| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 571/585 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | EnzymeDetection HorserADIshPeroxidase(HRP) |
| Related | ReactiveOxygenSpecies MicroplateReaders BiochemicalAssays |
| Spectrum | AdvancedSpectrumViewer |
1.PrepareELISAplate:
1.1 PrepareELISAmicroplate(includingappropriatecontrols):PerformallnecessaryELISApreparationsteps.
1.2 Makegoatanti-rabbitIgG-HRPconjugateworkingsolution:Add2µLofgoatanti-rabbitIgG-HRPconjugate(ComponentE)into10mLofPBSwith1%BSA(PBS-BSA,notincluded).
Notes1:10mLofgoatanti-rabbitIgG-HRPconjugateworkingsolutionisenoughfor1plate.Theconcentrationofthisgoatanti-rabbitIgG-HRPconjugateworkingsolutionisrecommendedasaninitialconcentrationtotry.
2:Theoptimalconcentrationforeachparticularapplicationmayneedtobedeterminedempirically.
1.3 WashtheELISAwellsthreetimeswithPBScontaining0.02%to0.05%Tween®20(PBS-Tween)anddrain.
1.4 Add100μLofthedilutedgoatanti-rabbitIgG-HRPconjugateworkingsolution(fromStep1.2)intoeachwell(fromStep1.3)
1.5 Incubateatroomtemperaturefor30minutes.DrainofftheHRPconjugate.
1.6 WashthewellsthreetimeswithPBS-Tweenanddrain.
2.Preparestocksolutions:
2.1 200XAmplite™Redperoxidasesubstratestocksolution:Add250µLofDMSO(ComponentD)intothevialofAmplite™RedPeroxidaseSubstrate(ComponentA).The200XAmplite™Redperoxidasesubstratestocksolutionshouldbeusedpromptly.Anyremainingsolutionshouldbealiquotedandrefrozenat-20oC.
Note:50µLofthe200XAmplite™Redperoxidasesubstratestocksolutionisenoughfor1plate.Aliquotandstoreunused200XAmplite™Redperoxidasesubstratestocksolutionat‑20oC.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
2.2 20mMH2O2stocksolution:Add22.7µLof3%H2O2(0.88M,ComponentB)into977µLofAssayBuffer(ComponentC).
Note:ThedilutedH2O2stocksolutionisnotstable.Theunusedportionshouldbediscarded.
3.Prepareperoxidasereactionmixture:
PrepareperoxidasereactionmixtureaccordingtoTable1andkeepfromlight.
Table1.Proxidasereactionmixtureforone96-wellplate(1X)
Components | Volume |
Amplite™Redperoxidasesubstratestocksolution(200X,fromStep2.1) | 50µL |
20mMH2O2stocksolution(fromStep2.2) | 100µL |
Assaybuffer(ComponentC) | 9.85mL |
Totalvolume | 10mL |
4.RunperoxidaseassayinELISAplate:
4.1 Add100μLofperoxidasereactionmixture(fromStep3)intoeachdrainedmicroplatewellcontainingthesamplesandcontrols(fromStep1.6).
4.2 Incubatethereactionatroomtemperaturefor30minutesorlonger,protectedfromlight.
4.3 Monitorthefluorescenceincreasewithafluorescenceplatereaderatexcitation530-570nm(optimalat540nm)andemission590-600nm.
Note:Theplatecanalsobereadbyanabsorbancemicroplatereaderatthewavelengthof576±5nm.Theabsorptiondetectionhaslowersensitivitycomparedtofluorescencereading.
