【求助】如此夹心法ELISA可行吗？

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【求助】如此夹心法ELISA可行吗？

2021-08-24

问题描述：

手头有P蛋白的鼠单抗和兔多抗，现在想检测培养的肿瘤细胞中P蛋白的含量，用竞争法太浪费抗原了，想用下面的方法（类似夹心法）：
包被单抗（过量）——抗原37度1小时——多抗37度1小时——二抗——显色

按道理应该可行，但有一个问题：兔二抗对鼠一抗也会反应吗？

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风雨の人生

用户

用夹心法你的问题就太多了！你至少需要考虑以下几个问题１：你的配对抗体是否真的能够配对，是不是针对抗原的不同位点，假如就是不同位点，那位点间的空间是否能　满足配对的需要！２：你的二抗来个抗兔的，你是否考虑其可能与鼠有交叉反应，３：你的标准抗原从哪来，你没有标准抗原做标准曲线你还做ELISA干吗?GOOD LUCK!

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zoujie8171

用户

兔二抗还真是很容易与鼠源抗体有一定程度的交叉反应,你考虑的对.建议最好不要这样做,当然也可以试试.

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xsp0715

用户

我也是用这种方法来检测的去年用了鼠多抗，有明显的交叉反应，刚刚制备了鼠单抗，预备实验表明鼠单抗与纯化的兔多抗交叉反应很小。

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