![Everest Biotech/Glucose Assay Kit II 200 Assays w/Reader Plates(2x)/120007200P/200 Assays w/Reader Plates(2x)](images/201711/1511911895837051362.jpg)
SampleTyple | Plasma,Serum,Cellculturesupernatant,otherbodyfluid | |||||||
Components | ||||||||
Method | Colorimetricmethodat570nm | |||||||
StandardCurve | ||||||||
Sensitivity | 4µM-200µM | |||||||
ReactionTime | 30minutes | |||||||
Applications | ForBIOLOGicalresearch: | |||||||
Storage | -80°C | |||||||
Notes | Materialneededbutnotsupplied Aplatereadercapableofmeasuringabsorbanceat570nm AdjustablePipettesandarepeatpipettor Distilledwater(milliQorHPLC-grade) ClearFlatbottom96-wellplatesifnotincludedinthekitpurchased | |||||||
Shipping | Icepacks |
ReagentPreparation Note:Allreagentsarefrozen.Werecommendyouspinsmallvialsbeforeopening. 1.GlucoseAssayBuffer(10x) Note:Pleasedon’tdodilutionintheprovidedGlucoseAssayBufferbottleitself. Thebottlecontains10mlof10xGlucoseAssayBuffer.Theassaybuffermustbeequilibratedtoroomtemperature.Pleasemakeappropriateamountof1xGlucoseAssayBufferfortheassay,forexample,bydiluting1mlof10xGlucoseAssayBufferwith9mlofdistilledwater.Prepareadditionaldilutedassaybufferifneeded.Storeat-80?C. 2.GlucoseStandard(10x) Note:Pleasedon’tdodilutionintheprovidedGlucoseStandardvialitself. Thevialcontains100µlof2mMGlucoseStandard.Thestandardmustbeequilibratedtoroomtemperaturebeforeuse.Dilute100µlof2mMGlucoseStandardwith900µlofdilutedGlucoseAssayBuffertopreparea200μMGlucoseStandard.1mlofdilutedGlucoseStandardisenoughformaking3standardcurvesifassayedinduplicate.Storeat-80?C. 3.AssayProbe Thevialcontains45μlofAssayProbe.Theassayprobemustbeequilibratedtoroomtemperaturebeforeuse.Itissufficientfor100wells.Protectfromlight.Storeat-80?C. 4.GlucoseEnzymeMix Thevialcontains70μlofGlucoseEnzymeMix.Theenzymemixmustbethawedonicebeforeuse.Itissufficientfor100wells.Storeat-80?C. | ||||||||
Protocol 1.SamplePreparation Blood(serum/plasma),urine,otherbodyfluidscanbemeasureddirectlybyaseriesofdilutionsofthesample(1/2;1/4;1/8;…)toensurethereADIngsarewithinthestandardcurverange.YoursamplescanbedilutedwithdH2OordilutedGlucoseAssayBuffer. Note: | ||||||||
2.StandardCurvePrepation Add50μl,40μl,30μl,20μl,10μl,5μl,1μl,and0μlofdilutedGlucoseStandardtoeachwell,thenadjustvolumeto50μl/wellwithdilutedGlucoseAssayBuffer. | ||||||||
3.ReactionSolutionPreparation 12µlGlucoseAssayEnzymeMix 8µlAssayProbe 1mlofReactionSolutionisenoughfor~20wells. PrepareappropriateamountofReactionSolutionforthenumberofassaystobeperformed. Note:PleasedonotkeepanyleftoverReactionSolutionasithastobemadefreshrightbeforeyourunassays.IfoldReactionSolutionisused,assayswillnotwork. | ||||||||
4.Performtheassay a.Mixthereactionsolutionwellandadd50μlofthereactionsolutiontoeachwellcontainingtheGlucosestandardsandtestsamples. | ||||||||
