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| Amount : | Non Profit |
The TNF-alpha Leeporter™ Luciferase Reporter cell line is a stably transfected RAW264.7 cell line which expresses Renilla luciferase reporter gene under the transcriptional control of the TNF-alpha promoter. Tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) is one of the major proinflammatory cytokines and can induce systemic inflammation, apoptotic cell death, sepsis and cachexia. Dysregulation of TNF-alpha induction is often involved in various human diseases including inflammatory bowel disease, cancer and Alzheimer's disease. The TNF-alpha induction by lipopolysaccharide (LPS), the Toll-like receptor 4 (TLR4) ligand, is shown in Figure 1.
| Content : | Each vial contains 2 ~ 3 x 10^6 cells in 1 ml of 90% FBS + 10% DMSO. |
| Storage condition : | Immediately upon receipt, store in liquid nitrogen. |
Application:
- Monitor the TNF-alpha induction activity.
- Screen for activators or inhibitors of the TNF-alpha signaling pathway.
Culture conditions:
Cells should be grown at 37oC with 5%CO2using DMEM medium (w/ L-Glutamine, 4.5g/L Glucose and Sodium Pyruvate) supplemented with 10% heat-inactivated FBS and 1% Pen/Strep, plus 3µg/ml of Puromycin(Note: Puromycin can be omitted during the reporter cell assays).
It is recommended to quickly thaw the frozen cells upon receipt or from liquid nitrogen in a37oCwater-bath, transfer to a tube containing 10 ml of growth medium without Puromycin, spin down cells, resuspend cells in pre-warmed growth medium without Puromycin, transfer resuspended cells to T25 flask and culture in37oC-CO2incubator.
Leave the T25 flask in the incubator for 1~2 days without disturbing or changing the medium until cells completely recover viability and become adherent. Once cells are over 90% adherent, remove growth medium and passage the cells through trypsinization and centrifugation.At first passage, switch to growth medium containing Puromycin. Cells should be split before they reach complete confluence.Note: RAW264.7 cells may not be detached well by trypsinization only. So you may need to use a cell scraper to harvest the trypsinized cells.
To passage the cells, detach cells from culture vessel with Trypsin/EDTA, add complete growth medium and transfer to a tube, spin down cells, resuspend cells and seed appropriate aliquots of cells suspension into new culture vessels. Subcultivation ration = 1:10 to 1:20 weekly.To achieve satisfactory results, cells should not be passaged over 16 times.
Functional validation:A. Response of TNF-alpha Leeporter™ – RAW264.7 cells to lipopolysaccharide (LPS).
1. Plate TNF-alpha Leeporter™ –RAW264.7 cells into a white solid-bottom 96-well microplate in 100µlof growth medium at 1 x 105cells/well and incubate cells at37oCin a CO2incubator for 4-6 hours.
2. Stimulate cells with different concentrations of LPS and incubate cells at37oCin a CO2incubator for 16 hours.
3. Equilibrate the plate to room temperature for 10 minutes.
4. Add 50 µl of luciferase assay reagent (Abeomics, Cat #17-1101; Refer to the reagent datasheet for the detailed luciferase assay protocol) per well.
5. Read the plate in 1-5 minutes to measure luminescence using a microplate luminometer.
LIMITED USE RESTRICTIONS:
THIS PRODUCT IS SOLELY FOR IN VITRO RESEARCH USE ONLY. NOT FOR DIAGNOSTIC OR THERAPEUTIC USE.
By use of this product, user agrees to be bound by the terms of this limited use statement.
This product issolely for Internal Research Purposesandnot for Commercial Purposes. Commercial Purposes include, but are not limited to (1) use of the cell line in manufacturing; (2) use of the cell line to provide a service, information or data; (3) use of the cell line for therapeutic, diagnostic or prophylactic purposes; or (4) resale of the cell line whether or not such cell lines are resold for use in research.The buyer cannot sell, give or otherwise transfer this product to a third party.
