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Signosis/Rat Inflammation ELISA Strip (Colorimetric)/EA-1201/1 Ea
  • Signosis/Rat Inflammation ELISA Strip (Colorimetric)/EA-1201/1 Ea

 

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Cytokinesareextracellularsignalingproteinsproducedbydifferentcelltypesthatactontargetcellstomodulatediversecellularfunctions,suchasrecruitingspecificcelltypestothesiteofinflammation,increasingtheactivationandsurvivalofimmunecells,orsuppressingcellularactivity.Inflammationistheresponseoftissuetoinjury.Duringbothacuteandchronicinflammatoryprocesses,avarietyofsolublefactorsareinvolvedinthecellularinfiltrate,thecellularactivation,andthesystemicresponsestoinflammation.Cytokinesaremajordeterminantsofinflammatoryresponses.Mostcytokinesaremultifunctionalmoleculesthatelicittheireffectslocallyorsystemicallyinanautocrineorparacrinemanner.CytokinesareinvolvedinextensivenetworksthatinvolvesynergisticaswellasantagoNISTicinteractionsandexhibitbothnegativeandpositiveregulatoryeffectsonvarioustargetcells.Therefore,profilingtheexpressionpatternofcytokinesprovidesavaluableinsighttotheunderlyingimmunologicalmechanisms.Signosis’RatInflammationELISAStripallowsquantitativelyprofilingandmeasuring8inflammationcytokines.

Principle:

Eachwellofthestripiscoatedwithaspecificcaptureantibodytodetectitscorrespondingcytokineinthesample.Therefore,8differentproteinscanbemeasuressimultaneously.Thetestsamplereactssimultaneouslywithtwoantibodies,resultinginthecytokinesbeingsandwichedbetweenthesolidphaseandenzyme-linkedantibodies.Afterincubation,thewellsarewashedtoremoveunbound-labeledantibodies.TheHRPsubstrate,TMB,isthenaddedandcausesabluecolorchange.ThereactionisthenterminatedwithStopSolution,resultinginayellowcolor.Theconcentrationsofoxidativestresscytokinesaredirectlyproportionaltothecolorintensityofthetestsample.Absorbanceismeasuredspectrophotometricallyat450nm.Theexpressionlevelsofthesecytokinescanbequantitativelycomparedbetweensamples.


 

 

 

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    看论坛里说四参数什么的?左边两列下面六个孔全是放标准品,求大神指教,这个应该用什么曲线?做曲线时要减去空白孔吗?是要把这两列求平均值吗?做出来的样本OD值有一部分小于空白孔,应该怎么办?在论坛里看了好多贴子,说法不一,不知道应该怎么做?**!

    0.2277520.2089240

    0.2100740.2161990

    0.2185240.2100623.9

    0.2139310.2166257.8

    0.2190630.22049415.6

    0.252340.25620631.25

    0.2834560.28338162.5

    0.3451680.360872125

    OD值OD值标准品浓度

      收起
  • 终止液是2mol/L的H2SO4,将酶破坏,蛋白变性,从而改变颜色:由蓝变黄。
  • 双抗夹心法ELISA标准曲线的问题
    大家好,我在做双抗夹心法的elisa实验,已经花了20来天了,然而标准曲线的线性一直做不好,而且不稳定。下面我把具体的实验过程说下,希望大家能给我提个建议,谢谢!
    首先我从以下数据中确定了标准品的起始稀释浓度:4.64,46.4,464,4640IU/ml对应的OD为0.55,1.178,1.086,1.168.因此我取46.4IU/ml(300ng/ml)作为标品的起始稀释浓度。然后作了关于单抗,多抗,二抗的合适稀释度的实验,我的数据如下:
    123456789
    空白0.2290.1920.2120.1540.1390.1730.2360.1770.257
    46.4iu/ml1.2421.5271.2691.9641.6281.9592.0051.8802.163
    9.28iu/ml0.9680.9501.0131.1360.8731.2461.6971.5861.769
    阴性0.1920.1760.2500.1310.1610.1540.1990.2190.244
    选取了7号组合单抗,多抗,二抗分别为1ug/ml,1ug/ml,0.5ug/ml。
    标品按照以下梯度稀释:46.423.211.65.82.91.450.725iu/ml.以下是我近来做的三组数据,都是相对空白的相对值:

    123
    46.4iu/ml0.6130.5860.851
    23.20.5240.6490.765
    11.60.3820.510.663
    5.80.3160.3850.567
    2.90.2880.3190.37
    1.450.2890.1340.303
    0.7250.1210.1460.113
    空白0.0820.0870.101
    阴性0.0820.1050.101
    似乎梯度都不明显。我现在疑惑的是我的标品浓度的设置有问题还是之前抗体的浓度选择不合适,请大家多指点,万分感谢!!!   收起
  • 表面抗原和E抗原采用的是双抗体夹心法,
    表面抗体是双抗原夹心法
    E抗体和核心抗体是竞争抑制法或间接法
  • gaochangjian7 1629396002
    http://wenku.baidu.com/view/9b2aea155f0e7cd184253638.html
  • 然然丿hqRQ 1627754402
    夹心法夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带有...   显示更多
    夹心法夹心法常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为:将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果间接法间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为:将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原。加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结。洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader)测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结加入带有酵素之抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。洗去检体与带有酵素之抗原,加入酵素受质使酵素呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少,显色也就越浅。当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。   收起
  • shhyelisa 1626890401
    方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
      1. 包被:用0.05M PH9,碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
      2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1m...   显示更多
    方法一:用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
      1. 包被:用0.05M PH9,碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
      2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
      3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml,37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
      4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
      5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
      6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
      方法二:用于检测未知抗体的间接法:
      用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30~60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。   收起
  • ELISA双抗体夹心法原理
    ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中...   显示更多
    ELISA双抗体夹心法原理
    ELISA双抗体夹心法(enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique)的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记抗体,与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。
    生物帮有相关介绍。编码RNA http://doc.bio1000.com/show-3399.html   收起
  • ELISA有些什么方法?各有啥优缺点?
  • 你是想说固相载体的包被物吧,一般双抗体夹心,固相载体包被物是待检抗原相对应的抗体。
  • 我做的是血清中IKZF3测定,由于没有现成的   显示更多
    我做的是血清中IKZF3测定,由于没有现成的试剂盒,自己从国内的CUSBIO定制的,分批订货。。前两次的标准曲线形状和公司提供的基本近似。但这一次却差太远。我做出来的近似线性,而公司提供的还是和原来的......   收起
  • 说实在 我没听说过三步法,不知道你在说什么建议楼主查询文献吧
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