5.Calculation a.AveragetheOD570nmvaluesofreplicatewellsofeachGlucoseStandard,testsamples,andblank.Then,correctbackgroundbysubtractingthevaluederivedfromtheblankfromallsamplereadings. Glucose(μM)=[(Correctedabsorbance)-(y-intercept)]/Slope |
GlucoseAssayBuffer | GlucoseAssayEnzymeMix | |||||||
Components | CAS# | Components | CAS# | |||||
PotassiumPhosphateMonobasic | 7778-77-0 | PotassiumPhosphateMonobasic | 7778-77-0 | |||||
PotassiumPhosphateDibasic | 7758-11-4 | PotassiumPhosphateDibasic | 7758-11-4 | |||||
Water | 7732-18-5 | GlucoseOxidase | 9001-37-0 | |||||
GlucoseStandard | AssayProbe | |||||||
Components | CAS# | Components | CAS# | |||||
SodiumD-Glucose | 50-99-7 | DMSO | 67-68-5 | |||||
PotassiumPhosphateMonobasic | 7778-77-0 | |||||||
PotassiumPhosphateDibasic | 7758-11-4 | |||||||
Water | 7732-18-5 | |||||||
EyeProtection | Wearsafetygoggles |
SkinProtection | Wearprotectiveclothing |
HandProtection | Wearprotectivegloves |
Respiratoryprotection | WearNIOSH/MSHAapprovedrespirators |
9.PHYSICALANDCHEMICALPROPERTIES
9.1Informationonbasicphysicalandchemicalproperties
GlucoseAssayBuffer
Appearance | Liquid,colorless |
pH | 7.0 |
Meltingpoint | Nodataavailable |
Freezingpoint | Nodataavailable |
Boilingpoint | Nodataavailable |
Density | Nodataavailable |
Watersolubility | Soluble |
GlucoseStandard
Appearance | Liquid,colorless |
pH | 7.0 |
Meltingpoint | Nodataavailable |
Freezingpoint | Nodataavailable |
Boilingpoint | Nodataavailable |
Density | Nodataavailable |
Watersolubility | Soluble |
GlucoseAssayEnzymeMix
Appearance | Liquid,yellow |
pH | Nodataavailable |
Meltingpoint | Nodataavailable |
Freezingpoint | Nodataavailable |
Boilingpoint | Nodataavailable |
Density | Nodataavailable |
Watersolubility | Soluble |
AssayProbe
Appearance | Liquid,colorless |
pH | Nodataavailable |
Meltingpoint | Nodataavailable |
Freezingpoint | Nodataavailable |
Boilingpoint | Nodataavailable |
Density | Nodataavailable |
Watersolubility | Soluble |
9.2Othersafetyinformation
Nodataavailable.
10.STABILITYANDREACTIVITY
10.1Reactivity
Nodataavailable
10.2Chemicalstability
Stableunderrecommendedstorageconditions.
10.3Possibilityofhazardousreactions
Nodataavailable.
10.4Conditionstoavoid
Nodataavailable
10.5IncompatIBLematerials
Strongoxidizingagents
10.6Hazardousdecompositionproducts
Hazardousdecompositionproductsformedunderfireconditions:carbonoxides
11.TOXICOLOGICALINFORMATION
11.1Informationontoxicologicaleffects
Toxicologicaleffectsonthisproducthavenotbeenthoroughlystudied.
12.ECOLOGICALINFORMATION
12.1Toxicity
Avoidreleaseintoenvironment
12.2Persistenceanddegradability
Nodataavailable
12.3.Bioaccumulativepotential
Nodataavailable
12.4Mobilityinsoil
Nodataavailable
12.5ResultsofPBTandvPvBassessment
Nodataavailable
12.6Otheradverseeffects
Nodataavailable
13.DISPOSALINFORMATION
13.1Wastetreatmentmethods
Disposeinaccordancewithlocal,state,andfederalregulations.
