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NEBridge® Ligase Master Mix is a 3X master mix for Golden Gate Assembly. Designed for use with NEB Type IIS restriction enzymes, this master mix contains T4 DNA Ligase in an optimized reaction buffer with a proprietary ligation enhancer. Users need only choose their preferred NEB Type IIS restriction enzyme and add DNA substrates to be assembled. Low complexity single fragment insertions, as well as moderate complexity (3–6 fragment) and high complexity (7–25+ fragment) assemblies, are all supported with this optimized reagent and accompanying protocols.25-fragment Golden Gate Assembly of lac Cassette Using NEBridge Ligase Master Mix and Conventional T4 DNA Ligase Buffer
A. Schematic of 25- fragment lac cassette assembly with NEBridge Ligase Master MixB: 30 µl reactions containing 24 inserts and pGGAselect plasmid were set up using BbsI-HF (NEB #R3539M).Left plate shows results with 10 µl NEBridge Ligase Master Mix. Right plate shows results with 3 µl of 10X T4 DNA Ligase Buffer (NEB #B0202) and 1 µl of T4 DNA Ligase (NEB #M0202T/M). 1 µl of BbsI-HF was used for both reactions, as well as 0.05 pmol of each 24 insert DNAs and pGGAselect. Reactions proceeded for 60 cycles at 37°C for 5 min and 16°C for 5 min, with an end soak at 60°C for 5 min. 2 µl of each reaction was transformed in to 50 µl of T7 Express Competent E.coli(NEB #C2566). 50 µl of outgrowth was plated onto LB plates (supplemented with 1 mg/ml dextrose, 1 mg/ml MgCl2, 30 µg/ml chloramphenicol, 200 µM IPTG and 80 µg/ml X-gal) and incubated at 37°C for 18 hrs, and then stored at 4°C for 4 hrs before scoring colony color phenotype.C: The total transformants and percentage of correct assemblies (blue colonies) were reported as the average result of three replicates with the standard deviation from the mean. The reaction with NEBridge Ligase Master Mix generated 2.2 ±0.2X106 correctly assembled blue colonies per µg vector DNA with 94.3 ±1% fidelity, while the reaction with T4 DNA Ligase Buffer generated 8.3 ±2.1X105 correctly assembled blue colonies per µg vector DNA with 69.8 ± 10.7% fidelity.
ReferenceV. Potapov et al., Comprehensive Profiling of Four Base Overhang Ligation Fidelity by T4 DNA Ligase and Application to DNA Assembly. ACS Synth Biol 7, 2665–2674 (2018).
- This product is related to the following categories:
- DNA Ligases Products,
- DNA Assembly, Cloning and Mutagenesis Kits Products
- This product can be used in the following applications:
- High-throughput cloning and automation solutions,
- NEBridge® Golden Gate Assembly
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该平台由多位经验丰富的生物人和IT人负责运营。蚂蚁淘B2B模式是指客户有采购意向后在蚂蚁
淘搜索全球供应信息，找到合适的产品后在蚂蚁淘下单，然后蚂蚁淘的海外买手进行跨境采购、
运输到中国口岸，最后由蚂蚁淘国内团队报关运输给客户...
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2018-08-10
核糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针（32P或生物素）与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形成双链RNA，免受RNA酶的消化，故该方法命名为RNA酶保护实验。对于32P标记的探针，杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶 查看更多
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2018-11-10
南宁庞博生物工程有限公司在发布的庞博酶 核酸酶 5′—磷酸二酯酶 高I+G 去除咸酸苦腥焦味供应信息，浏览与庞博酶 核酸酶 5′—磷酸二酯酶 高I+G 去除咸酸苦腥焦味相关的产品或在搜索更多与庞博酶 核酸酶 5′—磷酸二酯酶 高I+G 去除咸酸苦腥焦味相关的内容。 查看更多
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上海柯雷生物科技有限公司在发布的RNASE4/Angiogenin血管生成素核糖核酸酶4抗体(肌萎缩性侧索硬化症蛋白)供应信息，浏览与RNASE4/Angiogenin血管生成素核糖核酸酶4抗体(肌萎缩性侧索硬化症蛋白)相关的产品或在搜索更多与RNASE4/Angiogenin血管生成素核糖核酸酶4抗体(肌萎缩性侧索硬化症蛋白)相关的内容。 查看更多
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2021-07-30
上海如吉生物科技发展有限公司在发布的核糖核酸酶A(牛胰）RNAase A供应信息，浏览与核糖核酸酶A(牛胰）RNAase A相关的产品或在搜索更多与核糖核酸酶A(牛胰）RNAase A相关的内容。 查看更多
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2021-06-03
DNase I 是一种核酸内切酶，降解双链或单链DNA，产生5-磷酸末端的单核苷酸及寡核苷酸，在Mg2+存在时，DNase I独立地作用每条DNA链，切割位点是随机分布，在Mn2+存在下,DNase I 作用于DNA双链的大致同一位置，产生钝末端或具1-2个核苷酸突起的DNA片段。来源：牛胰贮存条件：4℃应用：1、用切口平移法进行放射性标记时，可用DNase I在双链DNA上产生随机切口；2、在进行亚硫酸氢盐介导的诱变前，可用DNase... 查看更多
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2021-09-23
本页关键字：amresco去除核酸酶喷剂 amresco报价 amresco去除核酸酶喷剂，amresco报价。提供amresco去除核酸酶喷剂报价、咨询及技术服务，欢迎来电订购amresco去除核酸酶喷剂。中国试剂网经营实验试剂、实验耗材、实验仪器及实验技术服务。公司简介 Amresco 是全球著名的生化试剂生产商，其产品种类齐全，质量稳定，性价比好。深受广大用户的喜爱。Amresco公司来自美国，成立于 1976 年，为高质量生化试 查看更多
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2021-08-02
北京博迈斯科技发展有限公司在发布的DNase I脱氧核糖核酸酶I供应信息，浏览与DNase I脱氧核糖核酸酶I相关的产品或在搜索更多与DNase I脱氧核糖核酸酶I相关的内容。 查看更多
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2018-10-25
脱氧核糖核酸酶是由北京索莱宝科技有限公司代理或销售的Solarbio品牌的试剂，产品来源于北京市通州区马驹桥联东U谷86A。北京索莱宝科技有限公司是中国最权威的脱氧核糖核酸酶试剂销售服务商之一，在北京等地方销售脱氧核糖核酸酶试剂已经多年。生物在线为您提供众多企业脱氧核糖核酸酶仪器产品及图片，以便挑选到性价比高，合适的脱氧核糖核酸酶产品 查看更多
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2021-08-06
PNAS：科学家制备双重核酸酶让CRISPR技术更上一层楼最近，美国西安大略大学的研究人员，就像玩分子乐高游戏一样，向革命性的新基因编辑工具CRISPR/Cas9添加了一种工程酶。他们的研究发表在12月12日出版的美国国家科学院院刊PNAS，表明他们添加的这种工程酶，使得CRISPR基因编辑技术能够更有效和有特异性地靶定基因。CRISPR为人类基因编辑提供的广阔前景，令科学界沸腾，从而打开了用基因疗法治疗囊性纤维化和白血病等疾病的可能性... 查看更多
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2018-09-14
本站已经有关于不属于细菌侵袭性酶的是A、血浆凝固酶B、脱氧核糖核酸酶C、卵磷脂酶D、神经氨酸酶E、氧化还原酶的答案,欢迎查看。 查看更多
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2021-08-30
上海研生实业有限公司所提供的Caspase 激活的脱氧核糖核酸酶抑制剂质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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