【求助】关于夹心法Elisa标曲的一些疑问，望各位帮忙解答啊

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2021-08-10

问题描述：

最近在用夹心法测目的抗体的含量，有很多不解的地方，望各位解答了。
1.标准曲线的标准品是否一定要梯度稀释，为什么？我试过非梯度稀释的，也可以达到线性R2=0.99.

2.我用了CurveExpert做标曲，自动搜索后发现有10种提供的方程，各种形式的，其中一个十分适合我的实验结果（LogisticModel），而其他的感觉又不适合，因为结果常常为负值。这又是为啥捏？

3.实验的酶标仪最大OD值可以测到4，如果我的测量结果在1.3，是否像其他人所说的＞1了就不准确了。

4.利用夹心法进行定量分析是否一定要使用线性方程？

不好意思啊，一下问了这么多问题，最近做了一个月的ELISA，完全摸不清头脑啊。谢谢各位了

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迦南之野

用户

1、关于梯度稀释:一般我按照说明书上面的要求梯度稀释，这样做出来和说明书上面的标曲做对比，很清楚知道自己做的准不准，如果差别很大，可以很快的找原因。非梯度稀释没试过，觉得还是按照说明书上来比较好。2、CurveExpert没用过，elisa有很多做标曲的方法吧，我常用回归方程、二次曲线和四参数方程法，一种不太好，就换种方法试试。可能你测的标曲并不好，不会很多种方法都可以用的。3、我们实验室测elisa，OD大于2.5，才认为数据不准。好像说明书上面的标曲数值有大于1的吧。4、夹心法我们实验室一般用线性方法，竞争法用四参数方程，不过上次侧过icllab公司的IgE（夹心法），他们给出的实验方法是四参数方程。我自己知道的也不多。

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missoulmate

用户

谢谢你啦，这个问题已经克服掉了，种种因素，归结起来就是稀释倍数的问题。夹心法的标曲我也用的是四参数法做的了，不然怕到时候审稿什么的人家不认再。再次感谢

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