【求助】关于夹心法Elisa标曲的一些疑问,望各位帮忙解答啊
2021-08-10
问题描述:
最近在用夹心法测目的抗体的含量,有很多不解的地方,望各位解答了。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释,为什么?我试过非梯度稀释的,也可以达到线性R2=0.99.
2.我用了CurveExpert做标曲,自动搜索后发现有10种提供的方程,各种形式的,其中一个十分适合我的实验结果(LogisticModel),而其他的感觉又不适合,因为结果常常为负值。这又是为啥捏?
3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4,如果我的测量结果在1.3,是否像其他人所说的>1了就不准确了。
4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程?
不好意思啊,一下问了这么多问题,最近做了一个月的ELISA,完全摸不清头脑啊。谢谢各位了
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迦南之野
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1、关于梯度稀释:一般我按照说明书上面的要求梯度稀释,这样做出来和说明书上面的标曲做对比,很清楚知道自己做的准不准,如果差别很大,可以很快的找原因。非梯度稀释没试过,觉得还是按照说明书上来比较好。2、CurveExpert没用过,elisa有很多做标曲的方法吧,我常用回归方程、二次曲线和四参数方程法,一种不太好,就换种方法试试。可能你测的标曲并不好,不会很多种方法都可以用的。3、我们实验室测elisa,OD大于2.5,才认为数据不准。好像说明书上面的标曲数值有大于1的吧。4、夹心法我们实验室一般用线性方法,竞争法用四参数方程,不过上次侧过icllab公司的IgE(夹心法),他们给出的实验方法是四参数方程。我自己知道的也不多。
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missoulmate
用户
谢谢你啦,这个问题已经克服掉了,种种因素,归结起来就是稀释倍数的问题。夹心法的标曲我也用的是四参数法做的了,不然怕到时候审稿什么的人家不认再。再次感谢
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