检测某种细胞中的同一家族转录因子不同亚型的表达情况，能不能做western呀？

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2017-03-22

问题描述：

某种转录因子有四种不同的亚型（N1N2N3N4），我想检测它们在某种细胞内的表达情况，能不能提取这种细胞的蛋白，然后跑western，通过敷育四种对应的抗体最后来确认哪种亚型表达得多，哪种亚型表达得少呀？我做了三次western，结果在对应的分子量区域都没有呈现条带出来！有前辈说这样做是无意义的，因为细胞可能对不同抗体的敏感性不同，所以跑western时用一种样本分别敷四种抗体的话是没有可比性的。真的是这样吗？我看文献里也有人做不同蛋白亚型在组织中的表达，他们能做出来条带。求各路大神指点啊！（抱拳）

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gqy2298462

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春困秋乏夏打盹

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这个用WB感觉不行，有没有专门的试剂盒可以检测亚型？不知道ELISA或者流式能不能检测？ELISA一般是检测分泌性蛋白，流式检测细胞膜蛋白，你这个是细胞内的，不知道破膜行不行？

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我是小木瓜

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春困秋乏夏打盹这个用WB感觉不行，有没有专门的试剂盒可以检测亚型？不知道ELISA或者流式能不能检测？ELISA一般是检测分泌性蛋白，流式检测细胞膜蛋白，你这个是细胞内的，不知道破膜行不行？Elisa和流式应该不行，我的这种蛋白在细胞静息时位于胞浆，细胞被激活时转运进核。我是用ripa加pmsf裂解的，提取的应该是细胞总蛋白，这样做wb不行的吗

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