CNAS CL36中关于试剂比对内容求助
2021-07-22
问题描述:
相关疾病:癫痫请各位老师分享一下,对于红框中的验证要求,你们实验室是怎么验证的呢?对于试剂的批间差异验证,我们是通过留样再测来比对的,想问一下,可不可以使用核酸提取液提取后的DNA冰冻保存好,然后需要比对的时候再拿......
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HaiboTao
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聊聊我们科室的验证方案,供您参考。核酸提取率验证:1、选用试剂盒自带的阳性质控品作为参考品(一般为合成质粒,纯度较高);2、准备10只干净的1.5ml EP管,每管分别加入100ul阴性血清和5ul阳性质控品混匀作为待测样本;3、按试剂盒说明书描述的提取方法进行核酸提取,备用;4、取24只PCR反应管,A组10管分别直接加入阳性质控品5ul,B组10管分别加入前面提取好的核酸5ul,另外4管为标准品;5、按试剂盒说明书上的反应条件进行PCR反应;6、提取效率分析:A、B两组10管定量检测值分别计算出算术平均值(A、B) 核酸提取效率=B*4/A ×100%核酸扩增效率应该比较简单了,一般荧光定量PCR仪都会自动计算扩增效率的,您只需要关注一下就好了,也可以将自己计算。对于试剂批间差异和关键耗材抑制物等验证在附录A6里都有说明,按要求操作就可以了。其实试剂验证还是很麻烦的,也挺浪费的,最好还是跟试剂供应商达成协议:试剂批号不要经常更换,一年之内最好不要超过3个批号。另外,整个验证过程最好从头开始,提取的核酸冻存起来也是会降解的。毕竟做这些都是为了保证质量,不是单纯为了应付上级检查的。(仅供参考,希望可以帮到您。。)
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答案依旧
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展开引用HaiboTao聊聊我们科室的验证方案,供您参考。核酸提取率验证:1、选用试剂盒自带的阳性质控品作为参考品(一般为合成质粒,纯度较高);2、准备10只干净的1.5mlEP管,每管分别加入100ul阴性血清和5ul阳性质控品混匀作为待测样本;3、按试剂盒说明书描述的提取方法进行核酸提取,备用;4、取24只PCR反应管,A组10管分别直接加入阳性质控品5ul,B组10管分别加入前面提取好的核酸5ul,另外4管为标准品;5、按试剂盒说明书上的反应条件进行PCR反应;6、提取效率分析:A、B两组10管定量检测值分别计算出算术平均值(A、B)核酸提取效率=B*4/A×100%核酸扩增效率应该比较简单了,一般荧光定量PCR仪都会自动计算扩增效率的,您只需要关注一下就好了,也可以将自己计算。对于试剂批间差异和关键耗材抑制物等验证在附录A6里都有说明,按要求操作就可以了。其实试剂验证还是很麻烦的,也挺浪费的,最好还是跟试剂供应商达成协议:试剂批号不要经常更换,一年之内最好不要超过3个批号。另外,整个验证过程最好从头开始,提取的核酸冻存起来也是会降解的。毕竟做这些都是为了保证质量,不是单纯为了应付上级检查的。(仅供参考,希望可以帮到您。。)......谢谢老师的回复。从您回复的内容中有几个疑问还需您烦请解答:1、第2条中,没理解为什么要加入100ul阴性血清?2、核酸提取效率验证是不是只为了验证核酸提取液的试剂性能,而跟PCR反应试剂和仪器的扩增无关?3、核酸提取效率的公式没看懂?提取效率的计算不是应该要知道里面的实际总核酸量吗,然后根据实际提取的核酸量除以实际总核酸量得出核酸提取效率。好比一堆黄金矿石里实际有2斤黄金,方法一从这堆矿石能提取到1斤黄金,则方法一的黄金提取效率=1斤/2斤=50%。方法2从这堆矿石中能提取到2斤,则方法2的黄金提取效率=2斤/2斤=100%。不知道我这个理解是不是有误?4、试剂批间验证我们使用留样再测方法,我想问一下没有经过核酸提起的样本中的核酸与提取后的核酸比较,那个保存起来更稳定呢?如果提取后的核酸保存更稳定,不确定因素则较没提起核酸的样本更小,使用提取后的核酸来验证试剂的批间差不是更好吗?说的有点多。烦请解答一下,谢谢。
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