| Overview |  PrinterFriendlyVersion |
| Ex/Em(nm) | 485/590 |
| MW | N/A |
| CAS# | N/A |
| Solvent | N/A |
| Storage | R/D/L |
| Category | ProteinBiochemistry Generalproteins |
| Related |
- PrepareProlite™OrangeWorkingSolution:Add1µLof200XProlite™Orange(ComponentA)to199µLofSampleDilutionBuffer(ComponentE)foreachsampleorBSAstandarddetection.
Note:Donotmixtheworkingsolutioninaglasscontainer. - Runproteinassay:
- Add190μL/wellofProlite™OrangeWorkingSolution(fromStep1)intoeachtube.
Note:Usethin-wall,polypropylene,clear0.5mLPCRtubessuchasInvitrogen™Qubit®AssayTubes(Cat#Q32856)orAxygenPCR-05-Ctubes(VWR,Cat#10011-830).Othertypesoftubescanhaveautofluorescenceandmayinterferewiththeassay. - Add10µLBSAstandards(ComponentB,C,D)or10µLsamplesintothe190μLProlite™OrangeWorkingSolutiontube(fromStep2.1)tomakethefinalassayvolume200μL/tube.
- Incubatethereactionatroomtemperaturefor15minutes.Protectthesamplesfromlightandavoidholdingthesamplesinhands.
- InsertthesamplesintoQubit®andmonitorthefluorescencefollowingQubit®manufacture’sinstructionsasbrieflysummarizedbelow.
a)PressProteinontheHomescreenoftheQubit®HomescreenandproceedtopressReadstandards.
b)Inserteachofthe3tubescontainsstandardsintothesamplechamber.
c)ClosethelidandpressReadstandards.
d)Theinstrumentdisplaystheresultsandgeneratescalibrationcurve.
e)PressRunsamplesandselectsamplevolumeto10µL.
f)Insertthesampletubeintothesamplechamber.
g)ClosethelidandpressReadtube.
h)Theinstrumentdisplaystheresultsontheassayscreen.Thetopvalueistheoriginalsampleconcentrationand
bottomvalueisthedilutedconcentration.
Note:FormoredetailedoperatinginformationonQubit®,refertotheQubit®FluorometerUserGuide. - Add190μL/wellofProlite™OrangeWorkingSolution(fromStep1)intoeachtube.
| References&Citations |  PrinterFriendlyVersion |
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2. Li,J.;Qiu,X.J.,QuantificationofMembraneProteinSelf-AssociationwithaHigh-ThroughputCompatIBLeFluorescenceAssay.Biochemistry2017,56(14),1951-1954.
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9. Zhang,C.;Zheng,L.;Nurnberg,J.;Vacari,B.M.;Zhou,J.;Wang,Y.,Cleavageofpro-tumornecrosisfactoralphabyADAMmetallopeptidasedomain17:afluorescence-basedproteaseassaycleavesitsnaturalproteinsubstrate.AnalBiochem2014,445,14-9.
10. Veiksina,S.;Kopanchuk,S.;Rinken,A.,Buddedbaculovirusesasatoolforahomogeneousfluorescenceanisotropy-basedassayofligandbindingtoGprotein-coupledreceptors:thecaseofmelanocortin4receptors.BiochimBiophysActa2014,1838(1PtB),372-81.
