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Boston Biochem/Recombinant Human His6-Ubiquitin Mutant K29R Protein, CF/UM-HK29R-01M
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SummaryProduct DatasheetsCarrier FreeReconstitution CalculatorBackgroundRelated Research Areas
Recombinant Human His6-Ubiquitin Mutant K29R Protein, CF Summary
Purity
>95%, by SDS-PAGE under reducing conditions and visualized by Colloidal Coomassie® Blue stain
Activity
The lysine residue utilized for Ubiquitin chain formation is functionally important. Ubiquitin lysine to arginine mutants are ideal for investigating biological processes involving a particular Ubiquitin chain linkage. Recombinant Human His6-Ubiquitin Mutant K29R prevents the formation of K29-linked Ubiquitin chains. Reaction conditions will need to be optimized for each specific application. We recommend an initial Recombinant Human His6-Ubiquitin Mutant K29R concentration of 0.2-1 mM.
Source
E. coli-derived human Ubiquitin protein
Accession #
P62988
Product Datasheets
Product Datasheet
COA
SDS
Carrier Free
What does CF mean?
CF stands for Carrier Free (CF). We typically add Bovine Serum Albumin (BSA) as a carrier protein to our recombinant proteins.Adding a carrier protein enhances protein stability, increases shelf-life, and allows the recombinant protein to be stored at a more dilute concentration.The carrier free version does not contain BSA.
What formulation is right for me?
In general, we advise purchasing the recombinant protein with BSA for use in cell or tissue culture, or as an ELISA standard.In contrast, the carrier free protein is recommended for applications, in which the presence of BSA could interfere.
UM-HK29R
| Formulation | Lyophilized from a solution in HEPES. |
| Shipping | The product is shipped at ambient temperature. Upon receipt, store it immediately at the temperature recommended below. |
| Stability & Storage: | Use a manual defrost freezer and avoid repeated freeze-thaw cycles.
|
Reconstitution Calculator
Reconstitution Calculator
Background: Ubiquitin
Ubiquitin is a 76 amino acid (aa) protein that is ubiquitously expressed in all eukaryotic organisms. Ubiquitin is highly conserved with 96% aa sequence identity shared between human and yeast Ubiquitin, and 100% aa sequence identity shared between human and mouse Ubiquitin (1). In mammals, four Ubiquitin genes encode for two Ubiquitin-ribosomal fusion proteins and two poly-Ubiquitin proteins. Cleavage of the Ubiquitin precursors by deubiquitinating enzymes gives rise to identical Ubiquitin monomers each with a predicted molecular weight of 8.6 kDa. Conjugation of Ubiquitin to target proteins involves the formation of an isopeptide bond between the C-terminal glycine residue of Ubiquitin and a lysine residue in the target protein. This process of conjugation, referred to as ubiquitination or ubiquitylation, is a multi-step process that requires three enzymes: a Ubiquitin-activating (E1) enzyme, a Ubiquitin-conjugating (E2) enzyme, and a Ubiquitin ligase (E3). Ubiquitination is classically recognized as a mechanism to target proteins for degradation and as a result, Ubiquitin was originally named ATP-dependent Proteolysis Factor 1 (APF-1) (2,3). In addition to protein degradation, ubiquitination has been shown to mediate a variety of biological processes such as signal transduction, endocytosis, and post-endocytic sorting (4-7).
Mutation of lysine 29 to arginine renders Ubiquitin unable to form poly-Ubiquitin chains via lysine 29 linkages with other Ubiquitinmolecules. Ubiquitin K29R can form a Ubiquitin-activating (E1) enzyme-catalyzed active thioester at the C-terminus allowing the molecule to be transferred to the lysines of substrate proteins. Ideal for the reduction in poly-Ubiquitin chain length/conjugation rates and determining if poly-Ubiquitin chains are K29 linked.
