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4adi
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Rat Primary Antibody (A+G+M) detection and titration and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient for 500-1000 tests)

FormELISA Kit for the detection of Rat Antibodies in serum, 75 min; Qualitative, Direct Antigen based assay
KitContents1.The kit contain one of the following secondary antibody-HRPconjugate stock, 150 ul (dilute 1:2K-1:10K before use)mouse (#40321), rat (#50321), rabbit (#20321), goat (#30321), sheep (#30326), human (#10321), G. pig (#50326), monkey (#70021), chicken (#60321), hamster (#80321), bovine (#80521), pig (#90321), turkey (#80187-C), ferret (#80188-C)2.Coating Buffer (10X), 25 ml800503.Blocking Buffer (Milk-based) 25 ml (10X)800624.Sample/Conjugate Diluent (10 X); 25 ml800705.Wash buffer concentrate (100X), 25 ml800816.Ready-to-Use TMB Substrate Soln, 100 ml800917.Stop Solution for TMB, 10X (10 ml)801008.Complete Instruction ManualM-80185
MSDSTMB (substrate), H2SO4 (1% in a buffered stop solution), and Prolcin-300 (0.1% v/v in standards, sample diluent and HRP-conjugates
Product TypeELISA Kit
SamplesSerum. Plasma, Culture medium and other fluids may be adapted
SpCrossreactivityThis ELISA kit is Designed for rat serum. Similar antibody detection ELISA kits are available for other species.
SpeciesReactivityRat
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蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 查看更多>
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通过前期的早期初筛,经过生物信息学分析,会筛选到具有统计学意义的一部分具有表达差异的蛋白。这些蛋白需要经过进一步的优化,寻找到与疾病或某些通路有关的具有表达差异的蛋白,进一步缩小蛋白范围,这时就需要使用结果更为准确的蛋白定量或鉴定工具。经过优化后,需要对得到的更小范围生物标志物进行大样本量的验证,最终确定哪些生物标志物可以用于疾病 查看更多>
ImmunoWay生物的使命是用更好的产品和服务来帮助世界各地的生命科学的研究者,简化并加速他们的研究。专注于开发出创新的和可靠的免疫学和细胞学产品。ImmunoWay生物是开发高品质的与癌症、细胞凋亡、细胞生长和信号转导相关的ELISA试剂盒,细胞凋亡检测试剂盒,细胞代谢检测试剂盒,抗体,抗体/蛋白芯片的先驱。公司目前有八千多种抗体,其中信号传导相关的抗体1200 查看更多>
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蛋白质免疫印迹(Western Blot )可以:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 查看更多>
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请问一下,我买了一盒碧云天的细胞膜蛋白提取试剂盒,想提取后进行WB检测。但是遇到了两个问题:

1、六孔板中的贴壁细胞需要RIPA裂解,煮沸后,再进行膜蛋白的提取吗?

2、WB上样前,需要加入loADIngbuffer吗?

