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Reaction Biology/CIAP1 BIR2 (His)/APT-11-487
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Human recombinant BIR2 domain of CIAP1 expressed in E. coli with anN-terminal 6xHis-tag and C-terminal Strep-tag.

ACCESSION #: NM_001166.4

INCLUDES AMINO ACIDS: 173-256

TAG(S): N-terminal 6xHis-Tag and C-terminal Strep-tag

MW: 13.33 kDa

EXPRESSION SYSTEM: E. coli

SUPPLIED AS: Solution of purified recombinant protein in 50 mM Tris pH7.5, 500 mM NaCl, 10% glycerol, 0.5 mM TCEP as determined by OD280

STORAGE: -70°C. Thaw quickly and store on ice before use. Theremaining, unused, undiluted protein should be snap frozen, for example in adry/ice ethanol bath or liquid nitrogen. Minimize freeze/thaws if possible, butvery low volume aliquots (<5 µl) or storage of diluted protein is notrecommended.

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近 日,国际学术期刊《核酸研究》(Nucleic Acid Research)在线发表了中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所王恩多研究组题为 Structural basis for substrate binding and catalytic mechanism of a human RNA:m5C methyltransferase NSun6 的最新研究成果。  5- 甲基胞嘧啶(m5C)是广泛存在于 DN... 查看更多>
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Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度,与酶浓度成正比,Km是酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度,那为什么又说Km与酶浓度无关??!!

各位大神求助,本人用TATARA的逆转录试剂盒进行逆转录过程,该过程为37度15分钟,85度5秒一个循环完成,我没注意今天让它跑了25个循环,反应体系里包含总RNA,逆转录引物(oligodT和随机引物6),dNTP,这样子会反复扩增CDNA么?因为有底物有引物在85度条件下不知道RNA会不会失活,就算RNA失活,以cDNA为模板,会不会进行扩增呢?谢谢各位啦

决定酶促反应最大速度Vm的因素是什么?是同一底物,尽管加不同种酶,其Vmax都相同吗?可以画曲线图解释一下吗?可是根据米曼氏方程来看又有点矛盾,Km变大,Vmax也需变大,才可使v变大。所以题目所述到底应该怎么理解呢