Entrez Gene IDs
7314 (Human); 298693 (Rat)
Alternate Names
RPS27A; UBA52; UBB ubiquitin B; UBB; UBC; Ubiquitin
FAQs
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View all Proteins and Enzyme FAQsRecombinant Enzymes
Recombinant Human His6-USP7 Protein, CF
Recombinant Human His6UBE2S Protein, CF
Recombinant Human Isopeptidase T/USP5 Protein, CF
Recombinant Human STAM-1 Protein, CF
Recombinant Human Ubiquitin Activating Enzyme (UBE1), CF
Recombinant Human His6-UBE2N/UBE2V2 Complex Protein, CF
Recombinant Human His6-UAF1 Protein, CF
Recombinant Human UCH-L3 Protein, CF
Recombinant Human UBE2K/E2-25K Protein, CF
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2021-08-24
上海超研生物科技有限公司在发布的一步逆转录PCR试剂盒供应信息，浏览与一步逆转录PCR试剂盒相关的产品或在搜索更多与一步逆转录PCR试剂盒相关的内容。 查看更多
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2018-03-20
147080-10650microspheres-nanospheresMicrospheres-NanospheresMicrospheres-Nanospheres/NIST Traceable Silica Size Standards/147080-10/650nm-10ml 查看更多
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2019-09-22
供应商 Alomone 产品货号 ALO-AGC-001-50 产品报价 ￥5872/50ul 购买方式 银行转账、电汇、支票、现金,在线支付宝及网银支付,或直接与我们电话联系400-6800-868。... 查看更多
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2021-09-21
供应商 Alomone 产品货号 ALO-AGR-022-50 产品报价 ￥5872/50ul 购买方式 银行转账、电汇、支票、现金,在线支付宝及网银支付,或直接与我们电话联系400-6800-868。... 查看更多
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2021-08-06
15联呼吸道病毒荧光标记PCR检测试剂盒，是一种用来检测疾病的诊断试剂。... 查看更多
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2021-09-05
product information Background Cytokinins (CK) belong to a class of plant growth substances (plant hormones) which promote cell deivision by means of local and long distance signalling.Zeatin is an adenine- 查看更多
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北京华夏远洋科技有限公司在发布的TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit（两步法荧光定量反转录PCR试剂盒）供应信息，浏览与TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit（两步法荧光定量反转录PCR试剂盒）相关的产品或在搜索更多与TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit（两步法荧光定量反转录PCR试剂盒）相关的内容。 查看更多
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2018-12-26
Vector systems for cloning different sizes of DNA fragmentsCell-based DNA cloning has been used widely as a tool for producing quantities of pure DNA for physi 查看更多
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2021-08-24
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管 查看更多
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2021-08-15
南京钟鼎生物技术有限公司在发布的荧光定量PCR技术服务供应信息，浏览与荧光定量PCR技术服务相关的产品或在搜索更多与荧光定量PCR技术服务相关的内容。 查看更多
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2021-08-17
美国GeneCopoeia在发布的miRNA 逆转录试剂盒供应信息，浏览与miRNA 逆转录试剂盒相关的产品或在搜索更多与miRNA 逆转录试剂盒相关的内容。 查看更多
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hiv检测单上有两个数值是什么检测方法?_寻医问药网_xywy.com123
2017-10-02
检测方法编辑
检测HIV感染者体液中病毒抗原和抗体的方法，操作方便，易于普及应用，其中抗体检测尤普通。但HIv P24抗原和病毒基因的测定，在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。2012年，世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒（胶体金法）就属于侧向免疫层析法（金免疫）类别，基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂，用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体，阴性符号以（-）表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体，阳性符号以（+）表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期：从HIV进入体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期，抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应：自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下，身体可以产生一些抗体，其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似
抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内，其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染，临床中一般不作为常规诊断项目。
核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是，每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的实验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断，在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外，利用核酸检测方法的高度敏感性，使用集合核酸扩增检测技术和方法，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫
检测HIV感染者体液中病毒抗原和抗体的方法，操作方便，易于普及应用，其中抗体检测尤普通。但HIv P24抗原和病毒基因的测定，在HIV感染检测中的地位和重要性也日益受到重视。
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。2012年，世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒（胶体金法）就属于侧向免疫层析法（金免疫）类别，基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂，用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体，阴性符号以（-）表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体，阳性符号以（+）表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期：从HIV进入体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期，抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应：自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下，身体可以产生一些抗体，其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似
抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内，其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染，临床中一般不作为常规诊断项目。
核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是，每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的实验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断，在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外，利用核酸检测方法的高度敏感性，使用集合核酸扩增检测技术和方法，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫
【求助】质粒小量抽提问题! 核酸基因技术讨论版论坛123
_迷糊司机2017-10-01
我用Takara的小量试剂盒提质粒，但提出的量很少，导致酶切效果不好，加菌液的量1、1.5、3、4.5、6ml都试过了，都不行，加入SolutionII后不是特别透明，老是有点浑浊，打电话问客服，说是摇菌的问题，但我试过OD值小一些的菌液，也不行，希望能尽快找到原因，...