14.TRANSPORTINFORMATION
DOT:
Propershippingname:none
Non-Hazardousfortransport:thissubstanceisconsideredtobenon-hazardousfortransport
IATA:
Propershippingname:none
Non-Hazardousfortransport:thissubstanceisconsideredtobenon-hazardousfortransport
ADR/RID
Propershippingname:none
Non-Hazardousfortransport:thissubstanceisconsideredtobenon-hazardousfortransport
15.REGULATORYINFORMATION
EURiskandSafetyphrases:
R36/37/38:irritatingtoeyes/respiratorysystem/skin
16.OTHERINFORMATION
Theinformationaboveisbelievedtobeaccurateandrepresentsthebestinformationcurrentlyavailabletous.However,wemakenowarrantyofmerchantabilityoranyotherwarranty,expressorimplied,withrespecttosuchinformation.EtonBioscienceInc.shallnotbeheldliableforanydamagesorotherconsequencesresultingfromhandlingorfromcontactwiththeaboveproduct.ebiomall.com
![公司介绍](/themes/default/images/goods_detail/img_introduction.png)
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试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势,2005年全球市场销售额超过200亿美元,且以15%左右的速度逐年增长.一方面是试剂盒的迅猛发展,而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显,试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善,没有相应的标准或质量评价政策.且其灵敏度,稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要,采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑.
同时,食品安全领域是当前问题最多、最受关注的领域,这个领域的检测包括了物理、化学、微生物及分子生物学基础理论,无论是按检测原理、用途还是其它分类方式,涉及食品安全检测项目的试剂盒的品种是最全最多的.因此,从该领域着手从事评价制度的研究,便于获得基础性数据结果,并由此推广至动植物检疫及其它领域.
随着H7N9禽流感疫情的不断发散,国家流感中心已经多次发放人感染H7N9禽流感检测试剂,覆盖了全国31个流感网络实验室,并表示,诊断试剂的广泛发放是实现关口前移,控制疫情传播、蔓延的重要手段.而一旦H7N9监测关口继续前移,主动监测范围扩大,病毒检测试剂的需求量将进一步加大.
可采用H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒(荧光PCR法)和H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法),定价分别为48人份/盒和48反应/盒,相比市场此前预期的100-200元之间的价格定位低了很多.在检验方法上,卫纪委提醒,前者需要配备全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)等必须设备及咽拭子样本,后者卫计委推荐采用达安基因生产的核酸提取试剂盒进行检验.
我用Promega公司的双荧光素酶检测试剂盒(E2920)检测到的firefly萤光素酶活性很低,只有4*10的3次方;海肾萤光素酶活性有10的6次方。
我用Ad293细胞做了转染,fireflyluciferase质粒:RanillaLuciferase质粒=0.1ug:0.025ug/一个孔(96孔板),共转染了二天,再进行双萤光素酶检测。
我想了解fireflyluciferase活性用promega的这个E2920-双萤光素酶试剂盒检测得到10的3次方,这种数值正常吗?
我做了3次重复实验,每次firefly萤光素酶活性很低,只有4*10的3次方;而海肾萤光素酶活性有10的6次方。
求指教?fireflyluciferase活性低?会是什么原因呢?
1、 配制JC-1染色工作液:
取适量JC-1 Stain (200×),按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1,剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×),混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml,其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照:
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1,进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞:
a. 取1~6×105细胞,重悬于0.5ml细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 4℃ 600g离心3~4min,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞:
注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,应先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 吸除上清,用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体:
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描,激发波长为485nm,发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为485nm时,可以在475~520nm范围内设置激发波长。另外,也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析:
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm,发射光设置为530nm;检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。
注意事项:
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用,但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后,才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×),否则导致JC-1很难充分溶解,严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100个样品;对于12孔中的样品,本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时,尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右,此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×,因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂,有一定毒性,请注意小心防护。
实验室要开展支原体检测,方法是PCR法,先要采购试剂盒,用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
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![品牌介绍](/data/brandlogo/1503964115017799856.jpg)