受体酶123
2018-06-17
不是。配体才是。比如神经末梢释放的乙酰胆碱和骨骼肌终板膜上的乙酰胆碱受体结合产生效应,而终板膜上的乙酰胆碱酯酶很快又把乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸,以终止效应。
我用的试剂盒是avivasystem的,TMB底物加入之后感觉反应太过剧烈,加入之后高浓度的孔立即就开始变蓝,说明书是37度15-30分钟,孵育恰当的标准是:高浓度四孔变蓝色,低浓度(包含空白孔)无明显蓝色。我实际操作过程中,37度孵育15分钟已经全部孔变蓝,最终测下来od值过高,标曲八个点,空白0.2+,高浓度两空3以上,结果就是前六个点还是线性挺好的(r=0.9991),高浓度两个点完全不行。另一个问题是:我摸索了待测血清的稀释浓度,分别是不稀释、1/10、1/50、1/100,结果不稀释和1/10两个浓度测出来是负值(od小于空白对照),1/50和1/100测出来的值在标曲范围内(只取了线性好的前六个点),但是测值和稀释倍数也不成比例。请教各位:1.听人说TMB底物常温避光反应也可以,我能不能常温呢?这样我就好控制反应时间,还是继续37度孵育,把孵育时间缩短到10分钟甚至5分钟2.高浓度血清标本(不稀释、1/10稀释)测出负值应该怎么解释,厂家技术支持说可能浓度太大影响抗原抗体结合,这个能说得通吗?3.空白孔是不是应该不变色才对?空白孔显色是不是洗板时孔间污染导致的?要是这样的话,为什么前六点(含空白)标曲是好的?谢谢大家了
以OPD和TMB为底物的显色 在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中,如以TMB为底物,则提供的底物为A和B两瓶应用液;如以OPD为底物,则试剂盒提供OPD片剂或粉剂,临用前配制。37℃ 30分钟可使HRP的底物催化反应完全,为使弱阳性样本孔能有充分的显色,建议在37℃下反应25~30分钟后,终止反应比色测定。 此外,在加入底物开始显色反应前,最好是先检查一下底物溶液的有效性,即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或eppe ndorf管中,观察是否有显色出现,以OPD为底物,配好后应为无色,则需避光进行,否则就不能使用。以TMB为底物,整个显色反应无需避光,显色反应完成后,加入酸终止反应,振荡混匀后即可进行下面的比色测定或肉眼判断结果。ELISA的比色测定 ELISA的比色测定由酶标仪进行测定后,有许多阴性测定孔的吸光度值为负数或测定假阳性率大大增加等。这主要是未能正确理解和使用酶标仪所致。故需强调下面两点:1)比色测定时,一定要注意酶标仪的波长是否已调至合适或所用滤光片是否正确。在行ELISA测定时 ,以TMB(比色波长450nm)为底物和以OPD(比色波长492nm)为底物的试剂盒均有使用,滤光片需根据要求随时更换。故易出现滤光片错用的问题。2)单波长或双波长比色选择的问题。单波长比色以对显色具有最大吸收的波长如450nm或492nm进行比色测定;而双波长比色则在敏感波长450nm和非敏感波长630nm各测定1次。敏感波上下的吸光度测定值为样本测定酶反应特异显色的吸光度与板孔上指纹、刮痕、灰尘等脏物所致的吸光度之和。非敏感波长下测定即改变波长至一定值,使得样本测定酶反应特异显色的吸光度值为零,此时测得的为脏物的吸光度值。最后酶标仪给出的数值为敏感波长与非敏感波长下的吸光度值的差。如在使用双波长比色时,仍设空白孔,就可能会造成前面提到的测定孔吸光度为负数的现象。由于ELISA测定中单个空白孔的非特异吸收上有一定程度的不确定性,故而在ELISA测定比色时最好使用双波长比色。本数据来源于百度地图,最终结果以百度地图最新数据为准。
酶是不参加反应的,首先要认识这一点。酶的作用是降低反应的活化能,即与底物结合后,能使底物更容易反应。那么酶是如何行成中间底物的呢?我们知道酶是有专一性的,可以比喻酶是开门的钥匙,锁是底物,拿钥匙去开门这一结合就产生了中间产物。(我已多一年多不学生物,科学需要严谨,请多多参考课本)
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反应底物浓度为什么不会影响反应速率
酶促反应速率跟底物浓度,pH,温度,酶的 浓度等因素有关,当底物浓度足够高时,酶的浓度相对较低,酶只能与一部分底物结合,导致速率有一个最大值.
可以考虑以下几种情况:

1,底物DNA上没有该限制酶的识别、切断位点。特别是一些经过重组等处理的DNA,碱基易发生缺失、变化等。

2,限制酶识别位点上的A或C被甲基化。部分限制酶对识别位点中的碱基是否被甲基化比较敏感,从而无法切断该位点。

3,底物不纯。如果底物DNA中有限制酶阻害物质,回影响限制酶的酶切作用。在此种情况下,底物DNA须重新进行精制。

4,限制酶的识别、切断位点在底物DNA的高级构造中所处的位置,对酶切反应也有一定的影响,例如,限制酶NaeI在切断pBR322DNA时,就有着非常难以切断的部位。

5,限制性内切酶本身无活性或低活性
不算,因为酶和ATP反应前后总量不变。当然,蛋白酶和RNA酶不算(大部份酶由蛋白质构成,少部分由RNA构成)
可以。比如化学本质为蛋白质的酶在蛋白酶的作用下发生水解,此时该酶就是被作用的底物了。