猪细小病毒荧光定量pcr检测试剂盒和猪细小病毒pcr检测试剂盒是一样的...123
叿神2021-07-26
OneShine SybrGreen preMix试剂盒在研发之初就考虑到了一般科研环境中方方面面的影响，例如我们就光照强度、光照时间对本产品的影响做了严苛的实验论证，得到1ml本产品盛装于1.5ml离心管中放置在2000Lux光照强度下可以保存12h，超过12h产品性能则会下降。OneShine SybrGreen preMix这款试剂盒除了价格适中外，还主要有以下优点：1、适用于Real Time PCR反应，可以快速、准确地对目的基因进行定量检测。2、在2×OneShine SybrGreen preMix中，预先混有SybrGreen，PCR体系配制时只需入模板、引物、ddH2O即可，操作方便快捷。3、含有更耐高温并持续稳定的DNA Polymerase，可以维持更多的循环数，提供了选择循环数更大的空间。更大的Ct值选择范围就意味着可以支持微量目的基因检测，检测范围fM-nM。4、反应的Buffer更适合，使反应的基线更水平，无荧光污染信号。使线性期更陡峭，避免了Ct值的无效浮动。使平台期更平直。也确保了引物与模板能够更特异地结合。5、SybrGreen更耐高温更足量，确保只要扩增反应在进行，目的DNA双链在增加，就有线性强度的荧光产生。6、dNTPs更足量，确保反应有更高的平台期荧光信号。7、Mg2+浓度更适合，确保线性期有爆发式的目的DNA片段合成，提高了线性期反应体系的扩增系数和线性期的长度。8、更高的仪器适配性，SybrGreen染料可以被各大主流仪器的激发光所激发，产生明亮的荧光信号，有利于仪器对信号的捕捉和处理。我们的产品与市面上目前常见的一种产品相比较有如下区别：ROC公司的产品没有熔解温度，或者熔解温度太高。但是ROC公司的产品Ct值出现略早，这是因为ROC公司使用了一种小分子量的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物的结合较快和较松散，但是扩增的效率和扩增的特异性就不能保证了，类似于温水煮青蛙不温不火的；这种酶还有一个弱点就是不耐冻融。我们使用的是Taq酶，是一种分子量较大的DNA聚合酶，这种酶与模板和引物结合比较慢，但是慢工出细活，这种酶的特异性较好，一旦激活便呈现爆发式的扩增，类似于不鸣则已一鸣惊人。我们产品熔解温度是ROC公司不可比拟的，线性范围和斜率也是ROC公司不可比拟的。详见下图：向左转|向右转
荧光定量PCR试剂盒说明书123
zqw2021-08-20
很想看看他们公司成熟的技术到底是什么样子的，不知道哪里可以看到呢？
Takara的逆转录试剂盒怎么样呢?和Toyobo的比起来呢? 分子生物 ...123
疯子mjLW82017-10-01
日本的。
首先，不否认它比大多数国产的试剂盒做得好，提取的纯度、方便度和量，都还很不错。
其次，它是日本的。so我觉得实验室用用天根的，就非常好了。拒绝日货，从实验室做起。
首先，不否认它比大多数国产的试剂盒做得好，提取的纯度、方便度和量，都还很不错。
其次，它是日本的。so我觉得实验室用用天根的，就非常好了。拒绝日货，从实验室做起。
荧光定量pcr试剂盒荧光定量pcr试剂盒批发、促销价格、产地货源 ...123
退潮6692021-07-23
实时荧光定量PCR（qPCR）用什么试剂盒比较好加入荧光标记探针，巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物。一方面提高了灵敏度，另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据，建立实时扩增曲线，准确地确定CT值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模版DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确
【求助】哪些公司的miRNA提取试剂盒和逆转录试剂盒比较好 核酸...123
奈落060762021-07-28
我用的是Fermentas公司的RevertAid First strand cdna synthesis kit,效果很好，逆转录效率也比较一致。100次打折也就1000多
艾滋病检测试纸怎么用 教你正确使用方法_检测方法_艾滋病_99健康网123
2021-08-06
艾滋病检测试纸的原理是： 艾滋病检测试纸条是使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂，可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特有性抗体。所有操作时间约是15分钟，动作简便、迅速、准确、自带质控对照、无需所有附加药剂。适合于临床检验、无偿献血现场筛查等。
