ARNaseH-reversetrancriptasewithimprovedthermalstABIlity,efficiencyandprocessivityfortheproductionofCDNAfromlonganddifficultmRNAtemplates.
- Improvedthermalstability:Activeupto85ºC
- HighyieldsoffirststrandcDNA
- Highprocessivity:ProducescDNAoflongestmRNAsinthemammaliantranscriptome
- Greatsensitivity: WorkswithpgamountsofstartingtotalRNA
- Highreproducibility
- Robustandreliable
SunScript™ReverseTranscriptaseRNaseH-isaengineeredreversetranscriptasebasedonthewellcharacterizedHIV-1RTwithhighThermostabilityandnoRnaseHactivity.IthasRNA-andDNA-dependentpolymeraseactivity.Thisenzymeisactiveupto85°C.TheeliminationofRNaseHactivityenablesthisenzymetoproducehighyieldsoffulllengthcDNAfromlongRNAmolecules,andthehighthermalstabilitypromotesreversetransriptionthroughcomplexsecondarystructures.
- Reversetransciptionattemperaturesashighas85°C
- HighsensitivityoverawideRNAofstartingRNAamounts
- ReversetranscriptionoflongmRNAs
- HighcDNAsynthesisrate
Reversetransciptionattemperaturesashighas85°C
100ngoftotalRNAfromHeLacellswerereversetranscribedattheindicatedtemperaturesfor60minwithSunScriptReverseTranscriptasesandOligo(dT)18 primer,followedbyinactivationat95°Cfor10min.PresenceofGAPDHcDNAwasdetectedbyPCR(productlength305bp).
HighreactiontemperaturesareadvantageoustotranscribeRNAswithcomplicatedsecondarystructures.
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HighsensitivityoverawiderangeofRNAconcentrations
Sensitivitytest:RTreactionswereperformedat70°Cfor60min.Inactivationat95°Cfor10min.
Primerset:HumanGAPDH305bpset
1-1µgHumantotalRNAfromHeLacells
2-100ngHumantotalRNAfromHeLacells
3-10ngHumantotalRNAfromHeLacells
4-1ngHumantotalRNAfromHeLacells
5-100pgHumantotalRNAfromHeLacells
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TranscriptionoflongmRNAs
1-SunScript™RTRNaseH+replicate1
2-SunScript™RTRNaseH+replicate2
3-SunScript™RTRNaseH+replicate3
4-SunScript™RTRNaseH-replicate1
5-SunScript™RTRNaseH-replicate2
6-SunScript™RTRNaseH-replicate3
AssayforlongmRNAreversetranscription:3independentRTreactionswereperformedat65°Cfor60minusingOligo(dT)20 primers.Inactivationat95°Cfor10min.PCRPrimersets:mmNEB(>16kbfrom3’endofmRNA;mRNAtotallength22,5kb);mmDnah8(>8,5kbfrom3’endofmRNA;mRNAtotallength14,5kb)
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HighcDNAsynthesisrate
1µgoftotalRNAfromHeLacellswasreversetranscribedat65°CfortheindicatedtimeswithSunScript™ReverseTranscriptasesandOligo(dT)18primer,followedbyinactivationat95°C10min.
PCRPrimerset:hsHERC4033(>11kbfrom3’endofmRNA;mRNAtotallength15.3kb)
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ORDERINFORMATION
EachSunScript™RTRNaseH-contains:enzyme,5XReactionBufferandDTT.ThecompletemanualisavailableundertheManualtab.LucigenisanauthorizeddistributorofSygnisproductsintheUS.
SunScript™ReverseTranscriptaseRNaseH-isintendedformolecularBIOLOGyuseonlyandinvitrouseonly.Thisproductisnotintendedfordiagnosis,preventionortreatmentofadiseaseinhumanbeingsoranimals.
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2、取灭过菌且无核酸酶的0.2ml离心管，依次加入2～5μgRNAnμL
3、65℃保温5min，然后冰浴5min；
4、往3步骤中的0.2ml离心管依次加入下列组份
RNase抑制剂（40u/μL）0.5μL
10×M-MLVReactionBuffer2μL
DTT（200mM）1μL
逆转录酶（M-MLV）1μL
5、轻轻混匀后，然后2000rpm离心20s；
6、先在37℃保温1hr，然后70℃保温15min；
7、上述产物可立即进行下一步的PCR反应或-20℃保存。向左转|向右转
没有序列识别的功能，他就是简单的催化相邻DNA链的5-P末端和3'-OH末端以磷酸二酯键结合的反应，需ATP作辅酶。 不仅可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的DNA的连接，也催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接。
反转录酶（Reversetranscripatase）是以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶。哺乳类C型病毒的反转录酶和鼠类B型病毒的反转录酶都是一条多肽链。鸟类RNA病毒的反转录酶则由两上亚基结构。真核生物中也都分离出具有不同结构的反转录酶。
逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。是RNA病毒的复制形式，需逆转录酶的催化。艾滋病病毒(HIV)就是一种典型的逆转录病毒。
逆转录与反转录严格意义上来说没有什么区别，但是逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程；反转录是进行基因工程过程中，人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA，并以之为模板人工合成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程，但地点不同，相对性的来说，逆转录在体内，反转录在体外。
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