| 实验方法原理 | |
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| 实验步骤 | 光化学增强基因转运材料试剂 准备转染的细胞 适当的细胞培养液 核酸或重组病毒 在使用之前用细胞培养液新鲜稀释核酸（如DNA多聚物），用无血清的细胞培养液或PBS按照感染滴度新鲜稀释重组腺病毒、腺相关病毒或其他可能内吞的病毒。 DNA或病毒载体的使用数量要根据细胞株和载体的具体情况定。我们推荐使用DNA浓度为0.2〜5ug/ml,病毒的起始感染滴度为5个感染颗粒/细胞。 光敏剂：AIPcSai或TPPS2a(Porphyrin产品，Logan，Utah) 氢氧化钠（NaOH;〇.lm〇l/L) 仪器 CO2培养箱，37°C 光源，670nm(AIPcS2a)或420nm(TPPS2a):LumiSource(PCIBiotech,AS,Oslo,Norway) 细胞培养皿 方法 简单的实验计划，参见图2B。 1.接种细胞于细胞培养皿中，使细胞贴壁。 培养皿的选择根据分析方法而定。例如，如果用流式细胞仪考察细胞的转基因表达效率，则可采用12孔板，每孔铺75000个细胞。 2.准备工作浓度的光敏剂，在使用之前用细胞培养液稀释。用5〜20ug/ml的AIPcS2a或0•2〜lug/ml的TPPS2a。 光敏剂浓度要根据光源、光强和光敏剂的吸收谱覆盖的波长范围定。要确保所有的步骤都在非激发光下操作以避免不可控的光敏剂激活，保护细胞不受光化学伤害。体外实验时可以关掉实验台的灯。 3.移除细胞培养液.并加入含光敏剂的细胞培养液。在37°C,CO2培养箱中培养16〜18h。 4.移除含光敏剂的细胞培养液，用无光敏剂的细胞培养液洗3次。继续37°C培养4h。 在此期间，在指定的时间点加入核酸（如DNA多聚物）或重组病毒载体溶液。推荐的培养时间是：非病毒基因载体3.5h，重组病毒载体30min。 5.移除载体并洗一遍细胞。37°C，CO2培养箱中孵育30min。 6•将细胞曝光，采用的光剂量依据前言中的介绍来确定。 如果想降低细胞膜的损伤，在无光敏剂中培养细胞1〜4h后再曝光。 7•将细胞放在黑暗环境中继续培养24〜48h后分析转基因效率。 |