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。2012年，世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒（胶体金法）就属于侧向免疫层析法（金免疫）类别，基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂，用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体，阴性符号以（-）表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体，阳性符号以（+）表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期：从HIV进入体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期，抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应：自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下，身体可以产生一些抗体，其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似
抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内，其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染，临床中一般不作为常规诊断项目。
核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是，每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的实验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断，在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外，利用核酸检测方法的高度敏感性，使用集合核酸扩增检测技术和方法，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫展开
抗体检测
抗体检测
血清中HIV抗体是判断HIV感染的间接指标。根据其主要的适用范围，可将现有HIV抗体检测方法分为筛检试验和确证试验。
确证试剂
筛检实验阳性血清的确证最常用的是Western blot（WB），由于该法相对窗口期较长，灵敏度稍差，而且成本高昂，因此只适合作为确证实验。随着第三代和第四代HIV诊断试剂灵敏度的提高，WB已越来越满足不了对其作为确证实验的要求。
FDA批准的另一类筛检确证试剂是-免疫荧光-试验（IFA）。IFA比WB的成本低，而且操作也相对简单，整个过程在1-1.5小时内即可结束。此法的主要缺点是需要昂贵的荧光检测仪和有经验的专业人员来观察评判结果，而且实验结果无法长期保存。现在FDA推荐在向WB不能确定的供血员发布最终结果时以IFA的阴性或阳性为准，但不作为血液合格的标准。
筛检试验
筛检试验主要用于对供血员进行筛查，因此要求操作简便，成本低廉，而且灵敏、特异。2012年，世界上主要的筛检方法仍然是ELISA，还有少数的颗粒凝集试剂和快速ELISA试剂。ELISA有很高的灵敏度和特异性，操作简单，仅需要实验室配备酶标仪和洗板机即可应用，特别适合于试验室大规模筛检使用。
颗粒凝集实验是另一种操作简单方便，成本低廉的检测方法，该方法结果可通过肉眼判定，灵敏度很高，特别适合发展中国家或大量筛选供血员时使用，缺点是必须使用新鲜样品，特异性较差。
80年代后期发展起来的斑点印迹检测（Dot-blot assay）是一种快速ELISA（Rapid ELISA）方法，这种方法操作极为简便，过程短暂，整个过程多数在5-10分钟内甚至3分钟内即可结束，但该法比ELISA和颗粒凝集试剂昂贵得多。
人类免疫缺陷病毒抗体口腔粘膜渗出液检测试剂盒（胶体金法）就属于侧向免疫层析法（金免疫）类别，基于免疫层析技术通过手工操作、肉眼读取结果、20分钟即可定性得出检测结果的快速诊断试剂，用于检测口腔粘膜渗出液样本中的HIV-1型和HIV-2型抗体。可用于自愿咨询检测、不愿采血、晕针患者的初筛。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需进行进一步筛查确认。[3]
【HIV阴性】说明从人体内检测不到HIV抗体，阴性符号以（-）表示。不能说没有感染HIV, 要看是什么时候检测的，在窗口期内，感染者的体内还没有产生HIV抗体，或还没有产生足量的HIV抗体，这时HIV检测是阴性结果，如果在窗口期之后检测的，可以排除感染HIV的可能。
【HIV阳性】说明从人体内检测到了HIV抗体，阳性符号以（+）表示。
【检测结果不定因素】
感染还处于窗口期：从HIV进入体内到检测这段时间还不够长，因此血清还没有形成典型的抗体反应
艾滋病进展到终末期，抗体水平下降
其他非病毒蛋白抗体的交叉反应：自身免疫性疾病、某些恶性疾病、怀孕、输血或器官移植等情况下，身体可以产生一些抗体，其反应与HIVP24核心蛋白抗体引起的反应很相似
抗原检测