Commercial License Agreement is available for non-research use if applicable. Please contact Abeomics (info@abeomics.com).
For Research Use Only. Not for use in diagnostic/therapeutics procedures.
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淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
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2021-09-17
蛋白质免疫印迹（Western Blot ）可以：（1）从蛋白质混合物中检出目标蛋白质；（2）定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况；（3）用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 查看更多
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2021-09-08
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2021-09-10
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2021-09-15
ImmunoWay生物的使命是用更好的产品和服务来帮助世界各地的生命科学的研究者，简化并加速他们的研究。专注于开发出创新的和可靠的免疫学和细胞学产品。ImmunoWay生物是开发高品质的与癌症、细胞凋亡、细胞生长和信号转导相关的ELISA试剂盒，细胞凋亡检测试剂盒，细胞代谢检测试剂盒，抗体，抗体/蛋白芯片的先驱。公司目前有八千多种抗体，其中信号传导相关的抗体1200 查看更多
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2021-09-18
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2021-09-07
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2021-09-23
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2021-09-13
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2021-09-20
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2021-09-09
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2021-09-21
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磷酸化蛋白 WB 做不好?文献指出了你可能忽略的重要原因 实验方法...123
love1282272021-07-29
嗯，磷酸化蛋白的抗体一定要选好，最好不要买santa的，可以买upstate的,就是millipore的，或者abcam的。
第一，血清成分复杂，最好用密理博的Montage Albumin Deplete Kit去除血清里50%的白蛋白
第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。
第三，不要用牛奶做封闭剂，用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。
第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以选择millipore的signal boost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。
第一，血清成分复杂，最好用密理博的Montage Albumin Deplete Kit去除血清里50%的白蛋白
第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。
第三，不要用牛奶做封闭剂，用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。
第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以选择millipore的signal boost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。
做WB的时候,用的PVDF膜究竟有没有正反_问答详情_WB试剂盒_...123
守望相依ぃ2212021-07-22
这个膜的两面是不一样的。一面粗糙，一面光滑吧。如果这个算正反面的话，那么就是有正反面的。但是对于WB来说在转膜前是没有正反面之分的。你用粗糙的面贴着胶转膜和光滑的面贴着胶转膜，蛋白都能转到膜上去的。不会因为你膜贴反了而蛋白转膜不成功啥的。
转膜后就要区分与胶接触的一面与另一面了。话说楼主好奇的话可以跑蛋白的试试看哈。比如目的蛋白的胶用光滑面贴着胶，内参蛋白用粗糙面贴着胶一起转膜试试转膜结果看看呢。
转膜后就要区分与胶接触的一面与另一面了。话说楼主好奇的话可以跑蛋白的试试看哈。比如目的蛋白的胶用光滑面贴着胶，内参蛋白用粗糙面贴着胶一起转膜试试转膜结果看看呢。
用pcr检测一个因子,没用wb检测怎么解释123
允儿08132021-07-21
OneShineSybrGreenpreMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响，例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证，得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h，超过12h产品性能则会下降。OneShineSybrGreenpreMix这款试剂盒除了价格适中外，还主要有以下优点：1、适用于RealTimePCR反应，可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。2、在2×OneShineSybrGreenpreMix中，预先混有SybrGreen，PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可，操作方便快捷。3、含有更耐高温并持续稳定的DNAPolymerase，可以维持更多的循环数，提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测，检测范围fM-nM。4、反应的Buffer更适合，使反应的基线更水平，无荧光污染信号。使线性期更陡峭，避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。5、SybrGreen更耐高温更足量，确保只要扩增反应在进行，目的DNA双链在增加，就有线性强度的荧光产生。6、dNTPs更足量，确保反应有更高的平台期荧光信号。7、Mg2+浓度更适合，确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成，提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。8、更高的仪器适配性，SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发，产生明亮的荧光信号，有利于仪器对信号的捕捉和处理。我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别：ROC公司的产品没有熔解温度，或者熔解温度太高。但是ROC公司的产品Ct值出现略早，这是因为ROC公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物的结合较快和较松散，但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了，类似于温水煮青蛙不温不火的；这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶，是一种分子量较大的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物结合比较慢，但是慢工出细活，这种酶的特异性较好，一旦激活便呈现爆发式的扩增，类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是ROC公司不可比拟的，线性范围和斜率也是ROC公司不可比拟的。详见下图：向左转|向右转
谁能解释下WB检测和化学发光检测【恐艾吧】123
Curtain6542018-02-07
wb是确诊实验。发光是初筛实验。
wb抗体_wb抗体【价格,厂家,图片,批发,采购】123
jianglili9692021-08-12
做WB时可以同时检测多种蛋白质吗? 蛋白质和糖学技术讨论版...123
逆夏傕°2018-01-15
当然可以鉴别多种蛋白，属于半定量分析方法。跑胶后转膜，然后加一抗二抗检测第一种蛋白，曝光过后，洗几遍加另一种一抗和二抗，以此类推就可以
有些文章中WB结果中有Marker,是怎么做到的？悟空问答123
众神小三4922021-07-30
可能可以通过下面几个方法实现（仅供参考）：
1. 使用预染 Marker，不过分子量不是特别准；
2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位，比如都带有 His 融合标签；
3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色，然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
1. 使用预染 Marker，不过分子量不是特别准；
2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位，比如都带有 His 融合标签；
3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色，然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置。
【讨论】抗体有效性ELISA确认,但不能用于WB的原因 免疫学讨论版...123
E妖胤龉N2021-07-27
timp可以做elisa，因为有专门的elisa试剂盒是用于检测timp，所以是可以用elisa方法进行检测的！
冷冻干燥机,冻干机,300平方生产型冻干机123
陌灬晓柒2018-01-18
电泳液和转膜液都可重复利用3次左右
考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可，重复3次后要染30分钟。
一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.
考马斯亮兰染液也可以重复用。新配的染液10分钟即可，重复3次后要染30分钟。
一抗二抗可以重复利用,但是注意要在5%milk中加入0.2% sodium azide ,并且用完以后放入4度保存,我的经验重复使用4-5次是肯定没有问题的.如果保存不当,就会污染微生物,只能丢弃.
实验设计中的问题 ：提取膜蛋白（受体蛋白）后做western好出结果么 ...123
estellalee2021-08-07
这个蛋白做了一个多月了，一直没有结果，我是用碧云天RIPA+PMSF提取的，请问这种膜蛋白需要用专门的膜蛋白提取试剂盒提蛋白吗？求指教求指教
【求助】线粒体蛋白抽提 蛋白质和糖学123
窝窝军团Tobi稕2018-01-18
因为线粒体蛋白是细胞亚显微结构,必须用电镜观察,可以用,免疫电镜技术,和电镜放射自显影技术.推荐第二种：1放射性同位素标记的生物大分子前体参入,2,常规方法制片,3,在样品上敷上一层溴化银乳胶（要求更严格）,在暗室里曝光数天（时间更长）,经显影定影后,4移至电镜下观察,银颗粒所在位置即放射同位素标记的位置.
【求助】这个蛋白质提取试剂盒有必要买吗？希望WB高手解答,谢谢_...123
feiqi2021-07-31
我做脑组织的炎症因子的WB，但是很可惜，一个都做不出来，不知道什么原因，已经做很久了，怀疑是蛋白提取有问题，我使用的是国产的提取总蛋白试剂盒（RIPA+PMSF），蛋白浓度还可以，有6毫克/毫升，但是目的蛋白丰度比较低，现在想换一种蛋白质提取试剂盒，今天有一个试剂商向我推荐MERK公司的蛋白质提取试剂盒，可以提取膜蛋白、胞浆蛋白、核蛋白和细胞骨架蛋白，但是很贵，要5000多人民币，不知道是否有必要买，难道用总蛋白提取试剂盒不行吗？这个WB让我很苦恼！！！！谢谢。
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