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In the NEBExpress® MBP Fusion and Purification System, the pMAL-c6T vector provides a method for expressing and purifying a protein produced from a cloned gene or open reading frame. The cloned gene is inserted downstream from and in frame with the malE gene of E. coli, which encodes maltose-binding protein (MBP); this construct results in the expression of an MBP fusion protein (2,3). The pMAL-c6T vector expresses the N-terminal hexahistidine tagged malE gene (lacking its secretory signal sequence and engineered for tighter binding to amylose) followed by a multiple cloning site containing a TEV protease recognition sequence and stop codons in all three frames. The pMAL-c6T vector expresses the MBP fusion in the cytoplasm. The method uses the strong “tac” promoter and the malE translation initiation signals to yield high-level expression of the cloned sequences (4,5). The fusion protein is then purified by a one-step purification method using amylose resin and MBP’s affinity for maltose(6).Following amylose purification, the target protein can be cleaved from the MBP-tag using TEV Protease, without adding any vector-derived residues to the protein. Both the MBP-tag and TEV Protease are polyhistidine-tagged for easy removal from the reaction. Loading the digest onto NEBExpress Ni Resin (NEB #S1428) sequesters both the MBP-tag and TEV Protease, thereby isolating the target protein in the column flow through. The target protein yield can be up to 100 mg/L, with typical yields in the range of 10–40 mg/L.Figure 1: Schematic illustration of the NEBExpress MBP Fusion and Purification System
Figure 2. Protein Expression using the NEBExpress MBP Fusion and Purification System
SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of fractions from the affinity purification of MBP6-TEV-Paramyosin ΔSal. Lane 1: Protein Standard. Lane 2: uninduced cells. Lane 3: induced cells. Lane 4: purified fusion protein eluted from amylose column with maltose. Lane 5: purified protein after TEV Protease cleavage. Lane 6: target protein isolated from NEBExpress Ni Resin flow through.
- This product is related to the following categories:
- Amylose Purification (MBP-tag),
- NEBExpress MBP Fusion and Purification System,
- Non-T7 Expression,
- Bacterial E. coli Protein Expression,
- Affinity Purification,
- Protein Purification,
- E. coli Expression Strains Products, Protein Expression
- This product can be used in the following applications:
- Non-T7 Expression,
- Target Protein Insolubility ,
- Expression of Difficult Proteins,
- Protein Expression in E. Coli, Protein Expression
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2021-08-17
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2018-07-17
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2021-09-05
上海研生实业有限公司所提供的核糖核酸酶I质量可靠、规格齐全,上海研生实业有限公司不仅具有精湛的技术水平,更有良好的售后服务和优质的解决方案,欢迎您来电咨询此产品具体参数及价格等详细信息！ 查看更多
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2021-08-15
上海七海复泰生物科技有限公司在发布的全能核酸酶 （Benzonase Nuclease）供应信息，浏览与全能核酸酶 （Benzonase Nuclease）相关的产品或在搜索更多与全能核酸酶 （Benzonase Nuclease）相关的内容。 查看更多
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上海善然生物科技有限公司在发布的脱氧核糖核酸酶 I(Sigma代理)DN25-10MG供应信息，浏览与脱氧核糖核酸酶 I(Sigma代理)DN25-10MG相关的产品或在搜索更多与脱氧核糖核酸酶 I(Sigma代理)DN25-10MG相关的内容。 查看更多
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2021-08-02
北京博迈斯科技发展有限公司在发布的DNase I脱氧核糖核酸酶I供应信息，浏览与DNase I脱氧核糖核酸酶I相关的产品或在搜索更多与DNase I脱氧核糖核酸酶I相关的内容。 查看更多
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2021-09-14
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2021-09-20
人脱氧核糖核酸酶Ⅰ试剂盒，进口试剂盒http://www.aatbio.com.cn/人脱氧核糖核酸酶Ⅰ试剂盒用于盛放检测化学成分、药物残留、病毒种类等化学试剂的盒子。一般医院、制药企业使用。核酸提取纯化类、蛋白检测类、RNA。abcamhttp://www.aatbio.com.cn/goodsid/fenleiyi/3200090_abcam/1.htmlabihttp://www.aatbio.com.cn/goodsid/fen 查看更多
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2021-07-14
Bal 31 核酸酶对双链DNA或RNA的两端具有外切酶活性，可以开成长度连续的短链。该酶消化后产生的片段绝大部分为钝末端，可以被T4 DNA连接酶连接。若要取得更多的钝末端片段，可以用DNA聚合酶I大片段将暴露的黏性末端通过聚合作用不平，也可以用绿豆芽核酸酶将黏性末端切去。 来源：Alteromonas espejiani。应用：产生具有精确末端的DNA片段。单位定义：在20mM Tris-HCl， pH8.0，600mM NaCl,... 查看更多
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2018-07-18
人靶向核糖核酸酶 ELISA人靶向核糖核酸酶 ELISA属人ELISA试剂盒，是ELISA试剂盒中常用检测产品，的检测原理、产品报价及操作事项请咨询上海通善生物工程师，企业QQ 1465907913。属 人ELISA试剂盒规格 96T/48T包装 进口分装储存 2~8℃产品 美国供应商 上海通善生物特别说明 利用ELISA进行临床检验常见的样本一般包括血液(指血，静脉血)，尿，粪便，脑脊液，胸腹水，前列腺液，精液，**分泌物等，这些样本 查看更多
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2018-12-18
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