AAT Bioquest AAT Bioquest是一家位于美国的生物公司，前身为ABD Bioquest，总部位于加利福尼亚州。专门从事光学检测技术十多年，一直致力于光谱学检测领域技术的创新和突破。其独特的光学检测技术，综合了化学、生物学和信息学等各个领域的研究，引领了比色、荧光和发光技术新一代光学探针的浪潮。AAT Bioquest在全球拥有强大的经验丰富的专业分销商网络，为从小型研究机构到《财富》500强企业的各类客户提供卓越的产品和定制服务。
美国AATBioquestInc.(前身是ABDBioquest，Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术。AATBioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。AATBioquest会不断介绍新产品，快速的丰富各个领域的产品。
1）我们提供反应荧光探针和发光探针，生物素和端粒酶能够应用于标记药物小分子和生物聚合物，如蛋白、核酸以及其他碳水化合物；2）我们研究并生产荧光和发光探针用于检测蛋白，核酸和活细胞。3）我们不断的推出新型的荧光和发光探针用于检测多种酶，特别是检测水解酶和氧化还原酶类；4）我们致力于开发用于信号转导研究的试剂；5）我们提供生理和神经探针，特别是钙离子指示剂和膜电位探针。
作为AATBioquestInc.的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测领域，包括吸收（颜色），荧光和发光技术等全系列解决方案。我们也将一如既往更加努力为国内用户提供快捷、方便的高质量产品，同时更为您售前售后全面技术支持。
AATBioquest,Inc.(formerlyABDBioquest,Inc.)develops,manufacturesandmarketsbioanalyticalresearchreagentsandkitstoscientistsengagedinlifesciencesresearch,diagnosticR&Danddrugdiscovery.Wespecializeintheareaofphotometricdetectionsincludingabsorption(color),fluorescenceandluminescencetechnologies.TheCompany"sproductsenablescientistsandbiomedicalresearcherstobetterunderstandbiochemistry,immunology,cellBIOLOGyandmolecularbiology.AATBioquestconstantlyintroducesnewproducts,andoffersarapidlyexpandinglistofproductsthataregroupedintoseveralproductlines.
1)Ourreactivefluorescentandluminescentprobes,biotinsandtagenzymesareusedforlabelingsmalldrugmoleculesandbiopolymers,e.g,proteins,nucleicacidsandcarbohydrates;2)Wedevelopfluorescentandluminescentprobesfordetectingproteins,nucleicacidsandlivecells;3)Weconstantlyintroducenovelfluorescentandluminescentprobesfordetectingvariousenzymes,inparticular,hydrolyticandredoxenzymes;4)Wefocusondevelopingreagentsforsignaltransductionresearch;and5)Wealsoofferphysiologicalandneurologicalprobes,e.g.,calciumindicatorsandmembranepotentialprobes.
Besidesthestandardcatalogproductswealsooffercustomservicetomeetyourspecialresearchneeds.Ourcurrentservicesincludecustomsynthesisofcolorimetric,fluorescentandluminescentprobes,customdevelopmentofbiochemical,cell-basedanddiagnosticassaysandcustomscreeningofyourcompoundlibrariesagainstyourdefinedtargetsusingourvalidatedHTSassays.
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1.步骤简单，45分钟内完成测定，比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
两个意义不一样啊，定性是确定你抗体是阴还是阳的，如果阳证明2个情况，一个是你感染了丙肝病毒，另一个是你曾经感染过这个病毒，现在已经好了。但是到底是哪个情况还要进一步做定量测试既病毒RNA检测。如果这个测试值在最低线以下就证明你现在没事，不具有传染性也不是患者只是携带者；如果高于最低线那你就是患者了，就需要治疗
1.模板提取（一般为RNA）：Trizol、氯仿、异丙醇、无水乙醇、DEPC处理水
2.模板浓度测定：分光光度计或NanoDrop
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
谢谢谢
3.逆转录：逆转录试剂盒（或者一步法试剂盒），这一步可以用普通PCR做，也可以用水域做。
4.荧光定量PCR试剂：通常有用SYBR Green Mix做的，但是这里建议你用EvaGreen做，灵敏度和平行性都要好于SYBR Green，并且如果你那是ABI或者Stratagene的PCR如果用SYBR Green还需要加一步Rox很麻烦。
5.其他：除了以上的那些还需要离心管、PCR管或板（Axygen反应比较好）、移液枪等，暂时就想到这么多。
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)；
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)；
(3)酶的底物；
(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考标准品和控制血清(定量测定中)；
(5)结合物及标本的稀释液；
(6)洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
(7)酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用3mol/L。向左转|向右转
临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证.pdf(17431.6k)
