美国Bio-Rad伯乐T100型梯度PCR仪性能特点:
■有着时下最流行的触摸屏设计,编辑和运行程序非常方便。
■T100PCR仪是一台小巧、可靠且经济的96孔PCR仪,非常适合小型实验室。有了它,您无需再去预约排队,苦苦地等待,想做就做,想唱就唱。
■T100PCR仪带有温度梯度功能,便于优化分析条件。它能够同时检测8种退火温度,以便确定哪个温度能带来高特异性和高产量。T100还能对1-100μl的样品体积进行准确均一地加热,为您带来一致的结果。
■该款PCR仪采用图形用户界面,您可以轻松地编辑、运行和保存程序。当然,您也可以将程序放入个人文件夹或导出到U盘中。
■样品容量:96×0.2ml反应管,*最大升降温速率:4°C/sec,5.7英寸触摸屏显示
T100型梯度PCR仪技术参数:
T100型梯度PCR仪 | |
样本容量 | 96x0.2ml试管,0.2ml联管或1x96孔板 |
最大升降温速率,°C/sec | 4 |
平均升降温速率,°C/sec | 2.5 |
温度范围 | 4–100°C |
温度精度 | ±0.5°C设定温度 |
温度均匀性 | ±0.5°C(孔间温度差),在30秒内达到目标温度 |
输入功率 | 100–150VAC,50–60Hz;220–240VAC,50–60Hz;最大670W |
显示屏 | 5.7''VGA彩色触摸屏 |
端口 | 1个USBA |
内存 | 500个典型程序;USB闪存驱动器可无限扩展 |
尺寸(宽x深x高) | 26x47x23cm(10x18x9'') |
重量 | 9kg(20lb) |
T100型梯度PCR仪梯度功能 | |
梯度精度 | ±0.5°C预设温度 |
行均匀性 | ±0.5°C(行内孔间温度差),30秒内 |
梯度范围 | 30–100°C |
温度差异范围 | 1–25°C |
Thermalcyclersystem,includes96-wellthermalcycler,powercord,tubesupportring
Description:
UsetheT100thermalcyclerforfastandreliablePCRina96-wellblockformat.
Savetimeprogrammingwithanintuitivetouchscreen
OptimizereactionsquicklyinasinglerunusingthermalgrADIenttechnology
Manageandorganizeprotocolseasilyusingpersonalizedfolders
Savespacewiththesmallfootprint
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一抗和二抗的制备方法什么的,推荐阅读“抗体工程”相关的一些文章和书籍。
简单点的信息,可以看百度百科,查阅“一抗“、“二抗”、“抗体”…
1. 一抗选择
(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、别名、亚型等信息。
(2)确定您的实验类型,Elisa,WB,IHC,ICC,或者是FACS。biorbyt的每种抗体说明书都会列出抗体经验证过适用的实验类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,Rat等。我们的抗体说明书都列出该抗体验证过的适用物种,可根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验需要的抗体。
(4)样本抗原蛋白的结构性质。了解样本抗原蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
(5)单多克隆抗体的选择。一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
2. 二抗选择
(1)种属来源。主要根据一抗种属来源而决定二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。免疫组化,WB二抗主要选择HRP,Biotin标记的二抗,而免疫荧光染色可按实验需要选择不同荧光素标记的二抗,如FITC、Cy3、PE等。
详情可搜索博欧特生物
选择一抗就根据检测蛋白的状态来选,如果有蛋白带标签,就选针对标签的抗体。
如果没有标签,那么就要自己制备一抗。
二抗的选择则主要根据一抗的来源来选择,如果一抗是鼠源的,二抗一般就选用羊抗鼠的就可以了。
如果抗体使用次数太多会使背景变黑吗?
一抗就是你要检测的目的抗体。
GAPDH作为内参的话,也是要孵它的一抗
第一:tritonX-100破膜的原理到底是什么,我以前看过的资料是它是个脂溶性的东东,可以溶解细胞膜和核膜的脂质,从而形成孔洞,让抗体进入,所以有人说tritonx-100又叫打孔剂。一般用0.3%的浓度,PBS稀释。
但是总有人问我,如果是膜蛋白染色,破不破膜?
如果是膜蛋白,要看抗体和抗原的结合位点,如果是跨膜蛋白的话,其结合位点在胞内段的话肯定是需要破膜的。
根据上面的理解,破膜并不会对蛋白造成影响,只是溶解了脂质形成“孔”。
所以我觉得如果条件允许,常规每次都破一下,还是很好的选择。
你的理解是什么呢?
第二:二抗封闭原理的问题。
上一抗之前都要用二抗来源的血清封闭,那么封闭的原理到底是什么。
看资料说是封闭样品中能够与二抗发生非特异性结合位点,降低非特异性显色。用的封闭液是二抗来源的血清。
我的理解:二抗也是抗体,通常用的是说是和一抗的fc端特异性结合的IgG。
如果是减少非特异性结合的话,那么应该是二抗能够跟样品中的某些东西反应,而二抗来源的血清能先进行阻断。
我的问题是:样品中到底是什么物质,可以和二抗来源的血清中的什么物质,进行结合从而阻断。(即样品中,和二抗来源的血清中,分别是两种什么物质发挥作用);
但是一个新的问题产生了,大家一般多用的是BSA封闭,BSA叫做牛血清白蛋白,他是如何起到封闭作用的呢?
第三:最近做免疫荧光,一个不该在细胞核表达的抗体总是出现细胞核的非特异性染色。
本来我怀疑是抗原弥散了,但是细胞是固定过了的啊,而且同样的方法染色另外一个胞浆表达的抗体,就没有这个问题。
白死不得其解,快要愁死了。
谢谢,请大家指导!
@wh2008
@byd123
@skyskytotop
@甲醛
@多聚甲醛
1,5%脱脂奶。
2,3%BSA。
3,5%BSA。
以上都可用PBS配,也可用TBST配。个人经验为,抗体背景高时用脱脂奶好;抗体质量好背景低时用BSA配,效价高可节约抗体。
所以,用PBS稀释了没关系,再加入相应脱脂奶粉或BSA即可。
抗体溶液倒到膜上后,将容器放到一个水平摇床,或者是染色摇床上,缓慢的摇动。可以在4C过夜孵育,也可以在室温孵育1h即可。