| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 492/520 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | F/D/L |
| Category | NeuroBIOLOGy ReactiveOxygenSpecies |
| Related | CellSignaling CellFunctionalAnalysis BiochemicalAssays |
1.Preparecells:
1.1 Foradherentcells:Platecellsovernightingrowthmediumat10,000to40,000cells/well/100µLfora96-wellplateor2,500to10,000cells/well/25µLfora384-wellplate.
1.2 Fornon-adherentcells:CentrifugethecellsfromtheculturemediumandthensUSPendthecellpelletsinculturemediumat50,000-100,000cells/well/100µLfora96-wellpoly-Dlysineplateor10,000-25,000cells/well/25µLfora384-wellpoly-Dlysineplate.Centrifugetheplateat800rpmfor2minuteswithbrakeoffpriortotheexperiment.
Note:Eachcelllineshouldbeevaluatedonanindividualbasistodeterminetheoptimalcelldensity.
2.PrepareAmplite™ROSGreenstainsolution:
2.1 PrepareAmplite™ROSGreenstocksolution(500X):Add40µLofDMSO(ComponentC)intothevialofAmplite™ROSGreen(ComponentA),andmixthemwell.
Note:20µLofAmplite™ROSGreenstocksolutionisenoughfor1plate.Un-usedreconstitutedAmplite™ROSGreenstocksolutioncanbealiquotedandstoredat<-20°Cformorethanonemonthifthetubesaresealedtightlyandprotectedfromlight.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.
2.2 PrepareAmplite™ROSGreenworkingsolution:Add20µLof500XDMSOreconstitutedAmplite™ROSGreenstocksolution(fromStep2.1)into10mLofAssayBuffer(ComponentB),andmixthemwell.Thisworkingsolutionisstableforatleast2hoursatroomtemperature.
3.Stainthecells:
3.1 Add100µL/well(96-wellplate)or25µL/well(384-wellplate)ofAmplite™ROSGreenworkingsolution(fromStep2.2)intothecellplate.
3.2 Incubatethecellsina5%CO2,37°Cincubatorforonehour.
4.RunROSAssay:
4.1 Treatcellsbyadding20μL/wellof11Xtestcompounds(96-wellplate)or10μL/wellof6Xtestcompounds(384-wellplate)inthedesiredbuffer(suchasPBSorHHBS).Forcontrolwells(untreatedcells),addthecorrespondingamountofcompoundbuffer.
4.2 Incubatethecellplateatroomtemperatureorina5%CO2,37°C,incubatorforatleast15minutesoradesiredperiodoftime(30minutesforHelacellstreatedwith1mMH2O2)toinduceROS.
4.3 MonitorthefluorescenceincreaseatEx/Em=490/525nmwithbottomreadmode.
| References&Citations |  CitationExplorer |
Anti-proliferationeffectofbluelight-emittingdiodesagainstantibiotic-resistantHelicobacterpylori
Authors:JianweiMa,TakahiroHiratsuka,TsuyoshiEtoh,JunkoAkada,HajimeFujishima,NorioShiraishi,YoshioYamaoka,MasafumiInomata
Journal:JournalofGastroenterologyandHepatology(2017)
NotoginsenosideR1attenuateshighglucose-inducedendothelialdamageinratretinalcapillaryendothelialcellsbymodulatingtheintracellularredoxstate
Authors:ChunlanFan,YuanQiao,MinkeTang
Journal:DrugDesign,DevelopmentandTherapy(2017):3343
Goodhydrationandcell-biologicalperformancesofsuperparamagneticcalciumphosphatecementwithconcentration-dependentosteogenesisandangiogenesisinducedbyferriciron
Authors:JZhang,HSShi,JQLiu,TYu,ZHShen,JDYe