谢谢各位大神~~

RT,本人打算检测某细胞株的抗凋亡能力,经文献查询应该是内源性细胞凋亡通路,所以我打算检测一下caspase9,caspase3/7,以及cleavedPARP
现在问题来了,文献中有的人是砸的western,有的是用的caspase酶活试剂盒(caspase9/3/7activitykit),我现在不知道应该选择哪种方式了......western嘛就是实验条件比较成熟,但是涉及一大堆什么totalcaspase,cleavedcaspase之类的东东;酶活试剂盒没用过,可能得慢慢摸条件....就价格来讲,两种方法花费差不多
请教各位做信号通路的大神,给我点建议吧,谢谢!
电泳液和转膜液都可重复利用3次左右
考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可,重复3次后要染30分钟。
一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.
OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响,例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证,得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h,超过12h产品性能则会下降。OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外,还主要有以下优点:1、适用于RealTimePCR反应,可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中,预先混有SybrGreen,PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可,操作方便快捷。3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase,可以维持更多的循环数,提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测,检测范围fM-nM。4、反应的Buffer更适合,使反应的基线更水平,无荧光污染信号。使线性期更陡峭,避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。5、SybrGreen更耐高温更足量,确保只要扩增反应在进行,目的DNA双链在增加,就有线性强度的荧光产生。6、dNTPs更足量,确保反应有更高的平台期荧光信号。7、Mg2+浓度更适合,确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成,提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。8、更高的仪器适配性,SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发,产生明亮的荧光信号,有利于仪器对信号的捕捉和处理。我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别:ROC公司的产品没有熔解温度,或者熔解温度太高。但是ROC公司的产品Ct值出现略早,这是因为ROC公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物的结合较快和较松散,但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了,类似于温水煮青蛙不温不火的;这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶,是一种分子量较大的DNA聚合酶,这种酶与模板和引物结合比较慢,但是慢工出细活,这种酶的特异性较好,一旦激活便呈现爆发式的扩增,类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是ROC公司不可比拟的,线性范围和斜率也是ROC公司不可比拟的。详见下图:向左转|向右转
需要根据具体情况进行具体分析,推荐从以下角度进行分析:对细胞表达目的蛋白的时间进行梯度设计,分别取样然后做SDS-PAGEWB分析;参考实验室经验数据;尝试采用磁珠IP试剂盒产品(义翘有相关产品)进行小量样品的快速纯化;…
买了南京凯基的膜蛋白和浆蛋白提取试剂盒,浆蛋白有条带,可是膜蛋白跑了很久没跑出过条带。。。
之前是担心所需组织量不够(要求是200-300mg,我的组织只有20mg左右)才跑不出来,后来换用大鼠心脏测试,组织量绝对够。。。而且在跑western之前进行了说明书上的蛋白浓缩步骤,可是在加loADIngbuffer之后,蛋白沉淀怎么都溶解不掉~说明书也注明了如果有沉淀可以取上清继续上样,可是每次上样感觉样品往上浮,只有部分样品往孔里沉,而且跑出来什么都没有,连内参都没有。用的是β-actin的内参。。
western之前浓缩步骤如下:
1、取所得提取物,每100ul膜蛋白加入约300ul的溶解buffer和约100ul三氯乙酸(TCA)试剂,混匀后置冰上20-30min后,13000rpm,离心15min,尽可能去除上清。
2、沉淀加入1ml丙酮,室温静置10min后,13000rpm离心15min。
3、弃上清,沉淀真空旋干或置冰上干燥10min(敞开离心管盖),按适当体积比加入loadingbuffer(使用前没100ulloadingbuffer加入2-5ulβ-巯基乙醇)溶解,彻底分散(枪头反复吹吸或剧烈涡旋),煮沸5min。【注:加入loadingbuffer后如有部分难容物,可取上清继续上样。】
转染后提蛋白,提蛋白后跑wb,inhibitor的趋势不管怎么调整上样量,都是相反的?请问接下来该怎么做?
α-平滑肌肌动蛋白是23kD。
  1、如果是提取的总蛋白,然后做WB,用β-actin或者GAPDH做内参肯定是没有问题的,这是公认的东西。
  2、如果用膜蛋白提取试剂盒提取蛋白,再用β-actin作为内参似乎不妥,因为理论上来讲β-actin在膜上是不表达的。WB能做出β-actin来是因为膜蛋白提取时把胞质蛋白也提出来了。然而,如果我们试验目的是用药物处理细胞,比较处理前后某种膜蛋白的表达情况,此时用膜蛋白提取试剂盒提取膜蛋白后再用β-actin做内参似乎就不妥了,因为你根本不知道药物处理前后混杂了多少的胞质蛋白进来。如果没有胞质蛋白混进去的话,β-actin就是检测不到的。
博凌科为 高纯质粒小量制备试剂盒
原理简介:
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐,低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐,高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

注意事项:
◆ 第一次使用时,将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100ug/ml)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的质粒可能会有混杂有微量RNA残留, 这时可在溶液P1中补加RNase A即可。
◆ 第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入45ml无水乙醇,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
◆ 温度低时溶液P2中SDS可能会出现浑浊或者析出沉淀,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
◆ 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

试剂盒特点:
◆ 产量高---一次提取高达30ug以上的质粒。
◆ 纯度高---OD260/OD280一般为1.80~1.85本试剂盒提取的质粒纯度好,能充分保证测序所需要的读长(用于ABI3730测序一般可达1000bp有效读长)。
◆ 快速,方便,不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
提示
BIOTEKE的质粒提取试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取,同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌外被一层较厚的细胞壁,会严重阻碍细菌细胞的裂解,因此必须在裂解细胞前破除,方法如下:
收集适量的菌体,加入250ul溶液P2,充分悬浮菌液,加入溶菌酶使其终浓度在10-20mg/ml左右在37℃处理30分钟左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌主和具体实验条件进行调整。
尿素,又称碳酰胺(carbamide),是由碳、氧、氨基组成的有机化合物,是一种白色晶体。最简单的有机化合物之一,是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物。也是目前含氮量最高的氮肥。作为一种中性肥料,尿素适用于各种土壤和植物。它易保存,使用方便,对土壤的破坏作用小,是目前使用量较大的一种化学氮肥。工业上用氨气和二氧化碳在一定条件下合成尿素。尿素可与酸作用生成盐。有水解作用。在高温下可进行缩合反应,生成缩二脲、缩三脲和三聚氰酸。加热至160℃分解,产生氨气同时变为异氰酸。因为在人尿中含有这种物质,所以
取名尿素。尿素含氮46%,是固体氮肥中含氮量最高的。尿素在酸、碱、酶作用下(酸、碱需加热)能水解生成氨和二氧化碳。希望我能帮助你解疑释惑。
这个膜的两面是不一样的。一面粗糙,一面光滑吧。如果这个算正反面的话,那么就是有正反面的。但是对于WB来说在转膜前是没有正反面之分的。你用粗糙的面贴着胶转膜和光滑的面贴着胶转膜,蛋白都能转到膜上去的。不会因为你膜贴反了而蛋白转膜不成功啥的。
转膜后就要区分与胶接触的一面与另一面了。话说楼主好奇的话可以跑蛋白的试试看哈。比如目的蛋白的胶用光滑面贴着胶,内参蛋白用粗糙面贴着胶一起转膜试试转膜结果看看呢。
timp可以做elisa,因为有专门的elisa试剂盒是用于检测timp,所以是可以用elisa方法进行检测的!
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