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| 선택 | Cat.No. | 제품명 | 가격(VAT별도) | 수량 |
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제품특징
□ 내용 (20 회)
| T4 DNA Polymerase | 20 ㎕ |
| 10× Buffer (dNTP 포함) | 30 ㎕ |
| DNA Dilution Buffer | 500 ㎕ |
| Ligation Solution A* | 600 ㎕×2 |
| Ligation Solution B* | 150 ㎕ |
*Ligation Solution A, B는 DNA Ligation Kit Ver.1 (TaKaRa Code 6021)의 시약과 같다.
□ 보존 -20℃
□ 제품설명
DNA Blunting Kit는 T4 DNA polymerase의 5’→ 3’polymerase 활성과 3’→ 5’ exonuclease 활성을 이용하여 DNA 말단을 평활화함으로써 돌출말단 DNA를 간단히 평활말단의 vector에 연결하는 시스템이다.DNA가 5’돌출말단의 경우는 5’→ 3’polymerase 활성에 의해 3’함몰부분에 염기가 부가되고, 5’함몰말단의 경우는 3’→ 5’ exonuclease 활성에 의해 3’돌출부분을 분해하여 평활말단화한다. 이 말단 평활화 반응은 동시에 일어나므로 말단형상이 불분명한 DNA라도 간단히 평활화할 수 있다. 평활말단화한 DNA는 TaKaRa 독자의 ligation 시스템을 통하여 고효율로 평활말단의 vector 등에 연결할 수 있어 PCR 증폭 후의 DNA나 클로닝에 부적당한 말단을 갖는 삽입 DNA를 평활말단 vector에 ligation할 때에 특히 유용하다.본 제품은 돌출말단 vector를 평활말단 vector로 변경할 경우에도 효과적이다. 평활화시킨 vector 는 Alkaline Phosphatase (Code 2120A/B, 2250A/B)로 탈인산화하여 사용한다.
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多谢……
各位大侠:小弟最近做个长片段的CDNA与T载体的连接,片段大小6.4K,载体选用的是pUC19和pGEMT-easy,反转录酶用的是RevertAidTirstStrandcDNASynthesisKit(#K1621),CDNA第二链的扩增用的是LATaq。我是用纯病毒的RNA做模板,操作步骤严格按照说明做的,也曾经有一次获得过电泳图清晰显示的是全长6.4KB左右的片段,与载体连接,结果筛选到的几个克隆,插入的片段仅有2KB左右,奈何?可最近几次再用此反转录试剂盒却不能得到所需片段。在此,小弟想问问大家,你们是否遇到同样的问题,是如何解决的?所用的试剂(载体和酶的选择)和方法是什么,可以告诉后来者,共同进步吧。