| References&Citations |  CitationExplorer |
AssessmentofTofacitinibandRuxolitinibandtheirAntiInflammatoryEffectsonMyeloperoxidase
Authors:AmberMilton
Journal:(2017)
PatternedPhotonicNitrocelluloseforPseudo-PaperELISA
Authors:JunjieChi,BingbingGao,MiSun,FenglingZhang,EnbenSu,HongLiu,ZhongzeGu
Journal:AnalyticalChemistry(2017)
SpinalCordInflammation:MolecularImagingafterThoracicAorticIschemiaReperfusionInjury
Authors:HassanAlbadawi,JohnWChen,RahmiOklu,YueWu,GregoryWojtkiewicz,BenjaminPulli,JohnDMilner,RichardPCambria,MichaelTWatkins
Journal:Radiology(2016):152222
MyeloperoxidaseNuclearImagingforEpileptogenesis
Authors:YinianZhang,DanielPSeeburg,BenjaminPulli,GregoryRWojtkiewicz,LionelBure,WendyAtkinson,StefanSchob,YoshikoIwamoto,MuhammadAli,WeiZhang
Journal:Radiology(2015):822--830
Myeloperoxidase--Hepatocyte--StellateCellCrossTalkPromotesHepatocyteInjuryandFibrosisinExperimentalNonalcoholicSteatohepatitis
Authors:BenjaminPulli,MuhammadAli,YoshikoIwamoto,MatthiasWGZeller,StefanSchob,JennyJLinnoila,JohnWChen
Journal:Antioxidants&redoxsignaling(2015):1255--1269
Orderedcleavageofmyeloperoxidaseesterbondsreleasesactivesitehemeleadingtoinactivationofmyeloperoxidasebybenzoicacidhydrazideanalogs
Authors:JianshengHuang,ForrestSmith,PeterPanizzi
Journal:Archivesofbiochemistryandbiophysics(2014):74--85
Raisingtheshields:PCRinthepresenceofmetallicsurfacesprotectedbytailor-madecoatings
Authors:FrankDScherag,ThomasBrandstetter,JürgenRühe
Journal:ColloidsandSurfacesB:Biointerfaces(2014):576--582
Measuringmyeloperoxidaseactivityinbiologicalsamples
Authors:BenjaminPulli,MuhammadAli,RezaForghani,StefanSchob,KevinLCHsieh,GregoryWojtkiewicz,JennyJLinnoila,JohnWChen
Journal:PLoSOne(2013):e67976
Micro-volumewall-lessimmunoassaysusingpatternedplanarplates
Authors:KatherineRKozak,JianyongWang,MelvinLye,RashiTakkar,NamyongKim,HyunjaeLee,NooLiJeon,KedanLin,CrystalZhang,WaiLeeTWong
Journal:LabonaChip(2013):1342--1350
Distinguishinginflammationfromtumorandperitumoraledemabymyeloperoxidasemagneticresonanceimaging
Authors:AnneKleijn,JohnWChen,JasonSBuhrman,GregoryRWojtkiewicz,YoshikoIwamoto,MartineLLamfers,AnatOStemmer-Rachamimov,SamuelDRabkin,RalphWeissleder,RobertLMartuza
Journal:ClinicalCancerResearch(2011):4484--4493
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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1、 配制JC-1染色工作液：
取适量JC-1 Stain (200×)，按照每50μl JC-1 Stain (200×)加入8ml ddH2O的比例稀释JC-1，剧烈Vortex充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2ml JC-1 Buffer(5×)，混匀后即为JC-1染色工作液。6孔板每孔所需JC-1染色工作液的量为1ml，其它培养器皿的JC-1染色工作液的用量以此类推。
2、 设置阳性对照：
推荐CCCP(10mM)加入到细胞培养液中处理细胞。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于特定的细胞，CCCP的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资料确定。
3、对于悬浮细胞：
a. 取1～6×105细胞，重悬于0.5ml细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
b. 加入0.5ml JC-1染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入4ml蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 4℃ 600g离心3～4min，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
f. 再用JC-1 Buffer(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4、对于贴壁细胞：
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，应先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。
a.吸除6孔板培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS或其它适当溶液洗涤细胞一次，加入1ml细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
