对于大多数初做科研的学生来讲,做WB/IHC实验选择抗体时常常不知道是选择单抗还是多抗。单抗和多抗究竟有何区别?
首先简单介绍一下原理:抗体是介导体液免疫的重要效应分子,是B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白。主要存在于血清等体液中。通过与相应抗原特异性结合,发挥体液免疫的功能。
抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇,也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇,因此,机体也可以产生多种不同的抗体。由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体(单抗)。而由多个B淋巴细胞克隆产生的,受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体(多抗)。从某种角度而言,多抗是多种单抗的混合物。
单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势。单克隆抗体的特异性高,一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的单克隆抗体,因此可以对其特异性进行全面、系统地验证。可以用于精确的细胞类型标记,因此在做IHC时选择单抗可以使你的实验结果更有说服力。但如果所识别的抗原表位被破坏,实验的结果将会受到很大的影响,这也是单抗的缺点之一。
而多克隆抗体的特异性较差,即使是使用相同的抗原制备多抗,不同批次间也会存在差异,因而在特异性、重复性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时,更容易造成背景,例如在WB中有杂带,在IHC中背景较深等等。虽然还存在着特异性差的问题,但由于多抗识别多个抗原表位,即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变,我们的实验结果仍可以不受影响。在相同条件下,使用多抗可以提高检测的灵敏度,对于表达偏低的蛋白也更容易检测出。
进口抗体:abcam品种全,质量好,但价格稍高,一般用来做WB/IHC均没有问题;Sigma的抗体价格最贵;CST的抗体性价比较高,不足是CST的抗体品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以,但是选用Santa的单抗基本效果较差,主要优点是种类多可以满足不常见品种及蛋白的需求。最近发现也常用GeneTex的抗体,WB实验非常好用,尤其建议没有特异性抗体的品种如:猪,另外一个有优点是这个公司大多数抗体有小包装,对初步的探索性实验及少量的验证实验非常合适。