描述
qubit®(早期称为Quant-iT™)dsDNABR分析试剂盒(Qubit®dsDNABRAssayKit)专门设计用于在Qubit®2.0荧光仪(Q32866),但也可以在任何荧光计或荧光酶标仪中使用。该试剂盒对双链DNA(dsDNA)有高度的选择性,不会定量RNA,可以定量浓度为100pg/µl到1000ng/µl的样品。试剂盒提供了浓缩的分析试剂,稀释缓冲液和预制的DNA标准。您只需用提供的缓冲液稀释试剂,添加样品(体积在1µL到20µL范围内),然后使用Qubit®2.0荧光仪读取浓度。该试剂盒对于常见污染物,如盐,游离的核苷酸,溶剂,去污剂,蛋白质的耐受性极好。
注意:所有的Qubit®分析试剂盒同样适用于Qubit®1.0荧光仪。
Invitrogen创立于1987年,公司总部设于加利福尼亚州卡尔斯巴德市。我们为制药和生物技术公司以及学术研究和政府科研机构提供生命科学相关产品与服务。2006年Invitrogen公司(纳斯达克股票代码IVGN),年营业额达12亿美元。作为一家全球性的跨国公司,Invitrogen现有员工4,800余名,在全球超过70个国家和地区设有分支机构。我们为全球的科研工作者提供25,000余种产品和服务,支持疾病研究、新药研发和商业性生物生产。Invitrogen中国总公司,凭借丰富经验,集中人力建立了提供合成,测序及其它多种项目服务的实验生产基地,是唯一一个在同行业中引进6西格码(SixSigma)和精益(Lean)管理方法的公司,公司由有着丰富管理经验的黑带大师(MasterBlackBelt)指导,根据数据来不断优化生产流程,降低成本,提高质量,以及提高发货速度.我们有一个强大的集研发和生产于一体的梯队,队员构成中有归国博士,硕士和本科生。另外我们Invitrogen的美国,欧洲,日本的梯队与我们紧密联系,资源共享,共同传递高质量的产品,提供更新更全更快的技术和服务.全面细致的标准操作程序,严格的入职前培训和在职培训。使我们的产品成为成为您的首选品牌.因此我们相信以Invitrogen在全球的合成与测序业务技术力量为后盾,在我们杰出的技术团队的带领下,将会为您提供高质量、全方位和多角度的服务。
Invitrogen旗下包括Invitrogen、Gibco、MolecularProbes、Dynal、Biosource、Caltag、Zymed、Panvera、InforMax、BioReliance等众多行业顶尖品牌。为分子生物、疾病研究,药物研发和生物制品生产等提供全面的技术和服务。
Invitrogen的壮大历程:
2005
Dynal细胞分离与纯化用磁珠、细胞刺激、蛋白质研究、核酸研究和微生物学
Zymed病理学、癌症和细胞生物产品,一般免疫化学试剂
BioAsia引物合成及测序,合并后的公司称为上海英骏生物技术有限公司
2004
DRIDNA纯化产品和其它核酸
Protometrix蛋白质微阵列技术
BioReliance合同服务机构(CSO)假设测试,为全球生物技术和制药公司提供生物药品开发和生产服务
2003
SequiturRNA干扰技术(RNAi)
MolecularProbes为生物研究和药品开发提供分子分类方面的荧光技术
GeniconSciences超敏感信号产生与探测工具和方法
2002
PanVera生物化学、细胞检验和蛋白质收集
InforMax生物信息软件
2000
LifeTechnologies分子生物和GIBCO细胞培养试剂
Ethrog电泳完全附着系统
ResearchGenetics为基因药品开发研究提供cDNA克隆
1999
NOVEX预制电泳胶
ebiomall.com
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1、 配制JC-1染色工作液:
取适量JC-1 Stain (200×),按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1,剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×),混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml,其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照:
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1,进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞,CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同,需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞:
a. 取1~6×105细胞,重悬于0.5ml细胞培养液中,细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液,颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 4℃ 600g离心3~4min,沉淀细胞。弃上清,注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后,用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察,也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞:
注意:对于贴壁细胞,如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测,应先收集细胞,重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液,根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次,加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液,充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间,按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例,配制适量的JC-1 Buffer(1×),并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后, 吸除上清,用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液,培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体:
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10~100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测:混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描,激发波长为485nm,发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪,激发波长不能设置为485nm时,可以在475~520nm范围内设置激发波长。另外,也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察:方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析:
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm,发射光设置为530nm;检测JC-1聚合物时,可以把激发光设置为525nm,发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常,细胞的状态也比较正常。
注意事项:
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用,但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后,才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×),否则导致JC-1很难充分溶解,严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品,本试剂盒共可以检测100个样品;对于12孔中的样品,本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时,尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右,此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×,因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀,必须全部溶解后才能使用,为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂,有一定毒性,请注意小心防护。
实验室要开展支原体检测,方法是PCR法,先要采购试剂盒,用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定,它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质,为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年,英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。