b. 加入1ml JC-1染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育。
c. 在孵育期间，按照每1ml JC-1 Buffer(5×)加入蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 Buffer(1×)，并放置于冰浴。
d. 37℃孵育结束后， 吸除上清，用JC-1 Buffer(1×)洗涤2次。
e. 加入2ml细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
f. 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5、对于纯化的线粒体：
a. 把配制好的JC-1染色工作液再用JC-1 Buffer(1×)稀释5倍。
b. 0.9ml 5倍稀释的JC-1染色工作液中加入0.1ml总蛋白量为10～100μg纯化的线粒体。
c. 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描，激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm时，可以在475～520nm范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6中的波长设置进行荧光检测。
d. 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6、荧光观测和结果分析：
检测JC-1单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；检测JC-1聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
注意事项：
1、 JC-1 Stain(200×)应完全溶解混匀后使用，但应避免反复冻融。必须先把JC-1 Stain(200×)用ddH2O充分溶解混匀后，才可加入JC-1 Buffer(1×)。不可先配制JC-1 Buffer(1×)再加入JC-1 Stain(200×)，否则导致JC-1很难充分溶解，严重影响后续的检测。
2、 对于6孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔中的样品，本试剂盒共可以检测200个样品。
3、 装载完JC-1后用JC-1 Buffer(1×)洗涤时，尽量使JC-1 Buffer(1×)保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4、 勿把JC-1 Buffer(5×)全部配制成1×，因为操作过程中需直接使用JC-1 Buffer(5×)。
5、 如JC-1 Buffer(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
6、 CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有一定毒性，请注意小心防护。
牛胰岛素,是一种多肽
在1965年9月17日我国完成了结晶牛胰岛素的全合成。经过严格鉴定，它的结构、生物活力、物理化学性质、结晶形状都和天然的牛胰岛素完全一样。这是世界上第一个人工合成的蛋白质，为人类认识生命、揭开生命奥秘迈出了可喜的一大步。这项成果获1982年中国自然科学一等奖。
1953年，英国人F. SangerSanger由于测定了牛胰岛素的一级结构而获得1958年诺贝尔化学奖。
百奥森18分钟霉菌毒素检测试剂盒，有需要的可以了解下！多种规格型号可供选择
产品名称
黄曲霉毒素B1(AFB1）酶免检测试剂盒
黄曲霉毒素B1(AFB1）酶免检测试剂盒
赭曲霉毒素A（OTA）酶免检测试剂盒
玉米赤霉烯酮（ZEN）酶免检测试剂盒
玉米赤霉烯酮（ZEN）酶免检测试剂盒
呕吐毒素（DON）酶免检测试剂盒
黄曲霉毒素M1（AFM1）酶免检测试剂盒
总黄曲霉毒素(AFT）酶免检测试剂盒
T-2毒素（T-2）酶免检测试剂盒
伏马毒素B1（FB1）酶免检测试剂盒
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我用Promega公司的双荧光素酶检测试剂盒（E2920）检测到的firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；海肾萤光素酶活性有10的6次方。
我用Ad293细胞做了转染，fireflyluciferase质粒：RanillaLuciferase质粒=0.1ug：0.025ug/一个孔（96孔板），共转染了二天，再进行双萤光素酶检测。
我想了解fireflyluciferase活性用promega的这个E2920-双萤光素酶试剂盒检测得到10的3次方，这种数值正常吗？
我做了3次重复实验，每次firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；而海肾萤光素酶活性有10的6次方。
求指教？fireflyluciferase活性低？会是什么原因呢？
实验室要开展支原体检测，方法是PCR法，先要采购试剂盒，用过的同学给推荐一下好用的品牌呗
试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势,2005年全球市场销售额超过200亿美元,且以15%左右的速度逐年增长.一方面是试剂盒的迅猛发展,而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显,试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善,没有相应的标准或质量评价政策.且其灵敏度,稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要,采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑.
同时,食品安全领域是当前问题最多、最受关注的领域,这个领域的检测包括了物理、化学、微生物及分子生物学基础理论,无论是按检测原理、用途还是其它分类方式,涉及食品安全检测项目的试剂盒的品种是最全最多的.因此,从该领域着手从事评价制度的研究,便于获得基础性数据结果,并由此推广至动植物检疫及其它领域.
随着H7N9禽流感疫情的不断发散,国家流感中心已经多次发放人感染H7N9禽流感检测试剂,覆盖了全国31个流感网络实验室,并表示,诊断试剂的广泛发放是实现关口前移,控制疫情传播、蔓延的重要手段.而一旦H7N9监测关口继续前移,主动监测范围扩大,病毒检测试剂的需求量将进一步加大.
可采用H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）和H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）,定价分别为48人份/盒和48反应/盒,相比市场此前预期的100-200元之间的价格定位低了很多.在检验方法上,卫纪委提醒,前者需要配备全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)等必须设备及咽拭子样本,后者卫计委推荐采用达安基因生产的核酸提取试剂盒进行检验.
