化功能。近期研究发现,TET蛋白在去甲基化过程中,将5mC氧化为5hmC(5-羟甲基胞嘧啶,第6种碱基)后,可继续催化5-hmC转化为5-fC(5-醛基胞嘧啶,第7种碱基)和5-caC(5-羧基胞嘧啶,第8种碱基)。其中,5hmC在细胞内相对稳定存在,且其含量远远高于5fC和5caC。但这一现象一直没有合理的生物学解释。徐彦辉课题组综合利用结构生物学,生物化学和计算生物学等研究方法,揭开了这一谜底。
徐彦辉课题组的生化实验表明,TET蛋白对5mC具备很高活性(产生5hmC),而对5hmC(产生5fC)和5fC(产生5caC)的活性很低。TET蛋白就如同连续的三个扶梯,在转化不同碱基的情况下,其转化速度明显不同,导致产生较多的5hmC和少量的5fC及5caC。结构研究发现,5mC在TET蛋白催化口袋中的取向使得它很容易被催化活性中心俘获并被氧化为5hmC。5hmC和5fC由于已经有氧的存在,其在催化口袋中被限制住,不容易发生进一步的氧化反应,导致TET蛋白对这两种碱基活性降低。在这样的催化能力差异下,TET会很顺利将5mC产生5hmC,一旦5hmC产生,TET将不容易使其进一步氧化为5fC和5caC,导致细胞内5hmC相对稳定,并且其含量远远高于5fC和5caC。在特定的基因中区域,TET蛋白可能被特定的调控因子激活,会跨越能垒阻碍产生高活性的TET,连续氧化为5fC和5caC。这使得5mC在TET蛋白催化下更容易被氧化为5hmC。这一发现解决了困扰表观遗传学领域的一个难题,也为揭示其他蛋白质逐步催化反应的分子机制提供了新思路和新方法。
据悉,该项工作是由复旦大学徐彦辉课题组与中国科学院上海药物所罗成课题组合作完成的,徐彦辉课题组的胡璐璐博士和程净东博士,以及罗成课题组的卢俊彦博士是该项工作的主要完成人。该项研究的结构数据是在中科院上海光源BL-17U,国家蛋白质科学中心BL-19U等线站上采集。
可以考虑以下几种情况:

1,底物DNA上没有该限制酶的识别、切断位点。特别是一些经过重组等处理的DNA,碱基易发生缺失、变化等。

2,限制酶识别位点上的A或C被甲基化。部分限制酶对识别位点中的碱基是否被甲基化比较敏感,从而无法切断该位点。

3,底物不纯。如果底物DNA中有限制酶阻害物质,回影响限制酶的酶切作用。在此种情况下,底物DNA须重新进行精制。

4,限制酶的识别、切断位点在底物DNA的高级构造中所处的位置,对酶切反应也有一定的影响,例如,限制酶NaeI在切断pBR322DNA时,就有着非常难以切断的部位。

5,限制性内切酶本身无活性或低活性