Journal:JournalofMaterialsChemistryB(2015):8782--8795
TopiramateProtectsPericytesfromGlucotoxicity:RoleforMitochondrialCAVAinCerebromicrovascularDiseaseinDiabetes
Authors:PingPatrick,TulinOPrice,AnaLDiogo,NaderSheibani,WilliamABanks,GulNShah
Journal:Journalofendocrinologyanddiabetes(2015)
Down-regulatedperoxisomeproliferator-activatedreceptorγ(PPARγ)inlungepithelialcellspromotesaPPARγagoNIST-reversibleproinflammatoryphenotypeinchronicobstructivepulmonarydisease(COPD)
Authors:SowmyaPLakshmi,AravindTReddy,YingzeZhang,FrankCSciurba,RamaKMallampalli,StevenRDuncan,RajuCReddy
Journal:JournalofBiologicalChemistry(2014):6383--6393
Superoxidedismutaseasatargetofclioquinol-inducedneurotoxicity
Authors:KazuyukiKawamura,YukikoKuroda,MasakoSogo,MikiFujimoto,ToshioInui,TakaoMitsui
Journal:Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications(2014):181--185
Xanthineoxidaseinhibitionbyfebuxostatattenuatesexperimentalatherosclerosisinmice
Authors:JohjiNomura,NathalieBusso,AnnetteIves,ChiekoMatsui,SyunsukeTsujimoto,TakashiShirakura,MizuhoTamura,TsunefumiKobayashi,AlexanderSo,YoshihiroYamanaka
Journal:Scientificreports(2014):4554
Highglucose-inducedmitochondrialrespirationandreactiveoxygenspeciesinmousecerebralpericytesisreversedbypharmacologicalinhibitionofmitochondrialcarbonicanhydrases:implicationsforcerebralmicrovasculardiseaseindiabetes
Authors:GulNShah,YoichiMorofuji,WilliamABanks,TulinOPrice
Journal:Biochemicalandbiophysicalresearchcommunications(2013):354--358
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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我用Promega公司的双荧光素酶检测试剂盒（E2920）检测到的firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；海肾萤光素酶活性有10的6次方。
我用Ad293细胞做了转染，fireflyluciferase质粒：RanillaLuciferase质粒=0.1ug：0.025ug/一个孔（96孔板），共转染了二天，再进行双萤光素酶检测。
我想了解fireflyluciferase活性用promega的这个E2920-双萤光素酶试剂盒检测得到10的3次方，这种数值正常吗？
我做了3次重复实验，每次firefly萤光素酶活性很低，只有4*10的3次方；而海肾萤光素酶活性有10的6次方。
求指教？fireflyluciferase活性低？会是什么原因呢？
试剂盒在全球市场上的研发与销售呈快速上升趋势,2005年全球市场销售额超过200亿美元,且以15%左右的速度逐年增长.一方面是试剂盒的迅猛发展,而另一方面试剂盒市场良莠不齐的现象愈加明显,试剂盒的生产、销售及认证认可体制尚不完善,没有相应的标准或质量评价政策.且其灵敏度,稳定性及假阴/阳性控制尚不能满足检测需要,采用试剂盒进行检测的公信度受到质疑.
同时,食品安全领域是当前问题最多、最受关注的领域,这个领域的检测包括了物理、化学、微生物及分子生物学基础理论,无论是按检测原理、用途还是其它分类方式,涉及食品安全检测项目的试剂盒的品种是最全最多的.因此,从该领域着手从事评价制度的研究,便于获得基础性数据结果,并由此推广至动植物检疫及其它领域.
随着H7N9禽流感疫情的不断发散,国家流感中心已经多次发放人感染H7N9禽流感检测试剂,覆盖了全国31个流感网络实验室,并表示,诊断试剂的广泛发放是实现关口前移,控制疫情传播、蔓延的重要手段.而一旦H7N9监测关口继续前移,主动监测范围扩大,病毒检测试剂的需求量将进一步加大.
可采用H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）和H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）,定价分别为48人份/盒和48反应/盒,相比市场此前预期的100-200元之间的价格定位低了很多.在检验方法上,卫纪委提醒,前者需要配备全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法)等必须设备及咽拭子样本,后者卫计委推荐采用达安基因生产的核酸提取试剂盒进行检验.
ldh试剂盒指乳酸脱氢酶检测试剂盒，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。
ctl毒性杀伤检测试剂盒是基于LDH在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤。
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