病原检测主要指用病毒分离培养、电镜形态观察、病毒抗原检测和基因测定等方法从宿主标本中直接检测病毒或病毒基因。由于前两种方法难度大，且需要特殊设备和专业技术人员。因此仅抗原检测和RT-PCR(反转录－PCR)可用于临床诊断。HIV-1P24抗原检测可用于HIV-1抗体不确定或窗口期的辅助诊断；HIV-1抗体阳性母亲所生婴儿早期的辅助鉴别诊断；第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。P24抗原检测一般用ELISA双抗体夹心法试剂，试剂必须经过SDA批准注册、在有效期内，其阳性结果必须依据试剂说明书经中和试验确认。HIV-1P24抗原检测的敏感性为30-90%，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊；HIV-1 P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染，临床中一般不作为常规诊断项目。
核酸检测
HIV核酸检测可用于HIV感染的辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效判定、预测疾病进展等。常用的HIV病毒载量检测方法包括逆转录PCR实验（RT-PCR）、核酸序列扩增实验（NASBA）、分支DNA杂交实验（bDNA）以及实时荧光定量PCR技术。值得注意的是，每一种HIVRNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数或国际单位，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA，因此HIV核酸定性检测阴性，只可报告本次实验结果阴性，但不能排除HIV感染；HIV核酸检测阳性，可作为诊断HIV感染的辅助指标，不能单独用于HIV感染的诊断。报告HIV核酸定量检测结果时应按照仪器读数报告结果，注明使用的实验方法、样品种类和样品量，当测定结果小于最低检测限时，应注明最低检测限水平。
HIV核酸定性检测也可用于HIV感染的辅助诊断，在分析HIV基因亚型和变异等基础研究中应用。通常使用PCR或RT-PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂，引物可来自文献或自行设计，应尽量覆盖所有或常见的毒株，也可使用复合引物。报告定性检测结果时应注明反应条件和所使用的引物序列。此外，利用核酸检测方法的高度敏感性，使用集合核酸扩增检测技术和方法，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。aware天猫展开
如何设计3‘和5’RACE的引物? 生物科学 学术 科研...123
zcj14092017-10-01
按照试剂盒的说明书要求进行设计。要求特异性比较强。
【原创】miRNA用荧光定量PCR检测的流程以及汇总 核酸基因技术讨论版...123
gq20022011-03-17
新手上路，学习学习！
【求助】小鼠逆转录可以用Thermo 的试剂盒吗 核酸基因技术 丁香 ...123
xiayu7909212021-08-01
近期要做小鼠的RNA纯化、逆转录，临做了才想起来小鼠可以用我们常用的试剂盒吗，ThermoScientificRevertAidHMinusFirstStrandCDNASynthesisKit,试剂盒中的引物Oligo（dT)Primer可以用于小鼠吗？
逆转录PCR的实验步骤3_丫丫123
夏兮颜01282017-10-06
一、实验器具与材料：1、移液器：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125ml的白色试剂瓶（放无水乙醇）7、量筒：50ml、250ml、500ml8、容量瓶：250ml、500ml、1000ml9、试管架：5ml、1.5ml、20μl10、盐水瓶：250ml、500ml各2个备用，一个装无水乙醇，另一个装DEPC水11、铝制饭盒：4个12、塑料小饭盒：1个13、大瓷缸：2个14、锡泊纸：一卷15、卷纸：2卷16、三角烧瓶：带盖，稍大二、实验器具的处理与准备1、塑料制品：（包括枪头、EP管、匀浆管等）先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中，其中小枪头需要吸管打入DEPC水，过夜，然后高压，再烤干备用，实验前将枪头等放入吸头台，再高压一次（EP管）2、玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，蒙锡纸烤干备用（DEPC水泡）（洗净后先泡1‰DEPC过夜，再烤干）3、匀浆器：（包括剪刀、镊子）先洗净后，再高压（不需要泡DEPC）三、试剂配制：1、DEPC水：吸出1ml放在1000ml双蒸水中配成1‰DEPC水，放在1000ml容量瓶中静置4小时备用。2、75%乙醇：用无水乙醇DEPC水配，然后放-20℃保存（其中DEPC水需先高压）3、异丙醇：放入棕色瓶中4、氯仿：放入棕色瓶中5、琼脂糖仅供参考
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